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HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
1
作者
何秀霞
于源华
+1 位作者
张春兰
荀恒杰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期631-633,共3页
目的:构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法:采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将...
目的:构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法:采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将融合基因克隆入含有Ω增强子的pTΩ-TE高效的原核表达载体中,构建重组质粒pTΩ-T7SE。将pTΩ-T7SE转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导后用Western blot鉴定融合蛋白。结果:获得全长为1284bp的融合的HBV/HEV的基因片段。已构建的重组质粒pTΩ-T7SE转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为50000重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于胞质中,表达量约占全菌蛋白的30.52%。Western blot结果表明在Mr为50000处可见特异性着色带。结论:成功构建了原核表达载体pTΩ-T7SE,并表达出目的蛋白,为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。
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关键词
HBV
HEV
重组原核表达载体
二价疫苗
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职称材料
疟原虫疫苗候选蛋白pba-114320的原核表达载体构建
2
作者
雍金贵
郁春云
刘宗文
《中国科技期刊数据库 科研》
2017年第3期319-320,共2页
将疟原虫的膜表面蛋白基因pba-114320构建到原核表达载体PET32a(+)上,得到重组原核表达质粒PET32a(+)-pba-320。方法:通过化学合成的方法得到目的基因,通过使用限制性内切酶BamHI-XhoI酶切目的基因与载体,回收酶切产物,进行连接并转化...
将疟原虫的膜表面蛋白基因pba-114320构建到原核表达载体PET32a(+)上,得到重组原核表达质粒PET32a(+)-pba-320。方法:通过化学合成的方法得到目的基因,通过使用限制性内切酶BamHI-XhoI酶切目的基因与载体,回收酶切产物,进行连接并转化到感受态top10中,将阳性克隆送至测序公司进行测序,测序结果跟标准序列进行比对。结果:成功构建原核表达质粒PET32a(+)-pba-320。
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关键词
疟原虫
重组原核表达载体
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职称材料
猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化
被引量:
4
3
作者
林彦星
孙彦伟
+3 位作者
刘镇明
徐铮
鲁俊鹏
龚善中
《动物医学进展》
CSCD
2006年第12期66-70,共5页
对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE...
对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE电泳和Westernblotting对纯化产物的纯化效果及特异性进行检测,结果显示表达产物纯化良好,并能被PCV-2阳性血清识别,具有良好的抗原性。
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关键词
猪圆环病毒2型
重组原核表达载体
重组
CAP蛋白
表达
纯化
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职称材料
HBV/HEV二价抗原的载体构建与表达
4
作者
张春兰
何秀霞
+1 位作者
于源华
荀恒杰
《长春理工大学学报(自然科学版)》
2007年第4期84-86,共3页
为构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价疫苗抗原的大肠杆菌高效重组原核表达载体,采用PCR方法扩增出HBV的S基因,及HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,经过T载体连接、菌落PCR、双酶切、测序鉴定后,将这两部分重组入含有...
为构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价疫苗抗原的大肠杆菌高效重组原核表达载体,采用PCR方法扩增出HBV的S基因,及HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,经过T载体连接、菌落PCR、双酶切、测序鉴定后,将这两部分重组入含有增强子的pT-T7高效的E.coli表达载体中。构建了pT-T7SE表达载体并且表达出相应的目的蛋白。该实验结果为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。
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关键词
HBV
HEV
重组原核表达载体
二价疫苗
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职称材料
结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达
被引量:
2
5
作者
杨宏倩
李博
+1 位作者
蔡宏
朱玉贤
《动物医学进展》
CSCD
2006年第1期54-57,共4页
低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切...
低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切后分别克隆到真核表达载体pJW4303和原核表达载体pGEX-4T-1中,构成重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4,用限制性内切酶消化,PCR扩增及DNA序列分析等多种方法鉴定;并将正确构建的原核表达载体转入E.coliBL21(DE3)plysS中,IPTG诱导表达。结果表明,重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4构建成功。构建的真核重组质粒pJW-Mtb8.4即可作为结核病DNA疫苗。原核表达载体pGEX-Mtb8.4在BL21(DE3)plysS中成功表达,将表达蛋白进行纯化,作为保护性结核分支杆菌抗原以便检测DNA疫苗的免疫效果。
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关键词
结核病
Mtb8.4
重组原核表达载体
核酸疫苗
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职称材料
题名
HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
1
作者
何秀霞
于源华
张春兰
荀恒杰
机构
长春理工大学生命科学技术学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期631-633,共3页
基金
吉林省教育厅基金资助项目(20050402-5)
文摘
目的:构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法:采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将融合基因克隆入含有Ω增强子的pTΩ-TE高效的原核表达载体中,构建重组质粒pTΩ-T7SE。将pTΩ-T7SE转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导后用Western blot鉴定融合蛋白。结果:获得全长为1284bp的融合的HBV/HEV的基因片段。已构建的重组质粒pTΩ-T7SE转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为50000重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于胞质中,表达量约占全菌蛋白的30.52%。Western blot结果表明在Mr为50000处可见特异性着色带。结论:成功构建了原核表达载体pTΩ-T7SE,并表达出目的蛋白,为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。
关键词
HBV
HEV
重组原核表达载体
二价疫苗
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
疟原虫疫苗候选蛋白pba-114320的原核表达载体构建
2
作者
雍金贵
郁春云
刘宗文
机构
通用生物系统(安徽)有限公司
出处
《中国科技期刊数据库 科研》
2017年第3期319-320,共2页
文摘
将疟原虫的膜表面蛋白基因pba-114320构建到原核表达载体PET32a(+)上,得到重组原核表达质粒PET32a(+)-pba-320。方法:通过化学合成的方法得到目的基因,通过使用限制性内切酶BamHI-XhoI酶切目的基因与载体,回收酶切产物,进行连接并转化到感受态top10中,将阳性克隆送至测序公司进行测序,测序结果跟标准序列进行比对。结果:成功构建原核表达质粒PET32a(+)-pba-320。
关键词
疟原虫
重组原核表达载体
分类号
F321.4 [经济管理—产业经济]
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职称材料
题名
猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化
被引量:
4
3
作者
林彦星
孙彦伟
刘镇明
徐铮
鲁俊鹏
龚善中
机构
华南农业大学兽医学院
广东省动物防疫监督总所
出处
《动物医学进展》
CSCD
2006年第12期66-70,共5页
文摘
对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE电泳和Westernblotting对纯化产物的纯化效果及特异性进行检测,结果显示表达产物纯化良好,并能被PCV-2阳性血清识别,具有良好的抗原性。
关键词
猪圆环病毒2型
重组原核表达载体
重组
CAP蛋白
表达
纯化
Keywords
PCV-2
recombinant prokaryot ic expression vector
recombinant Cap
expression
purification
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
HBV/HEV二价抗原的载体构建与表达
4
作者
张春兰
何秀霞
于源华
荀恒杰
机构
长春理工大学生命科学技术学院
出处
《长春理工大学学报(自然科学版)》
2007年第4期84-86,共3页
基金
省教育厅项目(20050402-5)
文摘
为构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价疫苗抗原的大肠杆菌高效重组原核表达载体,采用PCR方法扩增出HBV的S基因,及HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,经过T载体连接、菌落PCR、双酶切、测序鉴定后,将这两部分重组入含有增强子的pT-T7高效的E.coli表达载体中。构建了pT-T7SE表达载体并且表达出相应的目的蛋白。该实验结果为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。
关键词
HBV
HEV
重组原核表达载体
二价疫苗
Keywords
HBV
HEV
recombinant prokaryotic expression vectors
bivalent vaccine
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达
被引量:
2
5
作者
杨宏倩
李博
蔡宏
朱玉贤
机构
北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室
出处
《动物医学进展》
CSCD
2006年第1期54-57,共4页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2001AA213141)
文摘
低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切后分别克隆到真核表达载体pJW4303和原核表达载体pGEX-4T-1中,构成重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4,用限制性内切酶消化,PCR扩增及DNA序列分析等多种方法鉴定;并将正确构建的原核表达载体转入E.coliBL21(DE3)plysS中,IPTG诱导表达。结果表明,重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4构建成功。构建的真核重组质粒pJW-Mtb8.4即可作为结核病DNA疫苗。原核表达载体pGEX-Mtb8.4在BL21(DE3)plysS中成功表达,将表达蛋白进行纯化,作为保护性结核分支杆菌抗原以便检测DNA疫苗的免疫效果。
关键词
结核病
Mtb8.4
重组原核表达载体
核酸疫苗
Keywords
tuberculosis
Mtb8.4 recombinant prokaryotic expression vectors
DNA vaccine
分类号
S852.618 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
何秀霞
于源华
张春兰
荀恒杰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
下载PDF
职称材料
2
疟原虫疫苗候选蛋白pba-114320的原核表达载体构建
雍金贵
郁春云
刘宗文
《中国科技期刊数据库 科研》
2017
0
下载PDF
职称材料
3
猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化
林彦星
孙彦伟
刘镇明
徐铮
鲁俊鹏
龚善中
《动物医学进展》
CSCD
2006
4
下载PDF
职称材料
4
HBV/HEV二价抗原的载体构建与表达
张春兰
何秀霞
于源华
荀恒杰
《长春理工大学学报(自然科学版)》
2007
0
下载PDF
职称材料
5
结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达
杨宏倩
李博
蔡宏
朱玉贤
《动物医学进展》
CSCD
2006
2
下载PDF
职称材料
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