重组基因活菌冻干因子联合深度水解奶粉治疗牛奶蛋白过敏所致迁延性腹泻的临床效果

目的观察重组基因活菌冻干因子联合深度水解奶粉治疗牛奶蛋白过敏所致迁延性腹泻的效果。方法选取2017年6月至2018年9月我院收治的120例牛奶蛋白过敏所致迁延性腹泻患儿为研究对象,随机将其分为A、B组,每组60例。A组给予深度水解奶粉喂养治疗,B组联合使用重组基因活菌冻干因子治疗。比较两组的治疗效果。结果治疗3月后,两组患儿Ig E水平及牛奶过敏指数均降低,且B组低于A组(P<0.05);两组患儿腹泻、胀气、肠绞痛消失时间无显著差异(P>0.05);A组患儿的复发率显著高于B组(P<0.05)。结论重组基因活菌冻干因子联合深度水解奶粉治疗小儿因牛奶蛋白过敏所致的迁延性腹泻效果显著,值得临床推广。

重组基因活菌冻干因子、深度水解奶粉联合应用于牛奶蛋白过敏所致迁延性腹泻的效果

目的探讨重组基因活菌冻干因子、深度水解配方奶粉联合应用于婴儿牛奶蛋白过敏(ICMPA)所致迁延性腹泻患儿的临床效果。方法选取许昌市妇幼保健院2019年9月至2021年4月收治的126例ICMPA所致迁延性腹泻患儿的临床资料,予以随机数字表法分为对照组与研究组,每组63例。对照组实施深度水解配方奶粉治疗,研究组采用深度水解配方奶粉联合重组基因活菌冻干因子治疗,记录两组临床疗效、治疗前后生长发育相关指标变化情况、不良反应发生情况。结果研究组治疗总有效率为95.24%(60/63),对照组为74.60%(47/63),差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗前体质指数、肩胛下角皮褶厚度、肱三头肌皮褶厚度等生长发育相关指标测量值比较,差异均未见统计学意义(P均>0.05),治疗后研究组体质指数、肩胛下角皮褶厚度、肱三头肌皮褶厚度等生长发育相关指标测量值均优于对照组,数据组间、组内比较差异均有统计学意义(P均<0.05);研究组不良反应发生率为12.70%(8/63),对照组为26.98%(17/63),差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用重组基因活菌冻干因子与深度水解配方奶粉联合治疗ICMPA所致迁延性腹泻患儿效果显著。

重组基因活菌冻干因子联合深度水解奶粉治疗牛奶蛋白过敏所致迁延性腹泻的效果

为了深入研究对牛奶蛋白过敏所致迁延性腹泻患儿实施重组基因活菌冻干因子联合深度水解奶粉治疗干预后,患儿临床效果。方法:选取我院2019年6月至2021年6月期间收治的牛奶蛋白过敏所致迁延性腹泻患儿共98例,将其随机分组,给予重组基因活菌冻干因子联合深度水解奶粉治疗干预措施组为研究组,给予深度水解奶粉干预措施组为参照组,研究组和参照组各49例患儿。对比两组患儿临床效果。结果:干预期结束后,研究组牛奶蛋白过敏所致迁延性腹泻患儿临床效果显著优于参照组。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:临床对牛奶蛋白过敏所致迁延性腹泻患儿实施重组基因活菌冻干因子联合深度水解奶粉治疗干预,可有效改善患儿临床效果,故方案值得推广。

双歧杆菌三联活菌联合重组人干扰素α2b辅助治疗小儿特应性体质毛细支气管炎的效果

目的观察双歧杆菌三联活菌联合重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)辅助治疗小儿特应性体质毛细支气管炎的效果。方法选择2019年3月—2021年6月蚌埠市第一人民医院收治的特应性体质毛细支气管炎患儿81例,按照随机数字表法分为观察组41例和对照组40例。在常规治疗基础上,对照组给予rhIFNα2b治疗,观察组在对照组基础上给予双歧杆菌三联活菌治疗。比较2组临床疗效,治疗前后症状评分、炎性因子水平、血氧饱和度和呼吸频率指标,急性发作持续时间、喘息发作次数及不良反应。结果观察组治疗总有效率为92.68%,高于对照组的75.00%(χ^(2)=4.699,P=0.030)。治疗后,2组咳嗽、喘息、哮鸣音及三凹征评分低于治疗前,且观察组低于对照组(P均<0.01);2组嗜酸粒细胞计数与肿瘤坏死因子-α、超敏C反应蛋白水平低于治疗前,转化生长因子-β1水平高于治疗前,且观察组降低/升高幅度大于对照组(P<0.05或P<0.01);2组血氧饱和度高于治疗前,呼吸频率低于治疗前,且观察组升高/降低幅度大于对照组(P<0.05或P<0.01)。观察组急性发作持续时间短于对照组,哮喘发作次数少于对照组(P均<0.01)。观察组不良反应总发生率为17.07%,对照组不良反应总发生率为10.00%,2组比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.863,P=0.353)。结论双歧杆菌三联活菌联合rhIFNα2b辅助治疗小儿特应性体质毛细支气管炎的临床疗效较好,可更好调节炎性因子水平,改善呼吸频率,缩短疾病急性发作时间及减少哮喘发作次数,且不良反应发生率低。

华支睾吸虫成虫转录辅激活因子基因在原核细胞中的克隆、表达及其生物功能分析

目的 构建华支睾吸虫成虫转录辅激活因子 (transcriptionalcoactivator ,TC)基因 (TC基因 )原核重组质粒 ,进行原核表达、鉴定及生物功能分析。 方法 根据TC基因已知序列设计 1对引物 ,从华支睾吸虫成虫cDNA文库中扩增TC基因片段 ;将目的基因进行聚合酶链反应 (PCR) ,其产物和空质粒 pGEX 4T 1、pET3 0a (+ )同时用限制性内切酶BamHⅠ、SalⅠ双酶切 ,纯化回收后连接并转化大肠埃希菌 (E .coliBL2 1)。将构建的重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC分别经双酶切、PCR及测序鉴定后在大肠埃希菌BL2 1中诱导表达。用十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)鉴定其表达效果 ,用亲和层析法纯化重组质粒pET3 0a (+ ) TC表达产生的组氨酸重组蛋白 (His TC)。 结果 构建了TC基因原核重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC。SDS PAGE结果表明TC基因在大肠埃希菌BL2 1系统获得高效表达 ,其重组蛋白分子量与理论值相符。Westernblotting结果表明重组质粒 pGEX 4T 1 TC表达的谷胱甘肽硫转移酶 (GST)重组蛋白(GST TC)可被华支睾吸虫免疫兔血清识别 ,具有免疫反应性。纯化的TC基因的组氨酸 (His)重组蛋白 (His TC)经SDS PAGE显示单一条带。

重组人肝细胞生长因子α的纯化与活性测定

目的纯化重组人肝细胞生长因子α(rhHGFα)包涵体,复性并测定其活性。方法大肠杆菌中表达的rhHGF琢以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的25%。离心分离包涵体,用8mol/L尿素溶解,梯度稀释复性。经SephadexG75凝胶过滤和POROSHQ阴离子交换纯化,噻唑蓝法(MTT)测定活性。结果rhHGF琢纯度达到90%以上,其刺激肝细胞生长的活性达到rhHGF标准品的80%。结论建立了纯化rhHGF琢的技术路线,rhHGF琢具有刺激原代培养大鼠肝细胞生长的作用。

变形链球菌耐氟菌株gtfB基因失活菌株的构建

目的:构建变形链球菌(S.mutans)耐氟菌株UA159-FR中gtfB基因失活株,为研究耐氟菌株gtfB基因的功能奠定基础。方法:培养UA159-FR并以其为模板扩增gtfB基因上游、下游同源臂片段,以质粒pEGFP-N1为模板扩增kan基因;通过重叠延伸聚合酶链反应法(overlap extension polymerase chain reaction,OE-PCR)获取上述3个片段的同源重组片段;与pEASY-Blunt Cloning Vector连接形成重组质粒后,进行PCR鉴定和测序鉴定;将重组片段电转化入UA159-FR感受态细胞中得到gtfB基因失活菌株,并进行PCR鉴定。结果:经PCR鉴定和测序鉴定,含有gtfB基因重组片段的重组质粒构建成功;经PCR鉴定,UA159-FR的gtfB基因失活株构建成功。结论:成功构建了含有gtfB基因重组片段的重组质粒和S.mutans耐氟菌株UA159-FR的gtfB基因失活株,可用于gtfB基因功能的研究。

肠膜明串珠菌基因失活体系的建立

构建肠膜明串珠菌的基因失活体系。四环素抗性基因表达盒连接到pTA2 T载体上,在T载体的左右多克隆位点上分别定向插入ack(乙酸激酶)的上、下游同源臂,构建成自杀性同源重组载体,转化明串珠菌,使染色体的ack失活,得到突变型。检测突变型产乙酸的量并利用PCR验证ack失活。与原始菌株相比,突变型的乙酸产量减少49.1%;突变型的ack PCR扩增产物比原始菌株的大1200 bp左右。成功地使ack基因失活,说明肠膜明串珠菌基因失活体系的构建成功。

人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定

目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。

奥美拉唑联合双歧杆菌三联活菌治疗儿童功能性消化不良的疗效分析

目的 研究奥美拉唑和双歧杆菌三联活菌联合治疗儿童功能性消化不良(FD)对患儿临床症状其血清中降钙素基因相关肽(CGRP)、促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、瘦素(LEP)水平的影响。方法 选取2019年5月至2022年5月南京同仁医院收治的FD患儿100例,随机分为两组,各50例。对照组患儿接受双歧杆菌三联活菌治疗,观察组患儿接受奥美拉唑和双歧杆菌三联活菌的联合治疗。两组患儿均连续治疗4周。比较两组的治疗效果、临床症状消失时间、胃蠕动功能指标、血清CGRP、CRF、LEP水平及发生不良反应的情况。结果 观察组的总有效率为96.0%,显著高于对照组的84.0%(P<0.05)。观察组餐后饱胀、早饱和上腹疼痛缓解时间早于对照组(P<0.05)。治疗后,两组胃蠕动功能均有所提升,且观察组胃蠕动功能指标如ACF、ACA和MI水平均比对照组更高(P均<0.05)。治疗前,两组血清CGRP、CRF、LEP水平比较均无统计学差异(P>0.05);治疗后,这些指标在两组中均有改善,且观察组的CGRP、CRF水平比对照组低,LEP水平比对照组高(P<0.05);两组不良反应发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论 奥美拉唑和双歧杆菌三联活菌联合治疗FD患儿效果良好,有效提高治疗效果、减少症状缓解时间、改善胃蠕动功能指标及血清CGRP、CRF、LEP水平。

减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展

活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体。现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功。文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述。

黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因在甲醇毕赤酵母中的表达

将编码黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶(lip)的cDNA克隆到酵母整合型质粒pMETA上,电转化Ade缺陷型甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)PMAD16,通过MD平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDSPAGE分析和木质素过氧化物酶活力测定等方法鉴定,表明带自身信号肽的黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因(lip)在甲醇毕赤酵母中得到表达。优化其发酵培养条件,以藜芦醇为底物进行酶活测定,其酶活可达932U/L。相应发酵指数为12.94U/h·L。比出发菌株提高了24.18%。

脾氨肽口服冻干粉联合双歧杆菌四联活菌片对抗生素相关性腹泻患儿肠黏膜屏障功能及血清炎性因子水平的影响

目的 分析脾氨肽口服冻干粉联合双歧杆菌四联活菌片对抗生素相关性腹泻(AAD)患儿肠黏膜屏障功能及血清炎性因子水平的影响。方法 选取我院120例AAD患儿(2019年3月-2021年2月),依照治疗方案不同分为两组。对照组(57例)接受双歧杆菌四联活菌片治疗,观察组(63例)接受脾氨肽口服冻干粉联合双歧杆菌四联活菌片治疗,比较两组治疗效果。结果 疗效:两组总有效率对比,观察组较对照组高(P<0.05);临床症状改善情况:观察组呕吐及腹泻缓解时间、痊愈时间均较对照组短(P<0.05);肠黏膜屏障功能:治疗后,两组肠黏膜屏障功能均有所改善,且观察组血清脂多糖(LPS)、二胺氧化酶(DAO)均低于对照组(P<0.05);血清炎性因子水平:治疗后,两组血清炎性因子水平均有所改善,且观察组血清白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)水平均较对照组低,干扰素-γ(IFN-γ)较对照组高(P<0.05)。结论 脾氨肽口服冻干粉联合双歧杆菌四联活菌片治疗AAD患儿,效果显著,能有效缓解临床症状,并可改善患儿肠黏膜屏障功能、调节炎性因子水平,促进痊愈。

幽门螺杆菌BabA2／UreI融合基因减毒伤寒沙门菌重组活载体疫苗的构建与鉴定

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）由于其高感染率和高危害性成为众多科技工作者的研究重点。减毒伤寒沙门菌是近年发展起来的新型疫苗抗原投送系统，已经构建出许多应用于不同疾病的单价、双价或多价疫苗[1-4]，取得了很多令人鼓舞的成果。本研究拟采用平衡致死系统构建表达Hp粘附素BabA2基因和尿素通道蛋白UreI基因的减毒伤寒沙门菌疫苗株，为进一步探索其体内的免疫作用奠定基础。

sucA缺失型大肠杆菌菌株的构建与发酵条件优化

反式-4-羟脯氨酸在多领域具有重要应用价值。为了进一步提高反式-4-羟脯氨酸的产量,在已构建好的E. coli BL21(DE3)△putA的基础上,敲除基因sucA的同时插入密码子优化后的反式-4-羟化酶基因(hyp),并将构建好的质粒pUC19-ptrp2-hyp-vgb导入该基因敲除菌株中。之后在摇瓶水平上,单因素优化发酵条件与发酵培养基的组分,并通过正交实验进一步确定敲除菌株的培养条件。结果表明:与含有同样质粒的原菌和两种单敲除菌E. coli BL21(DE3)△sucA、E. coli BL21(DE3)△putA相比,E. coli BL21(DE3)△putA△sucA双敲除菌具有最高的全细胞酶活,大约是原菌的2.6倍;在摇瓶水平上,发酵条件优化后,以100 mmol/L的L-脯氨酸为底物进行发酵,12 h后可得到1.08 g/L的羟脯氨酸,是优化前的3.87倍。

猫白血病重组病毒疫苗效力高

格拉斯奇大学0.Jarrett等对三种猫白血病（FeLV）疫苗进行了比较研究。它们是重组亚单位疫苗Leucogen和两种灭活苗Leukocell2和Leucat。重组苗Leucogen（Virbac）含有单一亚型FeLV—A病毒的env基因编码的蛋白,其免疫原是表达于大肠埃希氏菌的FeLV表面糖蛋白gp70env的部分蛋白P45env,小猫用FeLV—A进行腹腔内攻击,Leucogen表现出明显的保护力。

注射用重组干扰素γ

注射用重组干扰素是采用生物高技术制备的产品。本品是由带有人干扰素基因的工程菌经高效表达,并经高度纯化、冷冻干燥制成的乳白色粉剂。干扰素是人体重要的细胞因子,具有免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学功能。国内外的研究和临床结果表明,重组干扰素对类风湿性关节炎、肾细胞癌、慢性肉芽肿(CGD),过敏性皮炎(AD)等疾病的疗效显著,是一种具有较高临床应用价值的治疗用药。本厂的注射用重组干扰素工艺先进。

口服鼠疫F1-V重组融合蛋白活菌疫苗的构建及免疫效果的初步研究

鼠疫耶尔森菌能产生很多由染色体或质粒编码的毒力因子，包括pgm、pst、Yops、F1抗原、V抗原等。F1和V抗原已被证实为主要保护性抗原，且存在属间保守性，F1-V融合抗原分子在免疫原性和免疫保护性上具有叠加效应，将两者联合接种可保护小鼠抵抗109峨强度攻击。在鼠疫杆菌基因组、蛋白组和功能基因组研究的基础上，F1和V是鼠疫新型疫苗研究首选的保护性抗原分子的靶标。现有鼠疫死菌苗和鼠疫活菌苗在剂型和接种方式没有黏膜保护作用，可能会因此影响疫苗的保护效果。沙门菌可有效提呈抗原到肠道的免疫系统，在肠道组织、肝脏中增殖，可持续诱导机体细胞、体液免疫和黏膜免疫。本实验通过含有asd基因的重组质粒与缺失asd基因的减毒沙门菌构成的宿主-载体平衡致死系统，在无抗生素选择压力的条件下在载体菌株中稳定表达鼠疫F1-V融合抗原蛋白，以重组菌灌胃法黏膜途径免疫小鼠检测其免疫原性，尝试研究预防肺鼠疫的口服活载体疫苗。