期刊文献+
共找到36篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
猪细小病毒VP2蛋白重组杆状病毒的构建表达与鉴定 被引量:1
1
作者 丁国伟 李甜甜 +5 位作者 徐萍 潘晨 王设市 魏荣荣 荣雪路 范娟 《国外畜牧学(猪与禽)》 2023年第1期52-57,共6页
为构建一种能够用于开发猪细小病毒病毒样颗粒疫苗的猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒。根据GeneBank数据库中的猪细小病毒全基因组序列设计并合成了1对能扩增VP2基因的引物,采用PCR扩增猪细小病毒BJ-2株的VP2基因,并将其克隆到杆状病... 为构建一种能够用于开发猪细小病毒病毒样颗粒疫苗的猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒。根据GeneBank数据库中的猪细小病毒全基因组序列设计并合成了1对能扩增VP2基因的引物,采用PCR扩增猪细小病毒BJ-2株的VP2基因,并将其克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,获得阳性质粒pFastBac-PPVVP2;测序后将该质粒转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,获得含有VP2基因的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPVVP2;最后将获得的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPVVP2转染Sf9昆虫细胞,并成功拯救了能稳定表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒Bacmid-PPV VP2。结果发现,该重组病毒可用于稳定表达猪细小病毒VP2蛋白,并且表达的VP2蛋白可在体外自我组装形成病毒样颗粒,电镜观测其颗粒大小与猪细小病毒全病毒大小类似,且形成的病毒样颗粒与全病毒一样具有豚鼠红细胞凝集作用,凝集效价可达1∶2048。故构建的表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒为研制猪细小病毒的基因工程亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 细小病毒 vp2基因 重组杆状病毒 病毒样颗粒
下载PDF
小鼠细小病毒VP2蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达和免疫原性分析 被引量:1
2
作者 马畅 赵迎峰 +3 位作者 陈莉 刘彪 赵志刚 恽时锋 《实验动物科学》 2023年第4期28-33,共6页
目的利用杆状病毒表达系统合成重组小鼠细小病毒(MVM)VP2蛋白,并对其免疫原性分析。方法将优化后的MVM VP2序列克隆至表达载体pFastBac1,命名为pFastBac1-MVM VP2,再将其转化至DH10Bac感受态大肠杆菌中形成重组杆粒,提取重组杆粒经PCR... 目的利用杆状病毒表达系统合成重组小鼠细小病毒(MVM)VP2蛋白,并对其免疫原性分析。方法将优化后的MVM VP2序列克隆至表达载体pFastBac1,命名为pFastBac1-MVM VP2,再将其转化至DH10Bac感受态大肠杆菌中形成重组杆粒,提取重组杆粒经PCR鉴定正确后转染昆虫细胞Sf9,镜下观察到细胞明显病变后收获重组杆状病毒rBac-MVM VP2。Sf9细胞接重组病毒48和72 h后,用间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)法验证重组蛋白的免疫原性。结果构建的rBac-MVM VP2重组杆状病毒感染Sf9细胞后,可成功表达MVM VP2重组蛋白,经Western blot和IFA检测分析,重组蛋白具有较好的免疫原性且在病毒感染72 h时表达量较高。经蛋白纯化后可得到纯度较高的VP2重组蛋白。结论本研究利用昆虫细胞-杆状病毒系统成功表达MVM VP2蛋白并具有良好的免疫原性,为VP2相关功能的研究和临床诊断方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 小鼠细小病毒 vp2蛋白 杆状病毒表达
下载PDF
重组杆状病毒细小VP2蛋白40L生物反应器放大工艺研究 被引量:2
3
作者 苏晓蕊 李伟国 +5 位作者 王延辉 高晓静 闪伊红 谭菲菲 李向东 田克恭 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期60-64,共5页
研究了Sf9细胞生产重组杆状病毒细小VP2蛋白在机械搅拌式生物反应器(STR)中从3L至40L的放大工艺。首先在3L反应器中,通过DO和搅拌转速的优化,使反应器中的VP2蛋白HA效价不低于摇瓶结果。在40L反应器放大时,温度、p H、DO保持不变,根据... 研究了Sf9细胞生产重组杆状病毒细小VP2蛋白在机械搅拌式生物反应器(STR)中从3L至40L的放大工艺。首先在3L反应器中,通过DO和搅拌转速的优化,使反应器中的VP2蛋白HA效价不低于摇瓶结果。在40L反应器放大时,温度、p H、DO保持不变,根据输入搅拌功率、体积溶氧系数和叶尖线速度等工程参数的计算,得到了该反应器的合理搅拌转速,最终HA效价测定结果与小罐一致。豚鼠免疫试验证实,反应器中表达的VP2蛋白制成疫苗,与HN2011灭活苗及商品化灭活疫苗相比,抗体水平上升较快且高于传统灭活苗。 展开更多
关键词 SF9细胞 重组杆状病毒细小vp2 生物反应器 放大
原文传递
人类细小病毒B19壳蛋白VP2在昆虫杆状病毒表达系统中的表达 被引量:2
4
作者 周为民 谷淑燕 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期378-380,共3页
利用BAC-TO-BAC系统获得了人类细小病毒B19壳蛋白VP2的重组昆虫杆状病毒,并在sf9细胞中表达出VP2。用蚀斑法纯化病毒,终末稀释法测定病毒滴度为3.6×108。Western印迹检测证实了表达蛋白的特异性,间接免疫荧光法可观察到细胞胞浆中... 利用BAC-TO-BAC系统获得了人类细小病毒B19壳蛋白VP2的重组昆虫杆状病毒,并在sf9细胞中表达出VP2。用蚀斑法纯化病毒,终末稀释法测定病毒滴度为3.6×108。Western印迹检测证实了表达蛋白的特异性,间接免疫荧光法可观察到细胞胞浆中的表达蛋白颗粒。 展开更多
关键词 细小病毒B19 壳蛋白 vp2 杆状病毒表达系统
下载PDF
猪细小病毒PPV-SD1株VP2基因重组腺病毒表达载体的构建 被引量:3
5
作者 王金良 沈志强 +2 位作者 管宇 曲光刚 唐娜 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第8期100-103,共4页
通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有猪细小病毒(PPV)VP2基因的重组腺病毒表达载体。将VP2基因亚克隆连接到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV上,并将重组质粒pShuttle-CMV/VP2用Pme I线性化后转化至携带有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠... 通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有猪细小病毒(PPV)VP2基因的重组腺病毒表达载体。将VP2基因亚克隆连接到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV上,并将重组质粒pShuttle-CMV/VP2用Pme I线性化后转化至携带有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAdEasy-VP2,为进一步研究PPV腺病毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 细小病毒 vp2基因 重组病毒
下载PDF
鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达 被引量:1
6
作者 鄢明华 赵晓岩 +5 位作者 刘长军 王笑梅 王端 李刚 秦运安 邓国华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期426-429,共4页
将鸡传染性贫血病毒M990 5株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中 ,然后转化到DH10BAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组 ,最后将重组子转染Sf9昆虫细胞 ,得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组... 将鸡传染性贫血病毒M990 5株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中 ,然后转化到DH10BAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组 ,最后将重组子转染Sf9昆虫细胞 ,得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组杆状病毒rBacVP1、rBacVP2及rBacVP1_2。PCR扩增结果证实VP1、VP2基因重组到杆状病毒基因组中 ;SDS_PAGE电泳分析和间接免疫荧光试验结果表明VP1、VP2基因在重组病毒中得到了表达。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 vp1、vp2基因 重组杆状病毒
下载PDF
重组犬瘟热病毒抗原表位T'TB和犬细小病毒vp2基因的真核表达 被引量:1
7
作者 王亚君 华育平 高光慧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期349-353,358,共6页
将人工合成的犬瘟热病毒抗原表位T'TB基因克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的转移载体pFastBacHTc上,命名为pFastBacHTc-T'TB。应用PCR方法扩增犬细小病毒vp2基因,将其克隆至pMD18-T载体,测序后将vp2基因插入T'TB基因下... 将人工合成的犬瘟热病毒抗原表位T'TB基因克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的转移载体pFastBacHTc上,命名为pFastBacHTc-T'TB。应用PCR方法扩增犬细小病毒vp2基因,将其克隆至pMD18-T载体,测序后将vp2基因插入T'TB基因下游,命名为pFastBacHTc-T'TB-VP2,进而转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得携带犬瘟热病毒T'TB细胞表位和犬细小病毒vp2基因的重组转染质粒Bacmid-BacHT-T'TB-VP2,转染昆虫细胞Sf-9后获得融合重组T'TB-VP2蛋白,大小约为70ku。经Westernblot分析,表达的蛋白可与犬细小病毒阳性血清反应,具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 细小病毒 犬瘟热病毒T^ITB抗原表位 vp2基因 杆状病毒表达系统 表达
下载PDF
新型鸭细小病毒重组VP2蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立 被引量:3
8
作者 刘铭 袁万哲 刘聚祥 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期85-91,共7页
为了建立新型鸭细小病毒(novel duck Parvovirus, NDPV)感染鸭群的抗体检测方法,试验采用PCR方法扩增新型鸭细小病毒的VP2基因,将其克隆至pET-32a(+)载体中,获得重组质粒pET-32a(+)-VP2;将该重组质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,经... 为了建立新型鸭细小病毒(novel duck Parvovirus, NDPV)感染鸭群的抗体检测方法,试验采用PCR方法扩增新型鸭细小病毒的VP2基因,将其克隆至pET-32a(+)载体中,获得重组质粒pET-32a(+)-VP2;将该重组质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,经优化诱导表达后通过SDS-PAGE电泳分析表达产物,并对表达的蛋白质进行纯化、复性;再利用阳性血清对表达的蛋白质进行Western-blot鉴定;以纯化的重组蛋白作为抗原包被ELISA酶标板,通过优化抗原包被量、一抗稀释度、抗原封闭条件、一抗和二抗的孵育条件等最终建立间接ELISA方法,并对该方法进行评定。结果表明:成功构建出NDPV重组VP2蛋白,在37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导5 h的表达量最大,蛋白质的分子质量约为49 ku,主要以不溶性的包涵体形式存在。纯化、复性后的重组VP2蛋白浓度为2.378 mg/mL,纯度为97%。Western-blot鉴定得到的条带单一,大小为49 ku。间接ELISA检测方法的最佳抗原包被量为200 ng/孔,一抗稀释度为1∶200;其他检测条件最优结果为4℃包被过夜,37℃封闭2 h,一抗37℃孵育1 h,二抗稀释10 000倍,二抗37℃孵育1 h。间接ELISA检测方法的检测临界值为0.445,该方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,对临床样品的阳性检出率为93.3%。说明以重组VP2蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法效果良好,为临床NDPV的感染提供了一种新的检测方法。 展开更多
关键词 新型鸭细小病毒 原核表达 重组vp2蛋白 WESTERN-BLOT 间接ELISA方法
下载PDF
表达小鹅瘟病毒VP2蛋白重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性 被引量:14
9
作者 陈柳 余斌 +4 位作者 倪征 华炯钢 叶伟成 云涛 张存 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第14期2813-2821,共9页
【目的】鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病,鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗。根据2012年国际病毒分类委员会(ICTV)的报告,DEV被归为疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科马立克氏病毒属。疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立... 【目的】鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病,鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗。根据2012年国际病毒分类委员会(ICTV)的报告,DEV被归为疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科马立克氏病毒属。疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立克氏病毒、火鸡疱疹病毒等已广泛用于病毒活载体的研究,而近几年也有关于鸭瘟病毒(DEV)作为疫苗活载体的报道。为了为免疫防控鸭瘟和小鹅瘟提供新手段,本研究拟在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆的基础上,构建表达小鹅瘟病毒(GPV)主要免疫原蛋白VP2的重组病毒rDEV-VP2,并研究其生物学特性,进而探讨重组病毒rDEV-VP2作为防治DEV和GPV的二联重组活载体疫苗的可能性。【方法】将密码子优化的GPV VP2基因通过常规基因克隆的方法插入转移载体p EP-BGH-end,构建含有GPV VP2表达框p CMV-VP2-BGH-p A的重组表达质粒。在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,通过"Red E/T"两步重组法将GPV VP2基因表达框插入到DEV US7和US8基因之间构建了突变体克隆pDEV-VP2。利用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得重组病毒rDEV-VP2和删除Bac质粒序列的rDEV-VP2-Cre,并对重组病毒细胞体外生长曲线、蚀斑大小和VP2蛋白表达情况进行测定。将rDEV-VP2接种番鸭,在不同时间采集血清,采用间接ELISA法检测血清中GPV VP2抗体产生情况。【结果】间接免疫荧光检测和Western blot分析表明,外源蛋白VP2在CEFs细胞成功表达。病毒生长曲线和蚀斑大小测定结果显示,rDEV-VP2在CEFs细胞上的增殖滴度与亲本株相比无显著差异,表明外源基因VP2的插入不影响rDEV重组病毒的增殖。动物试验结果表明,7日龄雏番鸭接种rDEV-VP2可以诱导产生针对GPV VP2的抗体,免疫后3周抗体阳性率为50%(4/8)。【结论】将小鹅瘟病毒的主要免疫原基因VP2插入到DEV疫苗株基因组的US7和US8基因间构建了表达该免疫原性基因的重组鸭瘟病毒细菌人工染色体,继而在鸡胚成纤维细胞(CEFs)上拯救获得了重组病毒rDEV-VP2,病毒细胞生长特性与亲本株基本一致,且能诱导鸭体产生GPV VP2特异性的抗体。该研究为研制DEV-GPV二联重组活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 细小病毒 vp2 重组病毒
下载PDF
犬瘟热病毒抗原表位T’TB和犬细小病毒VP2蛋白的共表达及免疫小鼠特异性抗体的测定 被引量:9
10
作者 王亚君 华育平 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期204-209,共6页
应用PCR方法扩增犬细小病毒VP2基因,将其克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的转移载体pFastBacHTc上,命名为pFastBacHTc-VP2,将人工合成的犬瘟热病毒抗原表位基因T’TB克隆至VP2基因的上游,命名为pFastBacHTc-T’TB-VP2。进而转化含... 应用PCR方法扩增犬细小病毒VP2基因,将其克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的转移载体pFastBacHTc上,命名为pFastBacHTc-VP2,将人工合成的犬瘟热病毒抗原表位基因T’TB克隆至VP2基因的上游,命名为pFastBacHTc-T’TB-VP2。进而转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,获得携带犬瘟热病毒T’TB细胞表位和犬细小病毒VP2基因的重组转染质粒Bacmid-BacHT-T’TB-VP2,将其转染昆虫细胞Sf-9后获得融合重组T’TB-VP2蛋白,大小约为70ku。经Westernblot分析,结果显示:表达的蛋白具有良好的免疫原性。表达的重组蛋白在无佐剂参与的情况下,按确定的免疫程序免疫6~8周龄的BALB/c小鼠,检测小鼠的体液免疫学指标。结果表明:表达蛋白能诱导小鼠产生抗CDV和CPV的特异性中和抗体。本实验为重组犬瘟热与犬细小病毒新型亚单位疫苗的研制奠定了重要的物质基础。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒T’TB抗原表位 细小病毒vp2基因 杆状病毒表达系统 表达 抗体检测
下载PDF
猪细小病毒VP2重组蛋白的诱导表达及表达产物的纯化
11
作者 孙超 高莹 +3 位作者 丁晨 佟洋 范慧 张宏玲 《今日畜牧兽医》 2018年第10期10-11,共2页
将构建好的重组质粒转化宿主菌BL21,利用IPTG(1mmol/L)诱导实现了VP2蛋白主要抗原域的高效表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定其表达形式;经滤膜、饱和硫酸铵、Ni-NTA树脂层析进行纯化。结果表明:重组质粒得到高效诱导表达,并且重组蛋白... 将构建好的重组质粒转化宿主菌BL21,利用IPTG(1mmol/L)诱导实现了VP2蛋白主要抗原域的高效表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定其表达形式;经滤膜、饱和硫酸铵、Ni-NTA树脂层析进行纯化。结果表明:重组质粒得到高效诱导表达,并且重组蛋白以包涵体的形式存在;获得高纯度的重组蛋白。 展开更多
关键词 细小病毒 vp2重组蛋白的诱导表达 纯化
下载PDF
鹅细小病毒NS2基因以及VP1与VP3非重叠序列基因的真核表达 被引量:2
12
作者 刘海霞 刘海涛 +2 位作者 张婧 于天飞 王君伟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期772-776,共5页
采用pBlueBacHis2A系统筛选鹅细小病毒(GPV)的检测抗原,利用PCR扩增和双酶切方法分别构建了含有NS2基因和VP1与VP3非重复序列基因的重组质粒pBlueBacHis2A-GPV-NS2、pBlueBa-cHis2A-GPV-VP(1-3),分别转染sf9细胞,得到重组病毒,分别表达... 采用pBlueBacHis2A系统筛选鹅细小病毒(GPV)的检测抗原,利用PCR扩增和双酶切方法分别构建了含有NS2基因和VP1与VP3非重复序列基因的重组质粒pBlueBacHis2A-GPV-NS2、pBlueBa-cHis2A-GPV-VP(1-3),分别转染sf9细胞,得到重组病毒,分别表达出了54 ku的NS2融合蛋白和24 ku的VP(1-3)融合蛋白。Western-blotting和Dot-ELISA检测结果证实,表达产物具有特异性;间接免疫荧光试验证实,重组蛋白在细胞中获得了表达。 展开更多
关键词 细小病毒 NS2基因 vpl与vp3非重叠序列 杆状病毒 真核表达
下载PDF
猪细小病毒BQ-C毒株VP2基因的鉴定及表达
13
作者 刘朝霞 刘永刚 +2 位作者 毕可东 周顺 崔尚金 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期50-53,共4页
本研究从临床发病猪采集病料,以PK15传代细胞进行病毒分离,通过PCR、血液凝集试验(HA)和电镜鉴定为1株猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV),命名为BQ-C。对分离的毒株进行测序,结果显示该毒株与GenBank登录的PPV BQ株同源性为100%。为... 本研究从临床发病猪采集病料,以PK15传代细胞进行病毒分离,通过PCR、血液凝集试验(HA)和电镜鉴定为1株猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV),命名为BQ-C。对分离的毒株进行测序,结果显示该毒株与GenBank登录的PPV BQ株同源性为100%。为获得该毒株结构蛋白VP2基因的表达产物,将VP2基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+),得到表达重组质粒。经双酶切和测序鉴定,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE结果表明,获得的重组蛋白分子质量约为71.5ku,与预期大小相符。Western blotting结果显示获得的重组蛋白能与PPV阳性血清特异性结合,表明重组蛋白具有良好的反应原性。结果表明,本研究成功分离了1株PPV BQ-C株,且表达的VP2重组蛋白可用于PPV血清学诊断和疫苗的研发。 展开更多
关键词 细小病毒 重组vp2蛋白 原核表达 反应原性
下载PDF
含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建 被引量:11
14
作者 罗燕 郭万柱 +5 位作者 徐志文 刘艳丽 殷华平 王新 王小玉 苟琳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1064-1068,共5页
将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察... 将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株(命名为SA215-B)DNA用BamHⅠ酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93 ku的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 细小病毒 vp2基因 EGFP 重组病毒
下载PDF
鹅细小病毒和番鸭细小病毒核酸疫苗重组质粒的构建及表达 被引量:9
15
作者 李雪梅 章金刚 +3 位作者 向华 陈晓月 金宁一 费恩阁 《生物技术通讯》 CAS 2002年第6期433-435,共3页
将鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MPV)主要结构蛋白(VP2-VP3)基因克隆到核酸疫苗质粒pIRES1neo载体上,构建了核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP,通过脂质体转染法分别将重组质粒转染到鹅胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞中,核酸疫苗重组质... 将鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MPV)主要结构蛋白(VP2-VP3)基因克隆到核酸疫苗质粒pIRES1neo载体上,构建了核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP,通过脂质体转染法分别将重组质粒转染到鹅胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞中,核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP分别转染鹅胚成纤维细胞和番鸭成纤维细胞中,于转染后72h收取细胞,细胞裂解液裂解后,经Westernblot检测其表达产物可出现特异性反应带,证明表达产物具有很好的反应原性。 展开更多
关键词 细小病毒 番鸭细小病毒 核酸疫苗 重组质粒 构建 表达 vp2-vp3基因
下载PDF
鸡传染性腔上囊病病毒VP2基因在昆虫细胞中的表达 被引量:6
16
作者 李迎晓 秦爱建 +3 位作者 刘红梅 邵红霞 金文杰 刘岳龙 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第12期933-936,共4页
为了深入研究鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2基因的结构和功能,利用Bac-to-Bac系统研制出含有VP2基因的重组杆状病毒rBac-VP2,将rBac-VP2感染Sf9细胞,并用抗IBDVVP2特异性单克隆抗体经间接免疫荧光试验检测,证实感染重组病毒Sf9细胞能... 为了深入研究鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2基因的结构和功能,利用Bac-to-Bac系统研制出含有VP2基因的重组杆状病毒rBac-VP2,将rBac-VP2感染Sf9细胞,并用抗IBDVVP2特异性单克隆抗体经间接免疫荧光试验检测,证实感染重组病毒Sf9细胞能高效表达IBDVVP2基因产物;Western-blotting分析结果表明,VP2基因表达产物的分子质量约为40 ku。 展开更多
关键词 传染性腔上囊病病毒 vp2基因 重组杆状病毒 表达
下载PDF
鸡贫血病毒VP1和VP2蛋白在家蚕中的联合表达 被引量:1
17
作者 肖庆利 张志芳 何家禄 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期283-287,共5页
将鸡贫血病毒vp1和vp2基因分别克隆入转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移质粒pBac vp1和pBac vp2。以上两质粒分别与CvnⅠ酶切线性化的亲本病毒Bm BacPAK6DNA共转染家蚕细胞 ,通过蓝白斑筛选 ,纯化得到重组病毒Bm vp1和Bm vp2。PCR分析表... 将鸡贫血病毒vp1和vp2基因分别克隆入转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移质粒pBac vp1和pBac vp2。以上两质粒分别与CvnⅠ酶切线性化的亲本病毒Bm BacPAK6DNA共转染家蚕细胞 ,通过蓝白斑筛选 ,纯化得到重组病毒Bm vp1和Bm vp2。PCR分析表明vp1和vp2基因已整合进杆状病毒基因组中。将Bm vp1和Bm vp2共感染 5龄家蚕 ,通过表达产物免疫SPF鸡产生的抗血清与CAV感染的MDCC MSB1细胞的间接荧光抗体分析 ,证明表达产物能诱导鸡产生相应的抗体 ,而且能够保护子代鸡免受CAV的攻击。该研究表明 ,表达VP1和VP2蛋白的重组家蚕杆状病毒 (RecombinantBmNPV) 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 vp1 vp2 重组杆状病毒 家蚕 基因表达
下载PDF
表达PCV-2 Cap和PPV-1 VP2蛋白的重组PRV的构建及鉴定 被引量:1
18
作者 谢永兴 夏德利 +5 位作者 黄立平 危艳武 吴洪丽 朱红振 冯力 刘长明 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期16-22,175,共8页
为了构建表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白和猪细小病毒1型(PPV-1)VP2蛋白的重组伪狂犬病病毒(PRV)及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基因(VP2_(opti))和含PRV gG蛋白信号肽序列的VP2_(opti)... 为了构建表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白和猪细小病毒1型(PPV-1)VP2蛋白的重组伪狂犬病病毒(PRV)及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基因(VP2_(opti))和含PRV gG蛋白信号肽序列的VP2_(opti)基因分别构建重组质粒pMD18T-LR(TK)-VP2_(opti)和pMD18T-LR(TK)-VP2_(opti)(SP)。用已构建的重组病毒rPRV-TK^-/gE^-/gG^-/3Cap^+为骨架,以EGFP为标签经同源重组获得重组病毒。采用IPMA法鉴定Cap蛋白和VP2蛋白抗原在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达,采用IFA法鉴定VP2蛋白在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达与定位。用这2株重组病毒免疫小鼠,通过检测血清中PRV、PCV-2和PPV-1抗体水平对构建的重组病毒在小鼠体内的免疫原性进行评价。结果表明:经同源重组获得重组病毒rPRV-TK^-/VP2^+/gE^-/gG^-/2Cap^+和rPRV-TK^-/VP2^+(SP)/gE^-/gG^-/2Cap^+;在重组病毒感染的PK-15细胞中均能检测到阳性Cap蛋白和VP2蛋白抗原;重组病毒rPRV-TK^-/VP2^+/gE^-/gG^-/2Cap^+表达的VP2蛋白定位于细胞浆和细胞核,而重组病毒rPRV-TK^-/VP2^+(SP)/gE^-/gG^-/2Cap^+表达的VP2蛋白定位于细胞浆;用这2株重组病毒免疫小鼠能够检测到PRV中和抗体;用灭活的重组病毒免疫小鼠后可产生低水平的Cap和VP2抗体,而重组病毒活毒免疫的小鼠未检测到相应抗体。说明这2株重组病毒在体外能够表达Cap蛋白和VP2蛋白,PRV gG蛋白信号肽序列的加入促进了VP2蛋白从细胞核的释放。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 CAP蛋白 细小病毒1型 vp2蛋白 重组伪狂犬病病毒 重组质粒 免疫原性
下载PDF
犬细小病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用 被引量:9
19
作者 姜骞 李慕瑶 +6 位作者 刘家森 司昌德 葛艳华 郭东春 韩凌霞 孟庆文 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期141-144,共4页
本研究以纯化的犬细小病毒(CPV)重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测CPV抗体的间接ELISA方法,其抗原包被浓度为0.158μg/mL;待检血清稀释倍数为1∶100,作用时间为60min;羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2000,作用时间为60min;底物作用时间为10... 本研究以纯化的犬细小病毒(CPV)重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测CPV抗体的间接ELISA方法,其抗原包被浓度为0.158μg/mL;待检血清稀释倍数为1∶100,作用时间为60min;羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2000,作用时间为60min;底物作用时间为10min;判定标准为S/P≥0.282时为阳性,S/P≤0.226时为阴性。该方法与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬副粘病毒病、犬波特氏杆菌病等4种犬常见传染病阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于15%,显示该方法具有良好的重复性;与商品化CPVELISA试剂盒进行比较,符合率为96.5%。本研究为现地免疫犬群抗体监测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 细小病毒 重组vp2蛋白 间接ELISA
下载PDF
检测犬瘟热病毒和犬细小病毒复合型胶体金免疫层析试纸的研制 被引量:2
20
作者 贺英 潘素敏 +2 位作者 史秋梅 张艳英 邵新华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期81-84,164,共5页
为了制备检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)复合型胶体金免疫层析试纸,试验采用辛酸-硫酸铵法纯化获得的单克隆抗体样品,采用一膜包被2个抗体的方法,用混合后的金标记抗貉源细小病毒VP2单克隆抗体和胶体金标记抗水貂源犬瘟热病毒单... 为了制备检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)复合型胶体金免疫层析试纸,试验采用辛酸-硫酸铵法纯化获得的单克隆抗体样品,采用一膜包被2个抗体的方法,用混合后的金标记抗貉源细小病毒VP2单克隆抗体和胶体金标记抗水貂源犬瘟热病毒单克隆抗体作为示踪物,建立了CPV和CDV感染快速鉴别诊断试纸条。结果表明:本方法特异性强,灵敏度高,且操作简便、结果判定直观,可以用于貉、貂、狐等毛皮动物CPV和CDV感染的检测与鉴别诊断。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 细小病毒 重组蛋白vp2 单克隆抗体
下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部