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重组小鼠β-防御素2的纯化及其对非分型流感嗜血杆菌抗菌活性的测定 被引量:1
1
作者 姚锋 张玉泉 +4 位作者 张建林 杨益梅 王姗姗 陈程 张俊荣 《解放军医药杂志》 CAS 2016年第2期46-51,共6页
目的运用基因工程方法获得重组小鼠β-防御素2(mouse Beta Defensin 2,mBD2),体外实验观察mBD2对非分型流感嗜血杆菌(Non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi)的抑菌活性,初步探讨mBD2的杀菌机制。方法 1对工程菌Rosetta-gami(2)-p E... 目的运用基因工程方法获得重组小鼠β-防御素2(mouse Beta Defensin 2,mBD2),体外实验观察mBD2对非分型流感嗜血杆菌(Non-typeable Haemophilus influenzae,NTHi)的抑菌活性,初步探讨mBD2的杀菌机制。方法 1对工程菌Rosetta-gami(2)-p ET32a(+)/mBD2进行诱导培养,采用亲和层析法对目的蛋白进行纯化,SDSPAGE分析重组mBD2的分子量大小及表达情况。2在不同浓度的重组mBD2和不同浓度的Na Cl条件下,不同作用时间内,观察重组mBD2对NTHi的体外抗菌活性;并用二硫苏糖醇处理重组mBD2,观察构象改变对重组mBD2抗菌活性的影响。3体外建立NTHi黏附A549细胞模型,镜下观察细菌黏附情况;菌落稀释培养法观察重组mBD2对NTHi黏附A549细胞的抑制;电子显微镜进一步观察重组mBD2引起的NTHi细胞损伤。结果 1SDS-PAGE分析表明,重组菌Rosetta-gami(2)-p ET32a(+)/mBD2在分子量约4 k D处均有一条明显的表达带,与理论重组蛋白的分子量大小相符;经过酶切及纯化,每升工程菌培养物可获得约7.5 mg/L、具有较高纯度的mBD2成熟肽。2体外抗菌实验研究表明,纯化的重组mBD2体外具有明显的抗NTHi活性,培养120 min后,其最小抑菌浓度(MIC)值为40μg/ml,最小杀菌浓度(MBC)值为160μg/ml。外环境Na Cl浓度的增高及重组蛋白二硫键的破坏会抑制其抗菌活性。3成功建立了体外NTHi黏附A549细胞模型,镜下观察到NTHi能明显黏附于A549细胞表面;40μg/ml的重组mBD2与NTHi、A549细胞共同孵育2 h,NTHi的细胞黏附率显著降低,下降至2.3%;电镜下观察到,与40μg/mL重组mBD2共同孵育120 min后,NTHi菌细胞的细胞膜变得不完整,出现孔隙,有少量内容物逸出。结论重组mBD2对NTHi具有杀菌作用,其杀菌活性除受本身的浓度和构象(二硫键)影响外,还受杀菌时间、外环境中无机盐浓度的影响,主要抗菌机制是通过损伤细菌细胞膜使细胞内容物外漏而最终杀灭细菌。 展开更多
关键词 非分型流感嗜血杆菌 重组小鼠β-防御素2 抗菌活性
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猪β-防御素-2在黄曲霉毒素B1致小鼠肠道炎症损伤中的作用
2
作者 张曼 王坤丽 +4 位作者 王艳慧 李庆豪 李明 边思琦 皇甫和平 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期36-43,共8页
旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)... 旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)、pBD-2组(0.03 mg/kg pBD-2灌胃)和AFB1+pBD-2组(0.3 mg/kg AFB1灌胃28 d后再用0.03 mg/kg pBD-2灌胃28 d),试验持续56 d,通过观察小鼠肠道结构的变化以及采用qPCR和免疫荧光的方法检测炎症相关因子的表达水平。结果:与对照组相比,AFB1组小鼠的平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)均呈现显著下降趋势(P<0.05),料重比(F/G)降低,但差异不显著(P>0.05),而小鼠饲喂pBD-2以后ADG和ADFI均较AFB1组显著增加(P<0.05);HE染色结果显示,AFB1导致小鼠空肠黏膜显著损伤,并伴有严重的肠壁变薄,肠绒毛萎缩、稀疏,肠绒毛高度与隐窝深度之比、相对肠绒毛数量及肠壁厚度均显著降低(P<0.05),而使用pBD-2处理小鼠损伤模型,肠道结构可见显著恢复(P<0.05);qPCR和免疫荧光染色结果表明,AFB1处理小鼠可显著上调白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对白细胞介素-8(IL-8)的表达水平出现了下调趋势,而用pBD-2处理小鼠损伤模型后可显著下调炎症因子的表达水平,说明pBD-2对AFB1造成的肠黏膜炎症具有缓解作用。本研究结果为AFB1中毒的防控及pBD-2在畜牧生产中的应用提供了科学依据。 展开更多
关键词 β-防御-2 黄曲霉毒B1 肠道炎症 小鼠
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重组β-防御素2多肽对脓毒症大鼠肺组织细胞凋亡的影响 被引量:6
3
作者 徐笑益 石卓 +5 位作者 鲍军明 顾伟忠 姚航平 陈智 高敏 方向明 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2006年第6期600-604,共5页
目的:观察重组β-防御素2多肽预处理对脓毒症大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法:SPF级SD大鼠48只随机分成对照组和防御素组,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症模型,防御素组在CLP前48h经气管插管气道滴注107PFU重组腺病毒(含有β-防御素... 目的:观察重组β-防御素2多肽预处理对脓毒症大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法:SPF级SD大鼠48只随机分成对照组和防御素组,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症模型,防御素组在CLP前48h经气管插管气道滴注107PFU重组腺病毒(含有β-防御素2编码基因),而对照组则同法给予对照腺病毒(不含β-防御素2编码基因)。分别于CLP后0、12、36和72 h处死大鼠,取肺组织,采用透射电镜,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,采用电镜、苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化。结果:TUNEL检测显示,对照组大鼠CLP后12、36和72 h肺组织细胞凋亡指数显著增加(P<0.01);与对照组相比,防御素组CLP后相应时间点肺组织细胞凋亡指数显著降低(P<0.05)。HE染色可见,两组大鼠CLP后12、36和72 h肺泡及肺泡间质充血、水肿,炎症细胞渗出,肺泡腔不同程度狭窄。与对照组相比较,防御素组相应时间点肺组织内炎症细胞渗出减少,间质水肿减轻。结论:重组β-防御素2多肽预处理能抑制脓毒症肺组织的细胞凋亡,对急性肺损伤(AL I)具有保护作用。 展开更多
关键词 防御类/治疗应用 脓毒症/药物作用 脓毒症/病理学 细胞凋亡 疾病模型 动物 肺损伤 β-防御
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大鼠β-防御素-2的重组表达及抗菌活性检测 被引量:4
4
作者 李爱娟 张妮 陈新年 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第13期1982-1985,共4页
目的构建大鼠β-防御素-2(rBD2)基因的真核表达载体pCAGG-rBD2,并转染小鼠纤维母细胞(L929),为解决细菌耐药性问题提供进一步的实验基础。方法以大鼠肺组织总RNA为模板,采用RT-PCR的方法获得β-防御素-2基因cDNA,将其克隆到pGEM-T Easy... 目的构建大鼠β-防御素-2(rBD2)基因的真核表达载体pCAGG-rBD2,并转染小鼠纤维母细胞(L929),为解决细菌耐药性问题提供进一步的实验基础。方法以大鼠肺组织总RNA为模板,采用RT-PCR的方法获得β-防御素-2基因cDNA,将其克隆到pGEM-T Easy载体并构建含有目的片段的真核表达载体pCAGG-rBD2,经脂质体介导转染L929细胞,通过RT-PCR和Western blotting检测目的基因表达情况。结果成功克隆并构建了含有目的基因rBD2的真核表达载体pCAGG-rBD2,转染pCAGG-rBD2的细胞中检测到了rBD2基因在转录水平和蛋白水平的表达,其细胞培养的上清液对金黄色葡萄球菌具有杀灭作用。结论防御素在真核表达系统的成功表达,为进一步开发高效能杀灭耐药性致病微生物的多肽类新药提供实验基础和理论依据。 展开更多
关键词 鼠β-防御-2 基因转染 真核表达 生物活性
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木犀草素对神经性疼痛模型大鼠MCP-1/CCR2信号轴的影响
5
作者 姜开洋 董莉丽 +1 位作者 王艳荣 杨旭 《山东中医药大学学报》 2024年第5期587-595,共9页
目的:探讨木犀草素调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴,对神经性疼痛(NP)模型大鼠神经胶质细胞激活和免疫炎症的影响。方法:采用坐骨神经慢性压迫损伤法构建大鼠NP模型。将大鼠按随机数字表法分为模型组、阿魏... 目的:探讨木犀草素调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴,对神经性疼痛(NP)模型大鼠神经胶质细胞激活和免疫炎症的影响。方法:采用坐骨神经慢性压迫损伤法构建大鼠NP模型。将大鼠按随机数字表法分为模型组、阿魏酸钠组及木犀草素低、中、高剂量组,每组12只;另选择同期12只大鼠为假手术组。各组大鼠腹腔注射及灌胃相应药物,每天1次,连续14 d。测定大鼠机械性缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL);实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫组织化学法检测脊髓中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)mRNA及蛋白表达;流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4^(+)、CD8^(+)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脊髓病理损伤情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测脊髓中MCP-1、CCR2蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠MWT、TWL、CD4^(+)T细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值降低,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8^(+)T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,木犀草素低、中、高剂量组及阿魏酸钠组大鼠MWT、TWL、CD4^(+)T细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值升高,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8^(+)T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达降低,且木犀草素作用效果呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:木犀草素具有抗炎、增强免疫、抑制胶质细胞活化,缓解NP的作用,其作用机制可能与抑制MCP-1/CCR2信号轴的激活有关。 展开更多
关键词 木犀草 单核细胞趋化蛋白-1/CC趋化因子受体2信号轴 神经性疼痛 神经胶质激活 免疫应答
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重组人β防御素-2基因对支气管肺发育不良新生鼠肺泡及肺血管发育的影响 被引量:2
6
作者 杨娇娇 陈翠娥 +3 位作者 孙媛媛 郭金余 狄天伟 张希希 《浙江医学》 CAS 2019年第22期2389-2393,2407,I0006,共7页
目的研究重组人β防御素-2(humanβdefensin-2,h BD2)对高氧诱导支气管肺发育不良(BPD)新生鼠肺泡及肺血管发育的影响。方法将48只新生SD大鼠随机分为空气组、高氧组、空载体组和h BD2组,每组12只。大鼠暴露于90%高氧箱内14d建立BPD模型... 目的研究重组人β防御素-2(humanβdefensin-2,h BD2)对高氧诱导支气管肺发育不良(BPD)新生鼠肺泡及肺血管发育的影响。方法将48只新生SD大鼠随机分为空气组、高氧组、空载体组和h BD2组,每组12只。大鼠暴露于90%高氧箱内14d建立BPD模型,h BD2组于第4天气管穿刺注入1×10^7/ml含有h BD2编码基因的重组腺病毒25μl,空载体组注入等量空载体腺病毒。于第7、14天采集肺组织标本,q PCR检测肺组织h BD2 m RNA表达;比较各组大鼠肺组织形态学变化,测定肺泡辐射状计数(RAC)和平均内衬间隔(MLI);免疫组化测定肺组织血管内皮生长因子(VEGF)表达,ELISA法测定肺组织炎症因子TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、IL-10表达水平。结果梯度稀释法测定病毒滴度为1×10^9/ml,用稀释液稀释100倍得到1×10^7/ml。在大鼠出生后第7、14天,与h BD2组比较,空气组、高氧组、空载体组大鼠hBD2 m RNA表达水平均明显为低,差异均有统计学意义(均P<0.05);第7、14天,高氧组和空载体组大鼠的RAC、MLI、AOD值、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6和IL-10的表达水平与空气组、h BD2组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。HE染色及免疫组化染色结果显示高氧暴露后大鼠肺泡及肺血管发育受阻,h BD2组大鼠肺泡和肺血管发育改善。结论h BD2基因治疗可促进高氧诱导BPD新生鼠的肺泡及肺血管发育,并减轻肺部炎症。 展开更多
关键词 人Β防御-2 支气管肺发育不良 高氧 肺泡 血管内皮生长因子 炎症
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大鼠β-防御素rBD-2的分子克隆及其在皮肤组织的诱导表达 被引量:8
7
作者 陈新年 黄宁 +1 位作者 吴琦 王伯瑶 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第4期441-444,共4页
从大鼠皮肤提取总 RNA,以 P1 5′→ 3′TTCAGTCATGAGGATCCATTAC和 P2 5′→ 3′GGTTCTTGGTCTTTTTATCTAC引物 ,采用 RT- PCR技术扩增得到一 c DNA片段 ,经核苷酸序列测定 ,并根据其推导的氨基酸序列与人 β-防御素 - 2和大鼠 β-防御素 ... 从大鼠皮肤提取总 RNA,以 P1 5′→ 3′TTCAGTCATGAGGATCCATTAC和 P2 5′→ 3′GGTTCTTGGTCTTTTTATCTAC引物 ,采用 RT- PCR技术扩增得到一 c DNA片段 ,经核苷酸序列测定 ,并根据其推导的氨基酸序列与人 β-防御素 - 2和大鼠 β-防御素 - 1进行同源性比较 ,结果显示 ,该 c DNA片段编码的氨基酸序列具高度同源性 (其成熟肽与 h BD- 2的同一性为 5 0 % ,相似性为 32 % ) ,均含 6个典型的半胱氨酸 ,这表明所克隆的 c DNA为大鼠 β-防御素 - 2亚类 ,因此命名为 r BD- 2。大鼠 β-防御素 - 2基因在大肠杆菌感染性损伤皮肤组织中的表达明显增强 ,与人 h BD- 2的表达相似 ,能够被诱导表达。以上结果提示 ,β-防御素 - 2可能是皮肤组织对感染性损伤的防御反应所产生的重要免疫介质。 展开更多
关键词 β-防御 rBD-2 CDNA 皮肤感染
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大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究 被引量:6
8
作者 周慧 黄宁 +1 位作者 吴琦 王伯瑶 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2003年第3期451-454,共4页
β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β-防御素 - 2 (r BD2 )重组质粒 p BK- CMV- r BD2和 p CDNA- 3.1- Myc- His(+) - r BD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测... β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β-防御素 - 2 (r BD2 )重组质粒 p BK- CMV- r BD2和 p CDNA- 3.1- Myc- His(+) - r BD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到 r BD2 - His融合蛋白基因 m RNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β-防御素 - 2 p BK- CMV- r BD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒 p BK-CMV- r BD2气道转染与对照相比可显著提高肺组织对绿脓杆菌的清除率 (n(8,p(0 .0 1)。本研究表明 β-防御素基因气道转染可提高呼吸道天然抗感染防御功能 ,可能在呼吸道感染的防治实践中具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 β-防御-2 基因气道转染 抗感染 防御功能 气管 肺组织 呼吸道感染
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重组人β-防御素-2基因的植物表达载体的建立 被引量:4
9
作者 蔡绍晖 余懋群 +3 位作者 杨晓鹃 杜军 黄宁 王伯瑶 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期385-389,共5页
目的 运用植物转基因技术 ,探索构建表达人类 β-防御素 - 2 ( h BD- 2 )的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法 将 C端带 myc和 6x His双标记的重组 h BD- 2基因插入植物真核表达载体 p CAMBIA13 0 4中 ,构建 C端带 m yc和 6x Hi... 目的 运用植物转基因技术 ,探索构建表达人类 β-防御素 - 2 ( h BD- 2 )的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法 将 C端带 myc和 6x His双标记的重组 h BD- 2基因插入植物真核表达载体 p CAMBIA13 0 4中 ,构建 C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2植物真核表达载体 rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His。利用此载体转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,经卡那霉素进行抗性基因筛选和 PCR检测 ,确定根癌农杆菌的阳性克隆。重组 h BD- 2通过转化阳性的根癌农杆菌被导入小麦幼胚愈伤组织细胞 ,经潮霉素进行抗性基因筛选 ,获得抗性愈伤组织。结果 酶切分析、PCR验证和 DNA测序等证据表明 :C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2已被正确地插入 p CAMBI-A13 0 4载体中 ,并位于 Ca MV 3 5 S与 Nos终止子之间 ,提示重组 h BD- 2 / His基因的植物表达载体 rp CAMBI-A13 0 4/ h BD- 2 / His已被成功构建。卡那霉素抗性基因筛选和 PCR检测显示 :rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His已成功转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,阳性克隆菌株已获得。潮霉素抗性筛选结果提示 :h BD- 2基因被导入小麦幼胚愈伤组织细胞。结论 本研究为进一步培育 h BD- 展开更多
关键词 重组β-防御-2基因 植物表达载体 植物转基因技术 可能性 技术路线
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重组水蛭素-2脂质体的制备及大鼠鼻腔给药药代动力学 被引量:9
10
作者 张玉杰 王筱亮 +1 位作者 吴建梅 陈明霞 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期801-804,共4页
目的:为了提高重组水蛭素-2(rHV2)鼻腔给药的生物利用度,研制rHV2脂质体并对其理化性质和大鼠经鼻给药后药代动力学特点进行研究。方法:以逆相蒸发法制备rHV2脂质体;通过研究rHV2脂质体的包封率、粒径、稳定性来考察其理化性质;将... 目的:为了提高重组水蛭素-2(rHV2)鼻腔给药的生物利用度,研制rHV2脂质体并对其理化性质和大鼠经鼻给药后药代动力学特点进行研究。方法:以逆相蒸发法制备rHV2脂质体;通过研究rHV2脂质体的包封率、粒径、稳定性来考察其理化性质;将制备的rHV2脂质体鼻腔给予大鼠,用呈色肽法测定不同时间血浆中rHV2的浓度,通过3p87程序拟合药代动力学参数。结果:用该法制备的脂质体包封率约为76.95%,平均粒径为168.3nm,分布在24-286 nm,相对峰宽±0.47,稳定性较好;药代动力学研究表明,rHV2脂质体较rHV2生理盐水溶液的鼻腔吸收明显增加。结论:将rHV2制备成脂质体可明显增加鼻腔给药的生物利用度。 展开更多
关键词 重组水蛭-2(rHV2) 脂质体 鼻腔给药 药代动力学
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大鼠不同发育阶段β-防御素-2基因在肺组织的表达研究 被引量:4
11
作者 周慧 黄宁 +2 位作者 陈新年 吴琦 王伯瑶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期226-229,共4页
目的 :探讨大鼠 β -防御素 - 2基因在肺组织表达的发育调控。方法 :根据Genbank大鼠 β -防御素- 2的cDNA序列 ,设计一对特异引物。采用RT -PCR技术在大鼠不同发育阶段的肺组织总RNA中 ,扩增其特异cDNA片段 ,并进行DNA序列测定。借助Ge... 目的 :探讨大鼠 β -防御素 - 2基因在肺组织表达的发育调控。方法 :根据Genbank大鼠 β -防御素- 2的cDNA序列 ,设计一对特异引物。采用RT -PCR技术在大鼠不同发育阶段的肺组织总RNA中 ,扩增其特异cDNA片段 ,并进行DNA序列测定。借助Genbank中BLAST程序 ,将从该cDNA序列推导的氨基酸序列与人的hBD -2和大鼠的rBD - 1做相似性分析。结果 :从足月胎鼠、出生 8h和 4d以及成年大鼠相同重量肺组织所提取的总RNA中 ,均扩增出一条密度相同、长度约为 2 2 0bp的cDNA片段。在所推导氨基酸序列中与hBD - 2氨基酸相同率为48 6 % (17/ 35 ) ,与rBD - 1氨基酸残基的相同率为 31% (11/ 35 )。其成熟分子链长 35个氨基酸残基 ,含 β -防御素共有的且排列次序相同的 6个典型的半胱氨酸和其它保守氨基酸残基。结论 :本实验表明不同发育阶段大鼠肺组织均表达β - 防御素 - 2mRNA 。 展开更多
关键词 免疫学 肺组织 基因表达 内源性抗生 β-防御-2
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重组鸭β-防御素-2对多重耐药性大肠杆菌攻毒雏鸡的治疗效果研究 被引量:4
12
作者 严霞 韩小凤 +3 位作者 马静云 谢青梅 毕英佐 张辉华 《中国家禽》 北大核心 2016年第11期55-58,共4页
试验旨在研究重组鸭β-防御素-2(DAvBD2)对多重耐药性大肠杆菌攻毒雏鸡的治疗效果。经测定多重耐药性大肠杆菌对15日龄黄羽肉鸡的最小致死量为4×10~8cfu/m L。将100只15日龄黄羽肉鸡随机分为5组,每组20只。A组作为健康对照组,不... 试验旨在研究重组鸭β-防御素-2(DAvBD2)对多重耐药性大肠杆菌攻毒雏鸡的治疗效果。经测定多重耐药性大肠杆菌对15日龄黄羽肉鸡的最小致死量为4×10~8cfu/m L。将100只15日龄黄羽肉鸡随机分为5组,每组20只。A组作为健康对照组,不攻毒,也不用给药;B组作为攻毒对照组,多重耐药性大肠杆菌攻毒,但不给药;C、D、E三组为治疗组,多重耐药性大肠杆菌攻毒2 h后,分别肌内注射200、250、300μg的重组DAvBD2,连用3 d。结果显示:最小致死量多重耐药性大肠杆菌攻毒后,B组死亡率是100%;C组死亡率70%、存活率30%、治愈率为20%;D组死亡率10%、存活率90%、治愈率70%;E组死亡率为0、存活率100%、治愈率80%。电镜观察发现,多重耐药性大肠杆菌经重组DAvBD2作用后,大肠杆菌细胞外膜外翻、凹凸不平、起泡,甚至出现孔洞,导致菌体内容物外泄。表明重组DAvBD2对感染多重耐药性大肠杆菌的雏鸡有较好的治疗效果,在临床治疗有很好的应用价值。 展开更多
关键词 重组β-防御-2 大肠杆菌 治疗效果
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猪防御素基因pBD-2在大肠杆菌中的重组和融合表达 被引量:5
13
作者 徐海涛 马立保 +2 位作者 何启盖 廖冰麟 任芬芬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第5期101-104,共4页
哺乳动物防御素是动物机体在抵御病原微生物的防御反应中产生的一类重要的抗菌肽物质,具有十分广泛的抗菌谱,在先天免疫上起重要作用。本研究根据已报道的pBD-2基因cDNA序列,合成了3条基因片段(1、2、3)。片段1、2和片段2、3各有15个碱... 哺乳动物防御素是动物机体在抵御病原微生物的防御反应中产生的一类重要的抗菌肽物质,具有十分广泛的抗菌谱,在先天免疫上起重要作用。本研究根据已报道的pBD-2基因cDNA序列,合成了3条基因片段(1、2、3)。片段1、2和片段2、3各有15个碱基互补配对,PCR扩增延伸得到pBD-2基因,将pBD-2基因克隆至原核表达载体pGEX-KG,成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出pBD-2融合蛋白。pBD-2基因的成功表达为进一步研究其抗菌活性打下了基础。 展开更多
关键词 β-防御-2 原核表达 融合蛋白
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人β防御素-2与前列腺癌特异性膜抗原嵌合蛋白真核表达质粒构建及其诱导的小鼠特异性免疫应答 被引量:3
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作者 李明 孙艳 +3 位作者 冯云 吴琦 黄宁 王伯瑶 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期283-287,共5页
探索人β防御素2 (h BD- 2 )和前列腺特异性膜抗原(PSMA)共表达重组核酸疫苗针对前列腺癌的免疫治疗。研究以pc DNA3.1为载体,构建重组质粒pc DNA3.1/PSMA和pc DNA3.1/h BD- 2 - PSMA,通过RT- PCR和免疫组化检测其表达。免疫小鼠后,进... 探索人β防御素2 (h BD- 2 )和前列腺特异性膜抗原(PSMA)共表达重组核酸疫苗针对前列腺癌的免疫治疗。研究以pc DNA3.1为载体,构建重组质粒pc DNA3.1/PSMA和pc DNA3.1/h BD- 2 - PSMA,通过RT- PCR和免疫组化检测其表达。免疫小鼠后,进行血清中抗体检测,CD4 +、CD8+ T淋巴细胞数目测定及CTL 特异性杀伤作用检测。结果显示构建的质粒转染COS- 7细胞后能表达目的基因,免疫小鼠后能在体内持久表达,可以诱导产生特异性抗体,能有效的刺激T细胞增生,诱导特异性CTL 反应。当以h BD- 2作为免疫佐剂时,CTL 活性更强。本研究成功的构建了含PSMA的表达质粒,免疫小鼠可以诱导出有效的体液和细胞免疫。 展开更多
关键词 人Β防御2 前列腺特异性膜抗原 核酸疫苗 免疫小鼠 前列腺癌 质粒构建 特异性免疫应答 防御 真核表达 嵌合蛋白
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重组人β-防御素-2基因在昆虫细胞的转染表达 被引量:3
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作者 蔡绍晖 杜军 +1 位作者 黄宁 王伯瑶 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期832-835,共4页
目的 探索杆状病毒表达系统 (BEVS)高效表达人 β-防御素 - 2 (h BD- 2 )的可行性及其技术路线。方法 利用特异性引物经 PCR扩增 ,从重组质粒 rpc DNA3.1/h BD- 2 /myc- His中扩增出完整重组 h BD- 2 /His基因片段。将此片段插入转移... 目的 探索杆状病毒表达系统 (BEVS)高效表达人 β-防御素 - 2 (h BD- 2 )的可行性及其技术路线。方法 利用特异性引物经 PCR扩增 ,从重组质粒 rpc DNA3.1/h BD- 2 /myc- His中扩增出完整重组 h BD- 2 /His基因片段。将此片段插入转移质粒 p Ac GHL T- A的多克隆位点中 ,构建成重组转移载体 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His。用该重组转移载体和多角体病毒 Ac NPV DNA共转染草地夜蛾细胞 (Sf2 1) ,二者在细胞内经过同源重组形成重组病毒 r Ac NPV/h BD- 2 /His。用终点稀释分析法检测感染上清重组病毒的感染效率。采用 Western印迹法通过特异性抗 - His抗体检测细胞及上清 h BD- 2 /His的表达。结果 目的基因 h BD- 2 /His正确地插入 BEVS系统的转移载体。经 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His和 Ac NPV DNA共转染的 Sf2 1细胞有较高滴度的重组病毒 r Ac NPVh BD- 2 /his存在。被共转染的 Sf2 1细胞的可溶性蛋白 ,在相对分子质量约 4 7.5× 10 3处有强反应条带显示 ,其大小与根据测序结果所推测的 h BD- 2融合肽相对分子质量接近。培养上清分别在相对分子质量约 4 0× 10 3和 30× 10 3处有强反应条带显示。结论 可利用 BEVS系统作为高效表达重组 h BD- 2的生物反应器。 展开更多
关键词 人类β-防御-2基因 基因重组 杆状病毒表达系统 草地夜蛾细胞
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重组鸭β-防御素-2对肉鸭生长性能的影响 被引量:7
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作者 朱锦兰 郑庆森 +6 位作者 张辉华 谢青梅 马静云 毕英佐 孙宝丽 李辰 李倩妞 《饲料研究》 CAS 北大核心 2012年第9期5-6,共2页
试验旨在研究鸭β-防御素-2制剂对肉鸭生长性能的影响。将试验雏鸭分为5组,每组4个重复,每重复50只鸭。A组为基础饲粮(不含任何抗生素);B组为基础饲粮+抗生素;C组为基础饲粮+重组鸭β-防御素-2制剂(300 g/t);D组为基础饲粮+重组鸭β-防... 试验旨在研究鸭β-防御素-2制剂对肉鸭生长性能的影响。将试验雏鸭分为5组,每组4个重复,每重复50只鸭。A组为基础饲粮(不含任何抗生素);B组为基础饲粮+抗生素;C组为基础饲粮+重组鸭β-防御素-2制剂(300 g/t);D组为基础饲粮+重组鸭β-防御素-2制剂(450 g/t);E组为基础饲粮+重组鸭β-防御素-2制剂(600 g/t)。结果表明:50日龄肉鸭末质量,C组比A和B组分别高4.09%和3.10%,均具有显著差异。日均增质量,C组比A和B组分别高4.17%和3.25%,差异均显著。日均采食量,E组比D组高6.49%,差异显著。料重比,C组比A、B和E组分别低3.05%、3.05%和5.71%,差异显著;D组比A、B和E组分别低3.91%、3.91%和6.54%,差异显著。结果表明:重组鸭β-防御素-2制剂对肉鸭生长性能均有正面效果,但添加不同剂量的效果有差异。 展开更多
关键词 β-防御-2 肉鸭生长性能
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葡萄籽原花青素提取物对心肌梗死大鼠肾素-血管紧张素系统及AQP2蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 郭华 武报佳 +4 位作者 邢慧敏 赵睿 孙波 马冬 张丽娜 《中西医结合心脑血管病杂志》 2024年第1期62-67,共6页
目的:探讨葡萄籽原花青素提取物(GSPE)对心肌梗死大鼠肾素血管紧张素-系统及水通道蛋白2(AQP2)表达的影响。方法:将55只无特定病原体(SPF)级Sprague-Dawley(SD)大鼠按照随机数字表法分为健康组、模型组、辛伐他汀组、GSPE低剂量组及GSP... 目的:探讨葡萄籽原花青素提取物(GSPE)对心肌梗死大鼠肾素血管紧张素-系统及水通道蛋白2(AQP2)表达的影响。方法:将55只无特定病原体(SPF)级Sprague-Dawley(SD)大鼠按照随机数字表法分为健康组、模型组、辛伐他汀组、GSPE低剂量组及GSPE高剂量组,每组11只。除健康组外其余大鼠均采用冠状动脉结扎法制备心肌梗死模型,建模成功后,GSPE低剂量组、高剂量组大鼠分别灌胃100 mg/kg、400 mg/kg葡萄籽原花青素溶液,辛伐他汀组灌胃40 mg辛伐他汀溶液。苏木精-伊红(HE)染色后观察心肌组织形态;末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端转移酶标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;超声心动图监测心功能;放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血浆肾素活性(PRA)、醛固酮水平;免疫印迹法检测心肌组织中AQP2、B细胞淋巴瘤/白血病2号基因(Bcl-2)及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白水平。结果:与健康组比较,模型组大鼠左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)升高,左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短分数(LVFS)降低(P<0.05);与模型组比较,GSPE低剂量组、GSPE高剂量组及辛伐他汀组LVEDD、LVESD降低,LVEF、LVFS升高(P<0.05),GSPE低剂量组、GSPE高剂量组间比较差异有统计学意义,而GSPE高剂量组与辛伐他汀组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与健康组比较,模型组大鼠AngⅡ、PRA、醛固酮升高(P<0.05);与模型组比较,GSPE低剂量组、GSPE高剂量组及辛伐他汀组AngⅡ、PRA、醛固酮降低(P<0.05)。健康组、模型组、GSPE低剂量组、GSPE高剂量组及辛伐他汀组的心肌细胞凋亡率分别为(5.11±0.33)%、(46.22±3.97)%、(28.46±3.77)%、(15.42±2.33)%及(16.34±2.57)%,各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与健康组比较,模型组大鼠心肌组织中AQP2、Caspase-3蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);与模型组比较,GSPE低剂量组、GSPE高剂量组、辛代他汀组大鼠心肌组织中AQP2、Caspase-3蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05)。结论:GSPE对心肌梗死有保护作用,可改善心功能水平,减少心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调控AQP2蛋白表达有关。 展开更多
关键词 心肌梗死 葡萄籽原花青提取物 水通道蛋白2 -血管紧张系统 实验研究
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β-防御素2在实验性大鼠牙周炎口腔龈上皮、颊黏膜上皮及腮腺导管上皮的表达 被引量:3
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作者 许丽华 徐莉 +3 位作者 李彬 杨冬茹 武海春 董福生 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2012年第12期1217-1220,共4页
目的:探讨β-防御素2在大鼠牙周炎模型口腔龈上皮、颊黏膜上皮和腮腺导管上皮的表达变化及与牙周炎发展的关系。方法:利用结扎法建立大鼠上颌第一磨牙牙周炎模型并设对照组,于第6周取实验牙及牙周组织、相对颊黏膜和腮腺组织,制备组织切... 目的:探讨β-防御素2在大鼠牙周炎模型口腔龈上皮、颊黏膜上皮和腮腺导管上皮的表达变化及与牙周炎发展的关系。方法:利用结扎法建立大鼠上颌第一磨牙牙周炎模型并设对照组,于第6周取实验牙及牙周组织、相对颊黏膜和腮腺组织,制备组织切片,免疫组化染色法检测防御素2在口腔龈上皮、颊黏膜上皮、腮腺导管上皮的表达并行免疫组化评分和统计学分析。结果:β-防御素2主要表达于口腔龈上皮和颊黏膜上皮的棘层和颗粒层以及腮腺的导管上皮细胞。在口腔龈上皮的表达为牙周炎组显著低于对照组(P<0.01),在颊黏膜上皮的表达为牙周炎组显著高于对照组(P<0.01),而在腮腺导管上皮的表达牙周炎组和对照组无显著差异。结论:牙周炎症时β-防御素2在口腔龈上皮、颊黏膜上皮和腮腺导管上皮的分布各有不同的变化,提示在牙周炎进展过程中不同部位口腔上皮对牙周化学屏障改变的影响不同。 展开更多
关键词 牙周炎 β-防御2 口腔上皮系统 免疫组织化学染色
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大肠杆菌感染对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的负相调节作用 被引量:2
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作者 陈新年 黄宁 +1 位作者 吴琦 王伯瑶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期83-85,I005,共4页
目的 :探讨细菌对大鼠 β -防御素 - 2 (rBD - 2 )基因的表达调控。 方法 :将大肠杆菌E .coliML -35p和绿脓杆菌ATCC 2 785 3大鼠气管内接种 ,于 2 4h后提取肺组织RNA ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法和Northernblot检测大鼠 β -... 目的 :探讨细菌对大鼠 β -防御素 - 2 (rBD - 2 )基因的表达调控。 方法 :将大肠杆菌E .coliML -35p和绿脓杆菌ATCC 2 785 3大鼠气管内接种 ,于 2 4h后提取肺组织RNA ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法和Northernblot检测大鼠 β -防御素 - 2基因的表达变化。 结果 :气管内接种大肠杆菌 2 4h后使大鼠肺组织 β -防御素- 2mRNA的表达受到显著抑制 ,绿脓杆菌对其基因的表达却没有抑制作用。结论 :大肠杆菌感染可负相调节大鼠肺组织rBD - 2mRNA的表达。 展开更多
关键词 肺感染 基因表达 肠杆菌科 β-防御-2基因 炎症反应
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肺炎球菌多糖疫苗对老龄大鼠肺组织-防御素-2表达的影响 被引量:1
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作者 常薪霞 董碧蓉 沈鲲 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期824-826,共3页
目的研究肺炎球菌多糖疫苗(纽莫法)对老龄大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的影响.方法将18~22月的老龄大鼠随机分为实验组与对照组,实验组给予纽莫法0.2 ml/kg腹腔注射,对照组给予等量生理盐水腹腔注射.24 h后处死,取肺组织,提取总RNA,... 目的研究肺炎球菌多糖疫苗(纽莫法)对老龄大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的影响.方法将18~22月的老龄大鼠随机分为实验组与对照组,实验组给予纽莫法0.2 ml/kg腹腔注射,对照组给予等量生理盐水腹腔注射.24 h后处死,取肺组织,提取总RNA,以β-actin为内参照,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织rBD-2基因表达水平.结果实验组老龄大鼠24 h后rBD-2基因表达水平为0.500±0.126,对照组为0.209±0.138,两组间差异有统计学意义(P<0.05).结论纽莫法可上调老龄鼠肺组织β-防御素-2基因的表达,增强机体局部免疫力. 展开更多
关键词 23价肺炎球菌多糖疫苗 纽莫法 β-防御-2 老龄大
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