非小细胞肺癌组织EMSY、PIDD表达与同源重组修复基因的相关性及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中EMSY转录抑制因子(EMSY)、p53诱导的死亡结构域蛋白1(PIDD)表达与同源重组修复基因表达的相关性及临床意义。方法选择2022年1月—2023年4月河北北方学院附属第一医院呼吸与危重症医学科诊治NSCLC患者80例。采用实时荧光定量PCR检测癌组织及癌旁组织中EMSY、PIDD表达与同源重组修复基因人乳腺癌易感基因1(BRCA1)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1),核糖核苷酸还原酶亚单位1(RRM1)表达。Pearson相关分析EMSY、PIDD表达与同源重组修复基因表达的相关性;分析EMSY、PIDD表达与NSCLC临床病理相关参数的关系及在NSCLC诊断中的价值。结果NSCLC癌组织中EMSY、PIDD、BRCA1、ERCC1、RRM1 mRNA相对表达量均高于癌旁组织(t/P=30.176/<0.001,27.821/<0.001,25.075/<0.001,16.680/<0.001,25.610/<0.001)。NSCLC癌组织中EMSY、PIDD mRNA与BRCA1、ERCC1、RRM1 mRNA表达均呈正相关(r/P=0.654/<0.001,0.712/<0.001,0.584/<0.001;0.724/<0.001,0.661/<0.001,0.563/<0.001)。低分化程度、有淋巴结转移及TNM分期Ⅲ期NSCLC癌组织EMSY、PIDD mRNA表达分别显著高于高中分化程度、无淋巴结转移及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期NSCLC癌组织(t/P=13.693/<0.001,13.380/<0.001,12.197/<0.001;10.289/<0.001,11.130/<0.001,9.405/<0.001)。EMSY、PIDD mRNA及两项联合诊断NSCLC的AUC分别为0.834、0.802、0.906,两项联合诊断的AUC大于单一指标(Z=4.751、5.257,P均<0.001)。结论EMSY、PIDD在NSCLC癌组织中表达升高,与同源重组修复基因表达及不良临床病理特征有关,两者联合有助于NSCLC的诊断。

基因重组人骨形成蛋白-2与珊瑚/聚乳酸复合修复骨质缺损的实验研究

目的 观察生物珊瑚、聚乳酸和rhBMP_2合成人工骨 (复合骨 )修复兔颅骨缺损后复合骨的变化情况。方法 选择 2 4只新西兰兔 ,随机分成 2组 ,每组 12只 ,建立兔颅骨缺损标准模型。植入复合骨 ,用珊瑚 聚乳酸作为对照。术后 4、8、12周每组各处死 4只动物 ,取出植入体进行扫描电镜观察和机械强度测定。结果 复合骨在植入缺损后 ,不仅在植入体周边部有骨组织长入 ,而且在整个植入体内均有新骨形成 ,即出现多中心成骨。复合骨在同一时间点的成骨量明显多于对照组 ,随时间推移 ,成骨量递增。在植入前 ,两材料间的抗压强度无明显差异 ;在植入后 ,两植入体的抗压强度则差异显著 ,复合骨明显高于同期的对照组。结论 生物珊瑚、聚乳酸和rhBMP_2合成人工骨在体内以传导成骨和诱导成骨双重机制完成骨修复 ,且有良好的机械强度 ,作为植骨材料具有良好的应用前景。

复合基因重组人骨形成蛋白-2异种骨的研制及成骨活性研究

目的 研制新型具有诱导成骨活性的异种骨植骨材料。方法 在重组合异种骨 (RBX)基础上 ,以基因重组人骨形成蛋白 - 2 (rh BMP- 2 )取代从牛皮质骨中提取的牛 BMP,与去抗原牛松质骨载体 (BCB)复合 ,制成复合 rh BMP- 2的异种骨 (rh BMP- 2 / BCB) ;将 4周龄雄性 BAL B/ C小鼠 6 0只 ,随机分为实验组和对照组 ,于实验组小鼠左股部肌袋植入 rh BMP- 2 / BCB骨粒 ,对照组小鼠左股部肌袋植入 BCB骨粒 ,术后 7、14及 2 1天取材 ,通过组织学、骨计量学方法检测 rh BMP- 2 / BCB的诱导成骨活性。结果 1实验组术后 7天在小鼠肌袋可诱导软骨生成 ,14天形成编织骨 ,2 1天改建成板层骨并形成大量骨髓 ;对照组于术后各时间点均未见有软骨及骨形成。 2实验组的碱性磷酸酶活性和钙含量均高于对照组 ,具有统计学意义 (P<0 .0 1)。结论 rh BMP- 2 / BCB具有较好的骨诱导能力 。

重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料的制备与性能

背景:制备具有天然骨结构,能够结合生物因子的骨修复材料成为研究的热点。目的:制备重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料,评估其释放、活性及诱导异位成骨的能力。方法:首先制备含有胶原结合域的重组人骨形态发生蛋白2,然后将胶原结合域与骨修复材料中的胶原相结合,经过冷冻干燥制备重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料,采用ELISA法检测重组人骨形态发生蛋白2的体外释放情况。将C2C12细胞滴加到重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料上(重组人骨形态发生蛋白2剂量分别为0.25,0.5,1μg/块),72 h后检测细胞碱性磷酸酶活性。将含0,2,5,10μg重组人骨形态发生蛋白2的重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料分别埋置于SD大鼠肌肉内,埋置2,4周后,检测磷酸酶活性与新骨生长情况。将CY7标记的重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料埋置于SD大鼠后肢肌肉窝内,观察重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料的稳定性。结果与结论:重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料内的重组人骨形态发生蛋白2在45 d内基本没有释放;C2C12细胞的碱性磷酸酶活性随复合材料中重组人骨形态发生蛋白2剂量的升高而升高;重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料植入体内的稳定性较好,碱性磷酸酶活性、异位成骨随重组人骨形态发生蛋白2剂量的增加而升高。结果表明,重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料保证了重组人骨形态发生蛋白2的稳定性,使其不易释放,提高了其异位诱导成骨能力。

人牙本质磷蛋白功能片段的真核表达

目的 本研究旨在利用分子生物学技术真核表达包含功能区的人DPP片段。方法 构建了人DPP蛋白5′端基因片段的杆状病毒表达质粒pFastBacHb -hDPP -N ,经BH1 0BAC转座反应后感染昆虫细胞sf9,进行重组蛋白的表达。结果 经2～3代后,重组病毒产生明显的CPE ,人DSPP蛋白特异性多克隆抗体Westernblot鉴定,结果显示重组病毒感染3代毒sf9细胞的裂解物中在约1 7KD位置上出现了特异性的反应条带。结论 表明杆状病毒系统可表达人DPP基因片段。为进一步通过对人DPP功能片段的研究揭示DPP在牙齿发育和牙髓修复中的作用及其机制奠定基础。

靶向抑制高表达HRR蛋白增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性

同源重组修复(HRR)主要通过修复哺乳动物细胞中外源或内源性的DNA双链断裂,维持正常细胞基因组的完整性与稳定性,从而阻止细胞癌变。有研究发现高表达HRR蛋白的肿瘤细胞具有较强的损伤修复活力,通过修复放化疗诱导的DNA损伤,抑制凋亡途径以及活化细胞增殖信号通路,使其对放化疗产生耐受性,肿瘤细胞得以存活。这类HRR蛋白在肿瘤细胞中起到了癌基因的功效,维持了肿瘤细胞基因组的稳定性,促进了肿瘤的发生、发展,因而肿瘤细胞中高表达的HRR蛋白成为了肿瘤精准化治疗的潜在靶点。通过药物诱导HRR蛋白过度表达不仅能促进肿瘤细胞的凋亡,而且可以进一步提高肿瘤细胞对放化疗的敏感性。

抗鸡Rad51蛋白多克隆抗体制备成功

Rad51蛋白在双链断裂的DNA修复的同源重组中发挥重要作用。因而其过量表达在细胞内的基因操作中被用于在提高基因同源重组的效率。当前在鸡中还未有针对该蛋白的特异性抗体。厦门大学刘宽灿等对鸡的Rad51进行了体外表达与纯化，并制备了cRad51抗体，为该蛋白质在鸡细胞中的功能研究及探讨其用于鸡细胞中提高同源重组的研究提供有效工具。

克罗诺杆菌种间鉴定recN基因方法建立

目的建立一种基于重组和修复蛋白基因(recN)的克罗诺杆菌种间鉴定方法,将不同来源的克罗诺杆菌分离株鉴定到种。方法扩增recN基因全长序列,选取不同长度的recN基因片段,用MEGA 4.0软件对克罗诺杆菌8个参考菌株进行聚类分析,确定克罗诺杆菌种间鉴定可信度高、序列较短的片段;设计并合成该片段的引物,以8株参考菌株作为参照,构建44株克罗诺杆菌实验菌株的聚类分析图,并用生化反应鉴定对聚类结果进行佐证。结果基于recN基因上一段640 bp的片段可对克罗诺杆菌不同种的菌株进行区分;以8株参考菌株在聚类图上的位置作为参考,根据遗传距离的远近,44株分离菌中有37株阪崎克罗诺杆菌,3株丙二酸盐阳性克罗诺杆菌,3株苏黎世克罗诺杆菌,1株尤尼沃斯克罗诺杆菌,与生化反应鉴定结果一致。结论该方法与生化鉴定和基于recN全基因方法相比简便快速,PCR扩增后,一次测序反应就可以将克罗诺杆菌鉴定到种。

抑制共济失调毛细血管扩张突变基因RAD3相关蛋白逆转卵巢癌SKOV3细胞顺铂耐药

目的 探讨共济失调毛细血管扩张突变基因RAD3相关蛋白（ATR）水平和活性对卵巢癌SKOV3细胞顺铂（DDP）敏感性的影响.方法 以ATR-siRNA转染SKOV3细胞48 h下调ATR蛋白水平,以VE-821预处理SKOV3细胞12 h下调ATR激酶活性.采用CCK8实验检测细胞活性,Western blot法检测ATR、磷酸化组蛋白2A变异体（γ-H2AX）和p-ATR蛋白表达,荧光共聚焦检测细胞γ-H2AX和DNA双链修复蛋白（RAD51）的表达,碱性慧星实验检测细胞内DNA双链损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布.结果 DDP可明显引起SKOV3细胞DNA双链损伤,并激活ATR激酶通路.ATR-siRNA可显著下调ATR蛋白水平.CCK8检测结果显示,NC-siRNA组和ATR-siRNA组经DDP作用48 h后,其半数抑制浓度（IC50）值分别为72.12 μmol/L和41.25 μmol/L（P＜ 0.05）.荧光共聚焦检测结果显示,40 μmol/L DDP处理24 h后,ATR-siRNA组RAD51募集明显减少.碱性彗星实验结果显示,与NC-siRNA组比较,ATR-siRNA组能够引起更长的拖尾效应,DNA双链损伤明显增加.DMSO组和VE-821组经DDP作用48 h后,其IC50值分别为75.32 μmol/L和45.64 μmol/L（P＜0.05）.荧光共聚焦检测结果显示,40 μmol/L DDP处理24 h后,VE-821组RAD51募集明显减少.碱性彗星实验结果显示,与DMSO组比较,VE-821组能够引起更长的拖尾效应,DNA双链损伤明显增加.细胞周期检测结果显示,40 μmol/L DDP作用于卵巢癌SKOV3细胞24h后,其G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例分别为71.2％、13.4％和15.4％,而对照组分别为54.2％、21.3％和24.4％,DDP引起明显的G0/G1期阻滞.ATR-siRNA组和VE-821组经DDP作用后,其G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例分别为43.2％、20.4％、36.4％和40.2％、22.5％、37.3％,干扰ATR表达和活性后能够逆转DDP引起的细胞周期阻滞。结论 抑制ATR可以影响SKOV3细胞同源重组修复过程,增加DNA双链损伤,缓解G0/G1期周期阻滞,增加其对DDP的敏感性。

pQE-TGF-β1原核表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达

目的 :为了解人的TGF β1基因的功能及生物学活性 ,制备具有生物学活性的TGF β蛋白。方法 :用基因重组技术构建pQE30 TGF β1原核表达载体 ,并在M1 5大肠杆菌中进行表达 ,利用Ni NTA琼脂柱纯化TGF β1单体 ,通过复性得到双体蛋白 ,利用MTT方法对复性的蛋白进行活性测定。结果 :经酶切鉴定及测序结果证明 pQE30载体上成功地插入了TGF β1成熟肽基因片段。pQE30 TGF β1原核表达载体在大肠杆菌中得到了高效表达 ,表达量约占全菌蛋白的 2 0 % ,表达得TGF β1单体蛋白经纯化后进行SDS PAGE电泳显示均得到了一条蛋白带 ,分子量为 1 5KD左右。MTT测活证明TGF β1单体蛋白经复性后具有良好的活性。结论 :pQE30 TGF β1原核表达载体的构建及重组TGF β1蛋白的制备 ,为深入了解TGF β1的生物学功能奠定了基础。

高迁移率族蛋白B1基因在结肠癌组织中的表达

高迁移率族蛋白盒（HMG）超家族可分为HMGB、HMGN、HMGA3个家族，其中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）参与各种重要的生物过程，包括转录、DNA修复、V（D）J重组、分化、生长发育和细胞外信号。国内外研究发现，在乳腺癌、黑色素瘤心、胃肠间质细胞瘤、胰腺癌、前列腺癌和急性成髓细胞白血病等肿瘤组织中HMGB1呈高表达。

透明质酸复合BMP-2转染骨髓间充质干细胞修复兔桡骨干骨缺损

目的评价携带人BMP-2(hBMP-2)基因重组腺病毒(Adv-hBMP-2)转染的骨髓间充质干细胞(BMSCs)与透明质酸(HA)复合构建的组织工程化骨对骨缺损的修复效果。方法取兔骨髓行BMSCs培养及Adv-hBMP-2的体外转染,建立桡骨干1.5cm缺损模型。20只兔(40侧)分四组(n=10):第一至三组分别注射Adv-hBMP-2转染细胞+HA、Adv-hBMP-2转染细胞、单纯HA,第四组为空白对照。结果(1)注射后第12周,第一组8侧骨缺损中6侧完全愈合,皮质骨形成,部分髓腔再通;第二组8侧骨缺损中有3侧完全愈合;第三、四组骨缺损均未愈合。X线疗效评分各组差异有统计学意义。(2)第一、二组4～8周时骨缺损内有多量新生骨痂形成,12周时部分髓腔再通;第三、四组4～8周时骨缺损处为纤维组织填充,12周时骨缺损未愈合,两骨端硬化。第一、二组之间新生骨小梁面积差异有统计学意义。(3)第一组的最大压缩载荷和弹性模量分别为(211.54±63.58)N和(113.36±56.47)MPa,第二组为(126.74±53.13)N和(98.91±63.36)MPa,差异有统计学意义。平均最大压缩载荷与正常桡骨之比:前者为75.86%,后者为45.45%。结论HA复合Adv-hBMP-2转染BMSCs构建的组织工程化骨可以修复兔桡骨干骨缺损,HA是一种安全的、有效的组织工程载体。

PD-1/PD-L1阻断治疗及其疗效预测研究进展

肿瘤突变负荷是筛选PD-1/PD-L1阻断治疗中潜在受益患者的生物标志物,新生抗原高负荷肿瘤行PD-1/PD-L1阻断治疗能获得更好的疗效,本文介绍了PD-1/PD-L1阻断治疗及其疗效预测的研究进展。