脾内微量注射免疫法制备抗重组可溶性组织因子单克隆抗体

目的制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法,以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫,分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞,融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养;建立了3株稳定分泌TF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-C3、2-G9、3-H9;进而在小鼠体内诱生腹水,并用rprotein A亲合层析法纯化;经鉴定后用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记于其中一株单抗上,建立夹心ELISA法测定正常人血浆中的TF含量。结果纯化的单抗用SDS-PAGE测定纯度,在Mr为150 000左右呈现一条带;Western blot测定显示1-C3、2-G9、3-H9分泌的单抗可特异地识别Mr为47 000的TF,经免疫球蛋白(Ig)类和亚类鉴定实验证实3株单抗均为IgG1;用夹心ELISA法检测正常人血浆中的TF含量为(130±80)pg/mL。结论用脾内微量注射法成功制备抗TF单克隆抗体及ELISA测定TF含量方法的建立,为TF的制备纯化和检测奠定了基础,也使TF的临床深入化研究成为可能。

缺血性心脏病患者血浆凝血因子Ⅶ与血脂的关系

研究各种类型缺血性心脏痫（IHD）患者血浆凝血因子Ⅶ（FⅦ）水平的改变并探讨其与血浆脂质的关系。活化凝血因子Ⅶ（FⅦa）测定采用重组可溶性组织因子一期法，凝血因子Ⅶ活性（FⅦc）测定采用凝血一期法，凝血因子Ⅶ总抗原（FⅦag）采用ELISA法。结果：稳定型心绞痛（SA）组、不稳定型心绞痛（UA）组、陈旧性心肌梗死后心绞痛（OMI）组、急性心肌梗死（AMI）组的FⅦa均显著高于正常组，各组间差异均有统计学意义，