贝纳柯克斯体重组抗原Com1和急性Q热抗原A(adaA)的纯化和鉴定

目的原核表达并纯化2种贝纳柯克斯体(C.burnetii)抗原主要外膜蛋白质Com1和急性Q热抗原A(adaA),并对重组Com1和adaA进行质谱鉴定以及抗原性鉴定。方法全基因合成编码Com1和adaA的基因序列,并将其分别构建到原核表达载体pET-20b(+),将构建好的载体分别转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组Com1和adaA。通过镍亲和柱层析纯化重组Com1和adaA,切取纯化的蛋白质条带进行质谱鉴定。将纯化的重组Com1和adaA与Q热阳性牛血清进行Western blot分析,检测其免疫反应特性。结果构建了原核表达载体pET-20b(+)-Com1以及pET-20b(+)-adaA,重组抗原Com1和adaA均以可溶形式得到了高效地表达和纯化,SDS-PAGE结果显示其相对分子质量(Mr)分别为27 000与25 000,质谱鉴定结果确证其为C.burnetii的抗原蛋白Com1和adaA。重组Com1和adaA与Q热阳性牛血清均有阳性反应条带,条带Mr大小与SDS-PAGE结果一致。结论成功高效表达了可溶重组Com1和adaA并证实其免疫反应特异性。