基于FAERS数据库的聚乙二醇重组尿酸酶注射液不良事件信号挖掘研究

目的:基于美国食品药品监督管理局不良反应事件报告系统(FAERS)数据库,检索并分析治疗痛风药物聚乙二醇重组尿酸酶注射液(普瑞凯希,peglolicase)的不良事件信号,为临床安全用药提供参考。方法:以“peglolicase”为关键词,检索数据库内2018年第1季度至2022年第2季度该药的不良事件报告,删除重复项,用比例失衡法中的报告比值比法和比例报告比值法计算、评估并确立不良事件预警信号。结果:获得以聚乙二醇重组尿酸酶为目标药物的不良事件有效报告数988起(来自569例患者),检测筛选获得有效信号119个,主要涉及13个系统器官分类,其中报告数位于前3位的为痛风性关节炎再发(87起,8.81%),血尿酸升高(66起,6.68%),痛风治疗反应下降(66起,6.68%)。结论:聚乙二醇重组尿酸酶的不良事件主要集中在原发疾病症状及化验值、各类检查,建议临床用药时应注意监测患者痛风性关节炎再发、肾功能异常等不良反应,及时采取相应措施。

重组尿酸酶发酵培养及制备的工艺条件

利用含PET-Urate Oxidase表达质粒的重组E.coli JM109（DE3）菌株进行大规模发酵培养,拟建立一种高效、低成本的生产重组尿酸酶的技术工艺路线。取冻存的工程菌接种于含质量分数1%琼脂的种子培养基中进行培养,从划线平板上挑取单菌落接种于摇瓶中继续培养,最后以体积分数5%接种量接种于发酵培养基中,绘制生长曲线;以乳糖作为诱导剂与传统IPTG诱导方法进行发酵培养比较;菌体经高压均质机破碎、质量分数40%-60%硫酸铵分级沉淀,以及Q-Sepharose F.F.层析进行分离纯化。结果显示,乳糖作为诱导剂在300 L的发酵罐中进行培养可获得菌体湿质量2 700 g,目的蛋白质表达量占菌体可溶性蛋白质的30%左右,略高于IPTG诱导的效果;经分离纯化后该酶的纯化倍数可达原来的4.5倍,活性回收率为40%;纯化的重组尿酸酶经SDS-PAGE和HPLC分析,显示单一蛋白质色带和单一洗脱峰。成果为该酶的医学实际应用奠定了理论实验基础。

聚乙二醇重组尿酸酶的药理和临床评价

痛风为常见的炎性关节疾病。高尿酸水平引起尿酸盐结晶并沉积,导致痛风性关节炎和尿酸尿石病。聚乙二醇重组尿酸酶通过催化尿酸氧化为尿囊素从而降低血清尿酸水平。文中对其作用机制、药效学、药代动力学和临床评价等进行了综述。

重组尿酸酶和聚乙二醇化重组尿酸酶的酶动力学比较研究

目的:对重组尿酸酶和聚乙二醇化重组尿酸酶的酶动力学特征进行研究。方法:建立底物消耗法和产物生成法2种重组尿酸酶活性的测定方法,研究表明二者测定酶活性结果一致。选择尿酸底物消耗法对聚乙二醇修饰前后重组尿酸酶的活性及酶动力学参数进行比较分析。结果:重组尿酸酶在37℃、最适pH 9.0时,对应的V_(max)为0.013μmol·L^(-1)·min^(-1)、K_(m)为33.77μmol·L^(-1)、K_(cat)为889.0 min^(-1);聚乙二醇修饰重组尿酸酶在37℃、最适pH 9.5时,对应的V_(max)为0.009μmol·L^(-1)·min^(-1)、K_(m)为31.52μmol·L^(-1)、K_(cat)为615.5 min^(-1)。在相应最适pH条件下,聚乙二醇修饰前后重组尿酸酶的酶比活性均为12.5 U·mg^(-1)。结论:在最适pH条件下,重组尿酸酶经聚乙二醇修饰前后酶比活性和K_(m)值一致,说明聚乙二醇修饰未影响重组尿酸酶的酶比活性,且聚乙二醇修饰前后酶与底物的亲和力未发生改变。与重组尿酸酶比较,聚乙二醇化重组尿酸酶的V_(max)降低了约30%,说明聚乙二醇修饰可能会导致尿酸酶的四聚体构象发生改变,从而影响最大反应速度。

尿酸酶在大肠杆菌高密度表达的工艺优化

[目的]利用大肠杆菌高密度表达尿酸酶进行发酵培养,预构建一种高效、低成本生产尿酸酶的工艺路线。[方法]构建重组尿酸酶大肠杆菌体系,活化种子液,设计不同的接种量、培养温度,绘制生长曲线;种子液接种至不同p H值的培养基中进行诱导表达;种子液中加入不同浓度的IPTG诱导剂。[结果]10%的接种量细胞的OD600为3.348;菌体在37℃的培养环境下OD600达到3.8。培养基的初始pH值在7.5时,尿酸酶的表达量达到25%以上。种子液加入0.8 mmol/L的IPTG后,尿酸酶的表达量超过40%,持续培养6 h后,菌体OD600为2.9。[结论]与之前工艺对比,经过工艺优化之后,尿酸酶的表达量增超过25%,大肠杆菌的OD600达到3.0左右。