重组抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体酸性异构体去除工艺的优化

目的优化重组抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单克隆抗体纯化工艺中去除酸性异构体的条件。方法考察重组抗HER2单克隆抗体在阳离子交换层析工艺过程中的洗脱方式、预洗缓冲液pH、预洗缓冲液盐浓度、预洗体积、填料负载抗体量等条件对酸性异构体去除效果的影响,筛选最适工艺条件。采用最适条件对中试放大工艺的4批重组抗HER2单克隆抗体进行检测,验证其适用性。结果最适工艺条件为:纯化上样填料负载抗体量应≥60 g/L;在上样/淋洗后添加pH 8.0的20 mmol/L Tris-HCl及15 mmol/L NaCl(电导率为3.0 mS/cm),3倍柱体积预洗;预洗后用平衡缓冲液再平衡5倍柱体积,之后一步洗脱。该工艺条件能将目的组分含量从工艺优化前的53%提高至65%,酸性异构体含量从工艺优化前的35%降至25%以下,电荷分布与原研对照药一致;4批中试样品中抗体负载量≥60 g/L的3批放大验证结果达到原研对照药相关质量指标要求。结论优化的阳离子交换层析去除酸性异构体工艺简单有效、易操作,适用于中试放大工艺。

重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体注射液对Bcap37人乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的观察重组抗人表皮生长因子受体人源化单克隆抗体注射液(MIL41)对Her2高表达人乳腺癌细胞体内外的抑制作用。方法通过流式细胞仪分析人乳腺癌细胞Bcap37中Her2受体的表达量,CCK8法测定MIL41在体外对乳腺癌细胞Bcap37生长的抑制作用;在体内研究中采用人乳腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立评价MIL41对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验表明Bcap37为Her2受体过表达的人乳腺癌细胞,CCK8法检测结果显示MIL41对受试细胞Bcap37的生长有较强抑制作用。体内实验表明受试药MIL41对受试的人乳腺癌细胞Bcap37的裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的抑制效应,同时呈现出良好的浓度依赖关系。分别给予3、6、12 mg/kg不同浓度的受试药,其瘤体积抑制率分别为33.7%、47.8%、59.0%,瘤重抑制率分别为29.6%、44.7%、55.6%。结论 MIL41对Bcap37人乳腺癌细胞在体内外的生长有较强的抑制作用。

抗人表皮生长因子受体2单克隆及双特异性抗体在进展期胃癌中的研究进展

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤。晚期胃癌患者的预后差,传统治疗的疗效亦差。抗人表皮生长因子受体2(HER2)的靶向治疗明显延长了HER2阳性晚期胃癌患者的生存期,因此,阻断HER2通路已成为HER2阳性晚期胃癌一线治疗的基础策略。TOGA研究为第一个获得晚期胃癌靶向治疗成功的临床研究,奠定了曲妥珠单抗在HER2阳性胃癌一线治疗中的基础地位。后TOGA时代,关于抗HER2靶向治疗在胃癌中的相关研究迅速增加。本文就目前抗HER2单克隆及双特异性抗体在进展期胃癌中的研究进展做一综述。

靶向HER2胞外结构域Ⅳ的单克隆抗体在乳腺癌中的应用进展

人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌侵袭性强且易转移,抗HER2靶向药物的应用能显著改善HER2阳性乳腺癌患者的预后。在已上市的HER2靶向药物中,靶向HER2胞外结构域Ⅳ的大分子单克隆抗体是治疗HER2阳性乳腺癌的基础靶向药物,主要包括曲妥珠单抗、伊尼妥单抗和马吉妥昔单抗。曲妥珠单抗用于乳腺癌全线治疗,循证医学证据充分,实践经验充足且安全性可控;伊尼妥单抗与曲妥珠单抗在HER2阳性转移性乳腺癌和新辅助/辅助治疗中疗效相似,且安全性可控;马吉妥昔单抗聚焦于携带CD16A-158F等位基因的患者,是晚期乳腺癌后线治疗的选择。临床上需根据患者具体病情选择最适合的药物。

奥曲肽和表皮生长因子受体单克隆抗体诱导人胃癌细胞凋亡

目的：定量检测奥曲肽（ＳＭＳ）和表皮生长因子受体单克隆抗体（ＥＧＦＲＭＣＡｂ）对人胃癌细胞系 ＳＧＣ－７９０１的诱 导凋亡作用。方法：将不同浓度的ＳＭＳ和ＥＧＦＲＭｃＡｂ与胃癌细胞共同孵育，用流式细胞术分析其细胞凋亡情况。 结果：ＳＭＳ ５ × １０－５和ＥＧＦＲＭｃＡｂ１：１００与胃癌细胞共同孵育７２ ｈ，胃癌细胞凋亡率分别为７．９６％和７．４９％，与对 照组（１．１９％湘比，有显著差异ｐ＜０．０５）。结论：诱导细胞凋亡是胃肠肽类激素发挥其抗肿瘤作用的重要途径之一。

金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗可启动细胞凋亡通路

背景:金纳米颗粒在近红外激光照射下对肿瘤细胞具有杀伤效应。目的:评价金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗对人喉癌Hep-2细胞的热杀伤作用并探讨其凋亡通路。方法:取生长良好的人喉鳞癌Hep-2细胞,分别应用金纳米链或抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物溶液进行干预,在此基础上应用8W/cm2近红外激光(808nm)照射6min,以单独应用1640培养液培养及单独给予近红外激光照射的细胞作对照。结果与结论:透射电镜观察发现,金纳米链热疗后Hep-2细胞有明显的损伤,抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链热疗后细胞的损伤程度最重。Westernblot检测显示,金纳米链热疗和抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链热疗后细胞热休克蛋白70和促凋亡蛋白Bax表达明显增高,而抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低。说明金纳米链及抗表皮生长因子受体抗体/金纳米链共轭物近红外热疗可通过启动细胞凋亡通路杀伤人喉癌Hep-2细胞。

表皮生长因子受体拮抗剂治疗头颈部癌的进展

在我国,头颈部癌（head and neck cancer,HNC）的发病率约为9/10 000,约占全身恶性肿瘤的8.2%。近年来,分子生物学和分子病理学不断发展,新的分子靶向药物涌现,为头颈部癌的治疗提供了更多选择。表皮生长因子受体拈抗剂就是其中之一。

基于DOE设计的IgG2型抗表皮生长因子受体单抗抗体依赖的细胞吞噬作用生物学活性报告基因检测法的建立及验证

目的通过实验设计(Design of Experiment,DOE)与单因素分析(one factor at a time,OFAT)相结合的方式,建立测定Ig G2型抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单抗抗体依赖的细胞吞噬作用(antibody dependent cellular phagocytosis,ADCP)生物学活性的报告基因法,并进行验证。方法以Jurkat/NFAT-Re/FcγRⅡa稳转细胞株为效应细胞,A431细胞株为靶细胞,利用JMP软件采取DOE与OFAT相结合的方式,以上下渐近线比值(D/A)为统计量,对实验中7个关键因素进行条件筛选及优化,建立测定Ig G2型抗EGFR单抗ADCP生物学活性的报告基因法,并按照《中国药典》三部/四部(2020版)通则<9401>进行验证。用建立的方法测定Ig G2型抗EGFR单抗注射液生物学活性。结果经过3轮试验,建立了测定Ig G2型抗EGFR单抗ADCP生物学活性的报告基因法,该方法存在量效关系,符合四参数回归方程y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,确定了7个关键条件的耐用范围,即效应细胞密度为(1.25~3.75)×10~4个/孔,效应细胞与靶细胞密度比值为1.0~2.0,靶细胞孵育时间为20~40 min,给药孵育时间为15~30 min,总作用时间为5.5~6.5 h,显色时间为5~30 min,显色剂为荧光素酶检测系统(Bright-Glo)。该方法专属性良好;对5个效价水平进行6次独立试验,线性回归方程相关系数(r)=0.9945,斜率为1.02;5个效价水平相对效价分别为(62.15±1.38)%、(78.53±2.82)%、(99.12±3.95)%、(123.27±4.59)%和(155.22±7.04)%,相对偏倚为-2.9%~0.2%,几何变异系数(generalized cross-validation,GCV)为2.2%~4.6%;在64%~156%范围内具有良好的线性、相对准确度和精密度。Ig G2型抗EGFR单抗生物学活性3次测定结果均值为(101.5±2.8)%。结论本研究建立的报告基因法可用于Ig G2型抗EGFR单抗ADCP生物学活性测定。

赫赛汀联合多西他赛对人表皮生长因子受体-2阳性转移性乳腺癌的临床疗效

目的研究赫赛汀联合多西他赛对人表皮生长因子受体-2(HER-2)阳性转移性乳腺癌(PMBC)的临床疗效。方法选择2016年2月至2018年3月来开封市中心医院乳腺甲状腺科就诊的PMBC病人80例,根据随机数字表法分为两组,对照组40例采用常规治疗结合赫赛汀,研究组40例采用在对照组的基础上联合多西他赛。比较两组病人高迁移率族蛋白I-C(HMGI-C)基因和分子标志物的表达水平与血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)水平、并发症与随访结果情况。结果研究组总有效率为75.00%,明显优于对照组的52.50%(P<0.05);研究组病人HMGI-C基因的表达阳性率、平均标签指数(LI)值与p53阳性率均明显低于对照组(P<0.05),而雌激素受体阴性率均明显高于对照组(P<0.05);治疗后,两组病人CRP水平明显降低,IL-6水平明显上升(P<0.05),但研究组病人CRP、IL-2水平均明显优于对照组(P<0.05);研究组、对照组病人总并发症发生率分别为10.00%、5.00%(χ^2=0.721,P=0.396),随访期间,研究组、对照组病人死亡率为40%、55%(χ^2=1.782,P=0.182)。结论采用赫赛汀联合多西他赛可以明显提高HER-2 PMBC病人的临床疗效,抑制癌细胞发展,降低并发症发生率,改善病人预后。

乳腺癌抗HER2单克隆抗体研究进展

在过去几十年,人们对人表皮生长因子受体2(HER2)致癌机制认识的提高促进了HER2靶向疗法的开发,例如抗HER2单克隆抗体、酪氨酸激酶抑制剂、双特异性抗体以及抗体偶联药物,这些药物目前通常用于HER2阳性乳腺癌。单克隆抗体曲妥珠单抗是目前HER2靶向治疗的基石,其作用机制是通过抗体的抗原结合片段识别肿瘤细胞表面的HER2位点,然后通过可结晶段(Fc)与免疫细胞表面的Fc受体(FcR)结合,介导抗体依赖性的细胞毒作用(ADCC)和抗体依赖的细胞吞噬作用(ADCP),其中Fcγ受体(FcγR)是主要发挥作用的FcR家族成员。但人体内FcγR存在基因的多态性,不同基因表型的个体与曲妥珠单抗之间有不同的亲和力,亲和力低的患者使用曲妥珠单抗抗肿瘤效果差,所以基于曲妥珠单抗的结构,通过对其Fc段进行改造,如糖基化修饰和氨基酸变异,可增强Fc与FcR之间的亲和力和结合密度,进而增强ADCC和ADCP作用,其中Fc段氨基酸变异的抗HER2单抗马吉妥昔单抗已应用于临床。同时单克隆抗体的抗原结合片段也可通过进一步改造识别不同的HER2表位或者同时识别非HER2表位,增加了免疫细胞表面FcγR结合位点的密度并促进ADCC,此类药物包括帕妥珠单抗、双特异性抗体等。该文对乳腺癌抗HER2单克隆抗体研究进展作一综述。

妇科肿瘤人表皮生长因子受体2相关研究进展及检测方法

1985年,King等[1]首次发现人类乳腺癌DNA中存在人表皮生长因子受体2(HER2)基因的扩增。随后陆续有多项相关研究发现,HER2基因扩增在乳腺癌的发生、发展中起重要作用;抗HER2药物可提高HER2阳性乳腺癌患者的无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。

抗表皮生长因子受体2单克隆抗体质量控制中的趋势分析

目的对抗表皮生长因子2单克隆抗体的质量控制项目进行趋势分析。方法利用BT-474细胞株作为靶细胞，通过细胞增殖抑制作用，使用CellTiter 96 AQueous检测试剂盒进行抗表皮生长因子受体2单抗的生物学活性检测，以抗表皮生长因子受体2单抗参比品通过平行线分析的方法计算供试品效价；采用阳离子交换色谱方法，按面积归一化法计算主峰面积百分比进行抗体纯度检测。采用紫外分光光度法进行蛋白质含量检测；采用电位法进行pH值检测；通过对中国食品药品检定研究院（NIFDC）和企业质控实验室多批次抗表皮生长因子2单抗的检测结果，分别建立警戒限（x^-±2s）和行动限（x^-±3s），绘制趋势分析图，并对检测结果进行连续性及周期性趋势分析。结果对2012—2014年某企业74批抗表皮生长因子2单抗的生物学活性检测结果显示，抗表皮生长因子受体2单抗供试品和参比品在生物学活性中均存在量效关系，在半对数坐标纸上呈平行的直线分布。生物学活性效价均值中国食品药品检定研究院与企业分别为（1．04±0．11）×10^4和（0．94±0．08）×10^4U·mg^-1；蛋白质含量均值分别为（442．15±13．59）和（442．07±6．60）mg·瓶^-1；离子交换色谱主峰面积均值分别为（76．29±1．36）％和（73．76±1．17）％；pH值均值分别为（6．16±0．11）和（6．22±0．08）。对上述结果进行连续性和周期性趋势分析，总体趋势较平稳。结论首次通过对抗表皮生长因子受体2单克隆抗体的部分关键质量属性（CQA）趋势分析，反映了制品的变化情况，对评价单抗的批间一致性和生产工艺稳定性提供了参考，为其他单抗质量控制中关键质量属性的趋势分析提供重要指导和借鉴。

曲妥珠单克隆抗体emtansine治疗晚期人表皮生长因子受体2阳性乳腺癌有优越性

来自加拿大多伦多Sunnybrook Odette癌症中心的SunilVerma等在2012年367卷19期《New Engl and Journal of Medicine）〉在线发表题为《Trastuzumab emtansine for HER-2-positive advanced breast cancer》的论著，报道了新型抗体一药物共轭物Trastuzumab emtansine（T—DMl）治疗晚期HER-2阳性乳腺癌，

单克隆抗体抗肿瘤药的进展与临床评价

目的:归结于生物工程技术的进步,把对肿瘤细胞攻击锁定于表皮生长因子和血管内皮生长因子等靶位,使药物治疗的切入点由细胞水平向分子水平过度,提高肿瘤联合治疗效果,成为肿瘤综合治疗策略。由此应运而生的单克隆抗体药独树一帜,对其研究和评价日趋活跃,本文总结其作用优势和临床评价。方法:采用国内、外文献综述方法。结果及结论:单克隆抗体药疗效确切、特异性强、不良反应和耐药性小,无疑是药学研究领域中的巨大突破。但抗体药难以穿透肿瘤致密的包裹屏障,且价格昂贵,因此,期盼其根治肿瘤的希望依然渺茫,仍有待于大量循证医学研究结果和时间的推移。

贝伐珠单克隆抗体联合化疗治疗HER-2阴性乳腺癌的效果

目的:观察贝伐珠单克隆抗体联合化疗治疗人表皮生长因子受体-2(HER-2)阴性乳腺癌患者的效果。方法:选取HER-2阴性乳腺癌患者75例,采用随机数字表法将其分为对照组37例和观察组38例。对照组给予常规化疗,观察组在对照组基础上应用贝伐珠单克隆抗体治疗。对比两组临床疗效和毒副反应发生情况,随访10个月,对比两组生存率。结果:观察组总缓解率为89.47%,高于对照组的70.27%,差异有统计学意义(P<0.05);两组粒细胞减少、贫血、血小板减少、恶心呕吐、丙氨酸氨基转移酶升高发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);随访10个月,观察组生存率为94.74%,高于对照组的78.38%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:贝伐珠单克隆抗体联合化疗治疗HER-2阴性乳腺癌的效果优于单纯化疗治疗效果。

抗HER2单抗关键质量属性研究

目的:对国产抗人类表皮生长因子受体2(HER2)单抗部分关键质量属性进行质量研究,并建立质量控制方法。方法:根据曲妥珠的产品特性和作用机制,对质量属性进行评估分级,以7批原研曲妥珠为对照,检测7批国产抗HER2单抗部分关键质量属性。利用离子交换色谱检测电荷异质性;通过BT474细胞增殖抑制法检测生物学活性;利用生物膜干涉技术检测抗原抗体亲和力、单抗与FcRn亲和力以及利用表面等离子共振技术检测单抗与FcγRⅢa亲和力;利用差示扫描量热检测热稳定性。结果:7批原研曲妥珠的离子交换色谱主峰面积百分比、生物学活性EC50值的Mean±3SD分别为(73.87±2.21)%、(0.20±0.06)μg·mL^(-1),7批国产抗HER2单抗相应检测结果分别为(73.54±3.24)%,(0.20±0.05)μg·mL^(-1)。原研曲妥珠抗原抗体亲和力、单抗与FcγRⅢa亲和力及单抗与FcRn亲和力的平衡常数值(K_(D))分别为1×10^(-10)、1×10^(-6)、1×10^(-7),7批国产抗HER2单抗相应检测结果分别为1×10^(-10)、1×10^(-6)、1×10^(-7)。国产抗HER2单抗与原研曲妥珠热稳定性图谱一致。结论:本研究建立了抗HER2单抗关键质量属性研究方法,为该类国产单抗质量控制提供参考依据。

^(125)I标记重组全人源抗表皮生长因子受体单克隆抗体的制备及其在荷瘤裸鼠体内的分布

目的研究;^(125)I标记重组全人源抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的生物分布。方法以Iodogen法进行重组全人源抗EGFR单克隆抗体的;^(125)I标记,分离纯化。组织分布实验:荷瘤裸鼠静脉注射^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体24 mg·kg^(-1),分别在药后4,24,72,168 h(每个时间点各5只鼠)于股动脉放血活杀,取主要脏器及体液称重并测量其放射性计数。粪尿排泄实验:6只荷瘤裸鼠静脉注射^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体24 mg·kg^(-1),在给药后0~24,24~48……264~312 h时间段分别收集尿和粪,并测量其放射性计数。胆汁排泄实验:6只SD大鼠给予^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体12 mg·kg^(-1),给药后于1,3,5,8,12 h收集一次胆汁测量其放射性计数。放射免疫显像实验:2只荷瘤裸鼠静脉注射^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体0.5 mci,分别在4,24,72,168 h用单光子发射计算机断层成像术(SPECT)进行放射免疫显像。结果血中暴露水平为3681μg·h·mL^(-1)(最高),血流灌注丰富的组织器官的放射性较高,并且药物在肿瘤部位有明显蓄积,达到了2168μg·h·g^(-1)。312 h尿、粪分别排出注入放射性量的(70.08±6.15)%和(6.03±0.54)%,药物主要经尿排泄。注射后12 h的累积排泄率为(0.34±0.07)%。胆汁中未发现药物原形和放射性小分子代谢产物。各组织放射性浓度逐渐下降,而肿瘤部位的放射性浓度则逐渐增加。结论^(125)I-重组全人源抗EGFR单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内具有肿瘤靶向定位能力,主要通过肾代谢。

重组人源化抗人类表皮生长因子受体2单克隆抗体酸性电荷异构体质量评价

目的比较抗人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单克隆抗体酸性电荷异构体、原液及纯化工艺中阳离子交换层析预洗脱杂质质量差异,为细胞培养工艺研究和纯化工艺参数的调整提供参考。方法采用体积排阻色谱法(size exclusion chromatography,SEC)检测供试品单体、聚体和残体含量;非还原/还原毛细管电泳-十二烷基磺酸钠(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)法检测供试品电泳纯度;弱阳离子交换色谱法(weak cation exchange chromatography,CEX)检测供试品电荷异构体分布;毛细管等电聚焦(capillary iso-electric focusing,c IEF)法测定供试品等电点;细胞增殖抑制法测定供试品生物学活性。结果 SEC检测结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的单体含量分别为54.44%、99.08%和99.80%,残体含量分别为44.33%、0.61%和0。非还原CE-SDS结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的主峰含量分别为53.93%、90.83%和95.83%,小分子杂质含量分别为46.07%、9.17%和4.17%;还原CE-SDS结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的轻、重链百分含量分别为78.00%、96.80%和98.85%。CEX检测结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的主峰含量分别为2.60%、16.77%和66.46%,酸性峰含量分别为97.40%、82.53%和25.92%。c IEF检测结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的主峰含量分别为3.21%、18.17%和33.20%,酸性峰含量分别为94.21%、80.18%和64.38%,p I范围分别为6.40~8.85、7.69~8.69和7.94~8.69。生物活性测定结果显示,预洗脱杂质、酸性异构体和原液的比活性分别为0.45×10~4、1.02×10~4和0.94×10^(4 )U/mg。结论 HER2单克隆抗体酸性组分大部分由于单克隆抗体片段化造成;酸性电荷异构体的存在对HER2单克隆抗体的活性影响并不显著。

抗表皮生长因子受体全人单克隆抗体Ranti-HER的抗肿瘤药理作用研究

目的考察抗表皮生长因子受体全人单克隆抗体Ranti-HER单用及联合用药对裸鼠人癌移植瘤的抑制作用,探讨其抑制作用是否与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达有关。方法采用流式细胞术定性人源肿瘤细胞EGFR的表达程度,建立人源肿瘤细胞裸鼠皮下移植瘤模型,然后分组给药,以相对肿瘤增值率评估其抗肿瘤有效性。结果人鳞状细胞癌A431细胞为EGFR高表达细胞,人结肠癌HT29和SW948细胞对EGFR低表达,人结肠癌SW620细胞对EGFR为阴性表达。给予不同剂量Ranti-HER(0.25、0.5、1 mg·只-1,biw×3)能显著抑制A431移植瘤的生长,并表现出一定的剂量相关性;与多柔比星(125μg·只-1,qd×2)合用后呈现联合抗肿瘤作用。Ranti-HER 1.0 mg(biw×3)能明显延缓SW948移植瘤的生长,与伊立替康联合应用,抑制肿瘤生长作用表现出相加的趋势。对于HT29和SW620移植瘤,Ranti-HER1.0 mg(biw×3)未见明显抑瘤作用。结论 Ranti-HER单独应用能抑制裸鼠人癌移植瘤的生长,其抑制作用与EGFR的表达水平有一定相关性,Ranti-HER与其他化疗药物联合应用,具有协同抗肿瘤作用。