减毒沙门氏菌用作重组口服活疫苗载体的研究

减毒沙门氏菌不仅被用于预防沙门氏菌的感染，还可以作为异源抗原的载体，构建成表达其它病原体保护性抗原的活疫苗，通过口服免疫获得相应局部免疫、体液免疫和细胞免疫反应。本文从其减毒机理。

减毒沙门氏菌为载体的草鱼口服生长抑素DNA疫苗的构建及其稳定性

将生长抑素(SS)和乙肝表面抗原基因(HBsAg)融合后,插入真核表达载体pcDNA3,构建成pcDNA3-SS,再转化减毒沙门氏菌(S.typhimurium,dam-和phop-),构建了以减毒沙门氏菌为载体的生长抑素口服DNA疫苗ZJ111/pcDNA3-SS,并通过体外传代、灌服草鱼检验了ZJ111/pcDNA3-SS的侵袭力及体外和侵入草鱼体内过程中的稳定性。对草鱼肝脏和脾脏分离菌的生化特性检验和特异性PCR鉴定表明,ZJ111/pcDNA3-SS能很好地侵入草鱼体内;对在Amp+、Amp-平板上传5、10代和灌服7d后草鱼肝、脾脏分离的减毒菌抽提重组质粒进行PCR和酶切鉴定表明,减毒菌中的重组质粒在体外和侵入草鱼体内过程中具有较好的稳定性。

携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白活减毒鼠伤寒沙门菌口服重组DNA疫苗株的构建

目的:构建携带人幽门螺杆菌(H pylori)中性粒细胞激活蛋白(HP-NAP)基因(napA)的重组活减毒鼠伤寒沙门菌口服DNA 疫苗. 方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化活减毒鼠伤寒沙门菌. 结果:重组质粒经PCR及双酶切,证实成功构建了携带HP-NAP基因的重组真核表达质粒pIRES-napA,后者成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL7207.所克隆435bp napA与GenBank中SS1-napA核苷酸和蛋白质的同源性均为98%. 结论:成功构建并鉴定了携带HP-NA2P基因的重组活减毒鼠伤寒沙门菌口服DNA疫苗,为多价抗H pylori口服DNA疫苗的研制奠定了基础.

表达乙型脑炎病毒E蛋白重组减毒沙门菌活载体疫苗株的构建

目的:构建表达乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株。方法:克隆JEV E基因,将其插入表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-E,将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-E);鉴定重组菌E蛋白的表达,测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性,以及小鼠的免疫试验和血清中和试验。结果:酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE检测有目的蛋白条带;Western印迹证实表达的E蛋白能与猪抗JEV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可较稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用,安全可靠;小鼠口服重组菌免疫,ELISA检测产生了抗JEV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。结论:构建了能稳定表达JEV E蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-E),为研究乙型脑炎口服基因工程疫苗奠定基础。

用沙门菌作为重组活疫苗载体的研究进展

随着对粘膜免疫机理的进一步认识 ,近年来口服活疫苗的研究越来越受重视 ,尤其是对口服减毒重组活疫苗的研究。本文对胞内侵袭性沙门菌减毒类型及机理、重组活疫苗中外源抗原表达系统的启动子优化、外源抗原的稳定表达和定位表达的研究进展作一综述 。

沙门菌载体重组疫苗的研究进展

目前,大多数疫苗都采用皮下或肌肉注射,可以诱导有效的血清免疫,但通常无法诱导黏膜抗体（sIgA）的产生。皮下或肌肉注射导致动物产生较大的应激反应,采食量下降,影响动物生长繁殖。实际生产中的不规范免疫操作可能导致病原微生物在个体问的人为传播而引发疾病。

以减毒沙门氏菌作为重组疫苗载体的研究进展

用减毒沙门氏菌作为重组疫苗的载体具有安全、免疫方式类似自然感染途径等优点，有关研究日益广泛，可供作肠道疾病及多种细菌、病毒及真核微生物疾病重组疫苗的研制。本文介绍常用沙门氏菌载体的种类、表达及应用现状和有待克服的问题。

减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展

活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体。现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功。文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述。

多组分重组减毒沙门疫苗菌对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用

目的 利用人类幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染的小鼠模型研究多组分重组减毒沙门疫苗菌对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用。方法 将二级C5 7BL/ 6小鼠随机分成 6组 ,通过灌胃方法分别给予生理盐水 (A组 )、PBS(B组 )、减毒鼠伤寒沙门菌SL32 6 1(C组 )、重组减毒鼠伤寒沙门菌pTrc99A -ureB +pGSTag -katA(D组 )、重组减毒鼠伤寒沙门菌pTrc99A -ureB +pTrc99A -HPaA(F组 )及重组减毒鼠伤寒沙门菌 pTrc99A -ureB +pGSTag -katA +pTrc99A -HPaA(F组 )。免疫后 4周 ,予Hp进行攻击 (A组不攻击 )。攻击菌量 10 7CFU/只 ,灌胃 2次 ,每日 1。再 4周后处死动物 ,取胃组织分别行尿素酶试验、改良Giemsa染色及定量细菌培养 ,观察Hp定植情况。行HE染色观察胃粘膜组织炎症情况。取脾组织行淋巴细胞增殖试验。结果 A组小鼠Hp定植密度为 0 ,B组为 9 4 9× 10 6CFU/ g胃组织 ,C组为 1 4 2× 10 6CFU/ g胃组织 ,D组、E组和F组小鼠分别为 2 92× 10 5CFU/g、5 5 1× 10 5CFU/g和 2 16× 10 5CFU/g胃组织 ,C组、D组、E组和F组与A组和B组相比定植密度均明显降低 (P <0 0 5 )。免疫组与对照组胃粘膜均无明显炎症反应。免疫组脾淋巴细胞增殖试验阳性。结论 口服多组分重组减毒沙门疫苗菌对小鼠Hp感染具有一定免?

1株asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌作为核酸疫苗载体的构建与鉴定(英文)

目的利用载体-宿主平衡致死系统,将1株香港分离的野生型沙门氏菌(S129)构建为减毒核酸疫苗载体。方法以细菌生化反应和血清学方法鉴定S129为鼠伤寒沙门氏菌;以λ-RED同源重组方法靶向敲除S129株的asdA基因,并以卡那霉素抗性基因代替;通过菌落PCR鉴定后挑取阳性克隆asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌(asdAΔS129),在含2,6-二氨基庚二酸(2,6-diaminopimelic acid,DAP)或无DAP的LB培养基中培养,与野生株S129对比生长曲线以验证asdAΔS129构建的成功;以S129和asdAΔS129攻击BALB/c小鼠验证asdAΔS129减毒情况;结果菌落PCR鉴定得到阳性克隆,asdAΔS129必需外源性添加DAP方能生长;asdAΔS129不能致死BALB/c小鼠,得到成功的减毒;结论成功将1株野生型沙门氏菌构建成asdA缺陷型减毒核酸疫苗载体,并在体外和体内实验中验证,为下一步的疫苗呈递和肿瘤治疗实验提供了合适的载体。

研制沙门菌重组弱毒疫苗载体的新技术

制造基因编码的重组保护性抗原的重组弱毒沙门菌疫苗（RASV）载体，应具有一些特殊的性质，这些特性使疫苗口服接种后在胃肠道经受种种压力后能存活下来，以便定居淋巴样组织而不引起疾病症状，进而导致诱导长期的保护性免疫应答。作者最近介绍了为达此目的延长其体内衰减、延长其体内抗原合成的方法，这些方法使RASVs有效地定居到淋巴样组织，并作为合成诱导较高保护性免疫应答抗原的工厂。

减毒鼠伤寒沙门氏菌载体在兽用疫苗中的运用

减毒鼠伤寒沙门氏菌可以作为重组疫苗研究中真核表达载体。其原理是将免疫原基因片段连接到某种真核质粒中,然后将质粒导入减毒鼠伤寒沙门氏菌,构建针对该特异病原的重组活疫苗。本文介绍了减毒鼠伤寒沙门氏菌作为DNA载体,在动物细菌、病毒和支原体重组活疫苗中的最新运用成果,为兽用的重组DNA疫苗的研究提供参考。

携带幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗的构建

目的 构建含幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(ureB)基因重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗。方法 抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)技术从基因组DNA扩增ureB基因,克隆入pUCmT载体,检测ureB基因序列,经过酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应进行鉴定。重组载体pIRES ureB转入减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,再次转入SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性。通过脂质体法将构建好的重组载体pIRES ureB转染COS 7细胞,SDS PAGE Western 印迹法检测pIRES ureB表达蛋白的免疫原性。结果 扩增出长约1700 bp的ureB基因,测序结果表明扩增出的ureB基因与基因库Hp ureB序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实ureB基因克隆入真核表达载体pIRES,并成功构建了Hp ureB基因的减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,重组核酸疫苗稳定,并且Western印迹法检测到特异性的蛋白条带。结论 构建了具有免疫反应性的Hp UreB减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,为进一步探索其体内的免疫作用奠定了基础。

减毒沙门菌携带CWP2-S基因抗贾第虫口服疫苗的免疫原性

构建重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S,对其免疫效果进行检测。酶切连接法构建重组质粒p VAX1-CWP2-S,以电击转染的方式转入减毒沙门菌SL7207。体外连续培养检测重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S对质粒p VAX1-CWP2-S的携带稳定性;以重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1作为对照,经口服喂饲的方式免疫清洁级雌性BALB/c小鼠,8周后处死,检测各组试验鼠血清中和小肠灌洗液中特异性Ig G和SIg A的水平。结果是重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S连续培养168 h后,质粒携带率为90%;口服免疫小鼠8周后,与对照组相比,重组减毒沙门菌SL7207/p VAX1-CWP2-S免疫组血清特异性Ig G抗体增高约4.4倍,小肠灌洗液中特异性SIg A抗体增高约6.67倍。表明重组CWP2-S减毒沙门菌株具有良好的免疫原性。

表达HCV核心蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服免疫小鼠的研究

构建了丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白原核表达质粒pQE-HCV,转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,SDS-PAGE和Western blot检测到该重组菌能表达3种分子量的HCV核心蛋白,以该重组菌作为口服型活疫苗灌胃接种BALB/c小鼠,检测到小鼠产生的抗HCV核心蛋白IgG及迟发型超敏反应、T细胞增殖反应和细胞毒性T淋巴细胞反应,结果表明该重组菌能有效诱导免疫应答,尤其能高效诱导细胞免疫应答,这为研制高效免疫、成本低廉、接种方便的HCV疫苗提供了一个新的可行途径。

重组减毒单核细胞增多性李斯特菌作为疫苗载体在抗肿瘤中的研究进展

将细菌疫苗用于肿瘤的治疗和预防已取得多方面的进展,单核细胞增多性李斯特菌(LM)能在专职吞噬细胞和非专职吞噬细胞内生存繁殖,可同时引起机体的细胞免疫和体液免疫。将外源性肿瘤特异性抗原导入减毒LM,可以显著诱导抗肿瘤的细胞免疫应答,是非常有效的疫苗载体。文章主要从具有胞内茵特殊优势的单核细胞增多性李斯特菌的生物学特性、做为抗肿瘤疫苗载体的优点等方面的研究进展进行了阐述。

减毒猪霍乱沙门菌C500作为基因疫苗运载体的研究现状

基因疫苗具有众多的优点,被誉为疫苗研究的第3次革命,但是在畜牧生产的使用中存在系列亟待解决的问题,其中关键的问题就是如何将基因疫苗表达质粒导入到动物机体免疫细胞,减毒胞内寄生菌的应用很好的解决这一问题。目前我国仔猪副伤寒弱毒活疫苗使用的基本都是C500株,以其作为猪群重要传染病基因疫苗运载体的应用研究具有重要临床应用价值,对猪霍乱沙门菌疫苗株C500作为基因疫苗运载体的研究现状予以概述。

phoP/phoQ激活的启动子应用于以减毒沙门菌为载体的疫苗系统

pho P/pho Q为沙门菌的双成分调节子 ,pho Q可感受巨噬细胞中一些因子的改变 ,显示组氨酸激酶活性 ,使 pho P氨基端特定的残基磷酸化 ,磷酸化后的 pho P结合于特定的启动子 ,诱导或抑制一系列基因的表达。受 pho P/pho Q激活的 pag C基因的启动子 ppag C能有效地驱动外源基因在鼠伤寒杆菌中的表达 ,激发宿主抗该外源蛋白的抗体。使用 ppag C可克服在减毒沙门菌中因外源基因的组成性表达而带来的低表达和表达质粒不稳定的问题。因此 ,ppag C在以减毒沙门菌为载体的疫苗研制中具有很好的应用前景。