重组拖丝蛋白基因在大肠杆菌中表达条件的优化

对已构建的重组蜘蛛拖丝蛋白基因表达菌株 p NS2 ,以 IPTG为诱导剂 ,建立最适表达条件 .在 LB培养基中添加质量分数为 0 .1 %的甘氨酸和丙氨酸 ,菌体培养至密度 A6 0 0 =0 .5～ 0 .7时加入浓度为 0 .2 mmol/ L的 IPTG,诱导 5 h,可得到表达量占可溶性总蛋白质 2 7.2 %的较好结果 .

RGD-拖丝蛋白基因的构建及其在毕赤酵母中的分泌表达

根据天然拖丝蛋白的高度重复性序列,引入与细胞黏附有关的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽序列,以毕赤酵母偏好的密码子化学合成RGD-拖丝蛋白基因单体,通过"头尾相连"的多聚化策略,倍加成16聚体与32聚体基因.分别将这两种多聚体与分泌型表达载体pPIC9K连接,转化毕赤酵母GS115,用G418筛选毕赤酵母重组菌.通过甲醇诱导表达,培养液上清的SDS-PAGE分析表明RGD-重组拖丝蛋白获得分泌型表达.