中国莱姆病螺旋体PD91重组外膜蛋白A的动物免疫效果分析

目的观察重组中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因型外膜蛋白A(rOspA)的动物免疫效果。方法采用纯化的rOspA作抗原,以新西兰家兔、绵羊和犬为试验动物,分不同剂量组和对照组进行免疫,用间接免疫荧光法(IFA)检测其血清特异性抗体(IgG),并进行体外中和试验。结果用rOspA免疫新西兰家兔、绵羊和犬后,其血清抗体(IgG)效价较免疫前均显著升高,其几何平均滴度为1∶169,体外中和试验表明,每毫升兔抗rOspA血清可杀灭1.0×105个莱姆病螺旋体;绵羊和犬的抗rOspA血清杀菌能力因免疫剂量的不同而不同,每毫升绵羊和犬抗rOspA血清最高可杀灭1.0×106个莱姆病螺旋体。结论rOspA有较好的免疫原性,可作为中国莱姆病rOspA亚单位疫苗的一种有效成分。

中国莱姆病螺旋体PD_(91)重组外膜蛋白C抗原性初步研究

目的 研究中国莱姆病螺旋体 PD91 重组外膜蛋白 C(r Osp C)检测莱姆病特异性抗体Ig M的效果 ,为莱姆病的早期特异性诊断提供依据。方法 r Osp C经纯化、定量后 ,用于酶联免疫吸附试验 (EL ISA) ,检测早期莱姆病患者和莱姆病疫区工人血清 Ig M,并与其他检测方法比较检测效果。结果 用 r Osp C EL ISA和全菌蛋白 Western blotting方法检测了 12例早期莱姆病患者血清 Ig M,其阳性率分别为 75 %和 6 6 .7% (P>0 .0 5 ) ;r Osp C EL ISA、全菌蛋白 EL ISA检测 98份健康人血清 Ig M,特异度分别为 10 0 %和 96 .94 % (P>0 .0 5 ) ;用 r Osp C EL ISA、全菌蛋白 EL ISA和 IFA检测 2 10例莱姆病疫区工人血清 ,其阳性率分别为 5 .2 4 %、8.5 7%和 7.6 2 % ,3种检测方法间无统计学差异 (P>0 .0 5 )。结论 r Osp C具有较好的灵敏度和特异性 ,其用于我国早期莱姆病患者的临床检测和莱姆病流行病学调查上有一定的应用价值。

坏死梭杆菌93ku重组外膜蛋白的免疫原性分析

目的探讨坏死梭杆菌原核表达93 ku外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)免疫小鼠后的反应原性和保护率。方法将构建的表达载体进行诱导表达93ku重组外膜蛋白进行诱导表达,并将其作为免疫抗原免疫15只小鼠,3次免疫后进行血清抗体效价、免疫原性和保护力检测。结果经SDS-PAGE和Western blot分析表明,该重组蛋白分子量约为93 ku,具有反应原性。第3次免疫后实验组小鼠血清抗体效价较高,动物保护率检测结果70%。结论坏死梭杆菌重组93 ku外膜蛋白能够诱导较好的免疫应答水平,为新型坏死梭杆菌亚单位疫苗的研制提供基础数据。

布鲁氏菌外膜蛋白OMP25和OMP31免疫学研究进展

布鲁氏菌病会导致家畜流产、不育等,严重损害养殖户的经济效益,同时对人类健康也产生威胁。近年布鲁氏菌病的频繁暴发对公共安全造成了巨大的威胁,因此,寻找更有效的方法来检测、预防布鲁氏菌病是关键。布鲁氏菌的外膜蛋白与布病的发病机制密切相关,其中OMP25和OMP31是布鲁氏菌的主要外膜蛋白,也是布鲁氏菌的重要毒力因子。目前,已有研究采用OMP25和OMP31评估布鲁氏菌的感染状况,并成功制造了重组外膜蛋白。本文回顾国内外学者对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25和OMP31免疫学研究现状和进展,旨在为布鲁氏菌的检测和疫苗开发提供理论支持。

利用重组外膜蛋白OMP31检测牛布氏杆菌血清抗体OMP31-ELISA方法的建立

为了研究牛布氏杆菌血清抗体快速诊断方法,试验采用PCR技术从河北省某牛场流产污物中扩增得到牛布氏杆菌外膜蛋白OMP31基因,将该基因插入原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌DE3进行诱导表达,再将表达产物重组外膜蛋白OMP31纯化后作为抗原,建立检测牛布氏杆菌血清抗体的OMP31-ELISA,并对最适反应条件进行确定,然后对从河北省部分牛场采集的150份腹泻奶牛血样进行血清抗体检测。结果表明:牛布氏杆菌OMP31蛋白成功表达,表达产物能与牛布氏杆菌免疫兔血清反应;建立的OMP31-ELISA最佳工作条件为外膜蛋白OMP31抗原的最适包被浓度2.0μg/mL,酶标抗体的工作浓度1∶400,血清稀释度1∶160,以3%明胶-PBS封闭30 min。检测的150份临床血清样本中,特异性、敏感性和符合率分别为90.91%(50/55)、95.79%(91/95)、94.00%(141/150)。说明本方法特异性强、敏感性高,快速,使用方便。

鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白诱导肉鸡免疫应答观察

用鹦鹉热衣原体 (Chlamydiapsittaci,Cps)重组主要外膜蛋白 (RecombinentMajorOuter Membraneprotein ,r MOMP)制作成油佐剂疫苗 ,经颈部皮下免疫 5d肉鸡。在免疫前 1d、免疫后 14d、2 1d和 30d分别翅静脉采血 ,以常规血凝抑制试验检测抗体效价 ;用MTT法检测全血淋巴细胞对r MOMP的特异性增殖反应 ;免疫 30d使用鹦鹉热衣原体强毒株(BJF5株 )攻毒 ,观察临床症状 ,计算病变程度和保护率。结果表明免疫 14d后产生抗体 ,效价达 4 .2 (log2 ) ,免疫后 30d效价达到 5 .0 (log2 ) ;免疫组血液T淋巴细胞对r MOMP的增殖指数明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。试验表明r MOMP在肉鸡体内可诱导对Cps特异性的体液免疫和细胞免疫应答 ,并能抵抗Cps强毒的攻击 ,显示r MOMP免疫肉鸡具有良好的免疫原性和保护性。

鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白诱导小鼠免疫应答的观察

用鹦鹉热衣原体 (Chlamydiapsittaci,Cps)重组主要外膜蛋白 (RecombinantMajorOuter Membraneprotein ,r MOMP)免疫小鼠 ,观察小鼠免疫后对r MOMP和Cps菌体蛋白的免疫应答。r MOMP皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,对照组仅注射佐剂。免疫前和第 3次免疫后 10d收集血清 ,以常规ELISA法检测抗体效价 ;MTT方法检测脾淋巴细胞对r MOMP和Cps菌体蛋白的特异性增殖反应。免疫组小鼠在免疫 38d后免疫血清中抗r MOMP的抗体效价可达 1∶2× 10 4,抗Cps菌体蛋白的抗体效价为 1∶4× 10 3 ;脾淋巴细胞对r MOMP和Cps菌体蛋白的增殖指数明显高于佐剂对照组 (p <0 .0 1,具有显著性意义。r MOMP在小鼠体内可诱导Cps特异性的体液免疫和细胞免疫应答 。

重组土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的融合表达及抗原性分析

目的:探索一种大量表达功能性土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的方法。方法:采用SignalP 3.0 Server进行信号肽预测,将土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA信号肽的基因序列(75bp)去除,将1107bp的核心序列克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。结果:构建了pET32a-fopA载体,重组蛋白FopA表达量约占菌体总蛋白量60%,Western blot分析显示重组FopA蛋白有较好的抗原性。结论:获得了高效表达FopA的pET32a-fopA表达载体,为下一步土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA应用研究奠定了基础。

黄芪多糖对沙眼衣原体重组MOMP免疫增效作用的研究

目的:探讨沙眼衣原体重组外膜蛋白(Chlamydia Trachomatis recombinant Major Outer Protein Ctr MOMP)对生殖道感染沙眼衣原体小鼠的免疫保护作用,并研究黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide APS)对其的免疫增强效果。方法:在成功构建Ct-MOMP的原核表达系统的基础上提纯r MOMP。将BALB/C小鼠分为100μl PBS组、50μgr MOMP组、50μgr MOMP+50μg Al(OH)3组、50μgr MOMP+50μg APS组、50μg r MOMP+100μg APS组、50μg r MOMP+200μg APS组。其中PBS组为阴性对照组,加有Al(OH)3组为阳性对照组,共进行3次免疫,通过检测血清和生殖道局部抗体、培养生殖道脱落细胞以及制作生殖道病理切片来观察和分析小鼠感染情况。结果:成功构建Ct-MOMP原核表达系统并提纯出r MOMP。r MOMP有着明显的免疫保护作用,带佐剂的r MOMP免疫效果明显优于单一r MOMP,且中浓度的APS免疫增强效果明显优于低浓度和高浓度的APS,与Al(OH)3组没有明显差异。结论:r MOMP对生殖道Ct感染有着明显的免疫保护作用,且中浓度的黄芪多糖对r MOMP免疫增强效果最好。

E型沙眼衣原体主外膜蛋白DNA疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫诱导出的免疫效应

目的研究沙眼衣原体主要外膜蛋白（MOMP）DNA疫苗和重组蛋白（rMOMP）疫苗联合免疫小鼠诱导出的免疫效应。方法3～4周BALB／c雌鼠60只，分5组，每组12只，于第0、2、4周通过双侧股四头肌肌注免疫相应的疫苗。通过血清IgG抗体和IFN-1含量、阴道冲洗液sIgA抗体含量、脾淋巴细胞增殖指数、迟发型超敏反应、阴道脱落细胞种植等指标进行小鼠免疫效应的测定。结果DNA蛋白联合组小鼠血清IgG抗体水平A柏5值为0．629±0．052；slgA A450值为0．379±0．052；脾淋巴细胞增殖指数为5．682±0．484；淋巴细胞培养上清液中IFN-γ含量为（1265±128）pg／ml。DNA蛋白联合组小鼠的各项指标均好于EB阳性对照组除外的其他组（P〈0．01）。结论沙眼衣原体DNA疫苗和蛋白疫苗联合免疫可以增强免疫保护效应。

沙眼衣原体外膜蛋白2重组蛋白的表达纯化和免疫性鉴定

目的表达沙眼衣原体外膜蛋白2,纯化表达产物,并对其免疫性进行鉴定。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术获得沙眼衣原体D型外膜蛋白2第167～434位氨基酸的编码基因片段,将此片段克隆于表达载体pET28b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE、蛋白印迹试验分析表达产物,亲和层析法纯化重组蛋白;重组蛋白免疫家兔以检测其免疫原性。结果重组质粒酶切分析及DNA测序证实成功构建pET28b(+)/Omp2aa167～aa434表达质粒;通过优化表达和纯化条件,获得了相对分子质量约为35.0×103纯化蛋白产物,蛋白印迹试验证实该重组蛋白能与Ct感染者阳性血清反应;ELISA法测定免疫血清特异性抗体效价在1∶1280以上。结论表达的重组外膜蛋白2aa167～aa434具有良好的免疫性。

E型沙眼衣原体重组主要外膜蛋白诱导恒河猴的交叉免疫效应

目的探讨E型重组主要外膜蛋白（rMOMP）对恒河猴诱导产生的衣原体交叉免疫应答效应。方法恒河猴分3组，每组2只，分别为佐剂蛋白组、佐剂组、对照组。于第0、2、4周双侧肱三头肌注射。末次免疫后两周，ELISA检测恒河猴血清中沙眼衣原体特异性IgG抗体和细胞因子IFN-γ，MTT法检测恒河猴淋巴细胞特异性增殖反应，观察恒河猴的迟发型超敏反应，以及恒河猴的血清抗体中和试验。结果佐剂蛋白组产生了较强的抗rMOMP反应和高水平细胞因子。淋巴细胞特异性增殖反应、迟发型超敏反应明显强于对照组，抗体中和试验蛋白佐剂组血清能抑制D／E／H／L2型沙眼衣原体生长。结论沙眼衣原体rMOMP能刺激恒河猴产生有效的交叉免疫。

鱼用哈维氏弧菌亚单位缓释微球口服疫苗的免疫效果初探

通过复乳化-溶剂挥发技术,采用生物可降解性高分子材料聚-DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)包裹哈维氏弧菌(Vibrio harveyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK,制成缓释微球颗粒疫苗,口服免疫鲫鱼,测定其血清的凝集效价和相对免疫保护率.结果表明,制备的缓释微球疫苗直径＜10μm,且以粒径＜5μm的微球居多;微球中重组外膜蛋白OmpK包裹率达78.3%.鲫鱼口服微球疫苗2周后,血清抗体水平持续上升,第5周血清凝集抗体效价可达到与佐剂注射组相当的水平(28),抗体高峰期比注射组长1～2周,且降低较慢;免疫4周后用活菌攻击,口服组具有69.4%的相对免疫保护率,而对照组死亡率高达98%.结论为采用可生物降解的缓释微球作为鱼类亚单位口服疫苗的载体系统是可行的.

19F型肺炎球菌荚膜多糖与载体蛋白P64K结合物的制备及免疫原性

目的:采用改良胺化还原法,重组B群脑膜炎球菌外膜蛋白(rP64K)作为载体蛋白,制备19F型肺炎球菌荚膜多糖(PN19F)结合物。方法:在胺化还原法的基础上,以1,6-己二酰肼(ADH)为分子臂,在碳二亚胺(EDAC)作用下衍化rP64K,蛋白衍化后再与多糖上的醛基反应,形成共轭结合。采用HPLC、电泳、免疫印迹等方法分析结合物,并将获得的结合物免疫NIH小鼠,用ELISA方法检测多糖IgG水平。结果:电泳和免疫印迹证明了结合物制备成功。动物免疫产生了高滴度的抗PN19F的抗体,并有免疫记忆发生。结论:新的结合方法和新的载体蛋白能有效提高结合效率,以本工艺制备PN19F蛋白结合疫苗是可行的。