E型肉毒神经毒素重组Hc-C亚单位疫苗免疫原性研究

目的利用大肠杆菌高效表达并纯化E型肉毒神经毒素(BoNT/E)受体结合区Hc的亚结构域EHc C蛋白,并进行免疫原性研究。方法利用PCR技术扩增出EHc C基因,克隆于载体pTIG Trx His tag中得到重组质粒pTIG Trx EHc C,转入表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,超声破碎菌体,收集上清,经镍柱亲和纯化获得重组抗原EHc C蛋白,通过SDS PAGE和Western印迹检测纯化效果,之后免疫BALB/c小鼠,评价其免疫原性。结果通过原核表达纯化获得了纯度>90%的重组抗原EHc C蛋白,该重组抗原作为亚单位疫苗免疫小鼠产生了特异性抗体反应,10μg剂量抗原蛋白3次免疫小鼠即可抵抗104 LD50E型肉毒毒素攻击,血清中和抗体效价可达1.00 U/ml。结论获得的重组EHc C抗原免疫原性良好,免疫小鼠后能抵抗E型肉毒毒素的攻击,产生强烈保护作用,可作为亚单位候选疫苗预防E型肉毒毒素中毒或用于研究肉毒毒素疫苗和抗体的功能表位。