利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-1的研究

目的利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子 1(rhIGF 1)。方法将 15kD人IGF 1(hIGF 1)前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)转移载体pBak PAK8中 ,经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后 ,通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV/IGF 1。以Bm NPV/IGF 1感染 5龄家蚕幼虫 ,分别在感染后 2 4、48、72、96、10 8、12 0h提取家蚕血淋巴液 ,以ELISA法测定不同时象家蚕血中IGF 1浓度 ,采用Western blot分析鉴定IGF 1免疫学活性 ,MTT法观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。结果ELISA测定显示 ,BmNPV/IGF 1感染家蚕幼虫后 ,72h起蚕血中IGF 1浓度随感染时间延长而逐渐增高 (19.0 9～ 2 3.36 μg/ml) ,12 0hIGF 1含量达到最高值 (2 3 .36 μg/ml) ,Western blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成 7.5kD成熟hIGF 1,并对NIH3T3细胞具有良好促增殖效应 ,其促细胞增殖能力明显优于来源于E .coli的IGF 1标准品。结论具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF

家蚕细胞和虫体产生抗人小细胞肺癌抗体

用重组昆虫病毒表达系统，在家蚕细胞和虫体表达了抗人小细胞肺癌人鼠嵌合抗体。重组病毒ｒＮＰＶＬ２，ｒＮＰＶＨ１７及双重组病毒ｒＮＰＶＬＨ１９感染的家蚕细胞和虫体血淋巴中都检测到抗体分子的表达。双重组病毒的双基因共表达部分产物可装配。ＥＬＩＳＡ分析表明抗体重轻链基因共表达产物具有比单基因表达产物高得多的与小细胞肺癌细胞免疫结合功能。

利用杆状病毒载体高效表达人胰岛素样生长因子-1及其纯化的研究

目的 :利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的重组人胰岛素样生长因子 1(rhIGF 1)。方法 :将 15kDhIGF 1前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)转移载体pBakPAK8中 ,构建重组病毒BmNPV/IGF 1。用BmNPV/IGF 1感染家蚕幼虫 ,提取家蚕血淋巴液 ,采用亲和层析法纯化rhIGF 1,ELISA法测定rhIGF 1含量 ,用SDS PAGE和Western blot分析鉴定rhIGF 1纯度及免疫学活性 ,MTT法观察其对MCF 7细胞增殖的影响。结果 :ELISA测定显示 ,BmNPV/IGF 1感染家蚕幼虫 12 0hrhIGF 1含量达最高值 ( 2 3 36 μg/ml)。rhIGF 1纯度为 4 0 % ,Western blot分析发现主要纯化产物为 7 5kD成熟hIGF 1。细胞活性刺激实验显示 ,纯化后rhIGF 1对MCF 7细胞促增殖能力明显优于来源于大肠杆菌的rhIGF 1产品。结论 :实现了具有免疫学活性及生物学活性rhIGF 1在杆状病毒表达系统的高效表达 ,并使rhIGF

零背景转座技术高效构建重组家蚕杆状病毒表达系统

【目的】获得零转座背景的基于家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)Bac-to-Bac系统,为高效经济构建重组BmNPV在家蚕体内表达目标蛋白提供新系统。【方法】利用R6Kγ作为复制子构建新的条件复制型杆状病毒转移载体pRADM,同时封闭BmNPV-Bacmid(Bm Bacmid)宿主菌(Escherichia coli BmDH10 Bac)的Tn7转座受体位点attTn7,获得新的封闭型宿主菌E.coli BmDH10 Bac△Tn7。【结果】由于pRADM无法在宿主菌E.coliBmDH10Bac中复制,封闭了attTn7位点的宿主菌也不能再和BmBacmid竞争与转移载体的重组,显著提高了转座效率。封闭宿主菌的attTn7位点,能使转座效率提高近4倍,使用条件复制型转座载体pRADM时,转座效率提高近10倍。而用pRADM转座E.coli BmDH10 Bac△Tn7时,转座阳性率为100%。避免了获得重组病毒DNA的鉴定程序,缩短了获得重组蛋白所需时间。用携带红色荧光蛋白基因DsRed的重组质粒pRADM-Red转座E.coli BmDH10 Bac△Tn7,获得重组BmBacmid转染BmN细胞,红色荧光蛋白在细胞中得到高效表达。【结论】结果表明pRADM和E.coli BmDH10 Bac△Tn7是一种零背景高效构建重组BmNPV的新系统。

蚕的新用途将成为下个世纪新产业

在8月25~28日辽宁召开的’98全国丝绸学术年会上,山东省丝绸总公司刁人其同志在介绍其优秀论文《蚕的新用途与丝绸产业结构调整》时说:“展望下个世纪,蚕的新用途会促使一个立足丝绸、越出丝绸的新产业形成,它对人类将会有更大的贡献,人们会更加感觉到蚕的存在,越来越离不开蚕.”蚕的新用途主要有: