重组水蛭素-2鼻腔喷雾剂的药代动力学和药效学

目的研究重组水蛭素-2(rHV2)喷雾剂鼻腔给药后在大鼠体内的药代动力学过程及其抗凝血作用。方法采用呈色肽法测定大鼠鼻腔给予rHV2喷雾剂后血浆中rHV2的浓度,并计算其药代动力学参数;考察rHV2鼻腔喷雾剂对正常大鼠和弥散性血管内凝血模型(D IC)家兔凝血时间的影响。结果rHV2喷雾剂鼻腔给药后,rHV2的体内过程符合一室模型,其相对生物利用度为28.53%;rHV2鼻腔喷雾剂可使正常大鼠活化的部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)明显延长,使D IC模型家兔的APTT凝血时间明显缩短,接近正常值。结论药代动力学和药效学结果证明,rHV2鼻腔喷雾剂有望成为rHV2鼻腔给药的有效制剂。

重组水蛭素-2脂质体的制备及大鼠鼻腔给药药代动力学

目的：为了提高重组水蛭素-2（rHV2）鼻腔给药的生物利用度,研制rHV2脂质体并对其理化性质和大鼠经鼻给药后药代动力学特点进行研究。方法：以逆相蒸发法制备rHV2脂质体;通过研究rHV2脂质体的包封率、粒径、稳定性来考察其理化性质;将制备的rHV2脂质体鼻腔给予大鼠,用呈色肽法测定不同时间血浆中rHV2的浓度,通过3p87程序拟合药代动力学参数。结果：用该法制备的脂质体包封率约为76.95%,平均粒径为168.3nm,分布在24-286 nm,相对峰宽±0.47,稳定性较好;药代动力学研究表明,rHV2脂质体较rHV2生理盐水溶液的鼻腔吸收明显增加。结论：将rHV2制备成脂质体可明显增加鼻腔给药的生物利用度。

重组水蛭素-2在家兔鼻黏膜中降解的体外实验

目的考察重组水蛭素-2(rHV2)在家兔鼻黏膜中的降解情况。方法建立用HPLC测定家兔鼻黏膜和肠黏膜组织匀浆液中rHV2浓度的方法;测定不同浓度rHV2在家兔鼻黏膜组织匀浆液中及rHV2在不同pH值的家兔鼻黏膜组织匀浆液中的降解;比较家兔鼻黏膜和肠黏膜组织匀浆液对rHV2的降解;考察rHV2在家兔鼻黏膜酶提取液中的稳定性以及加入酶抑制剂对rHV2在家兔鼻黏膜组织匀浆液降解的抑制作用。结果rHV2在鼻黏膜匀浆液中的降解具有明显的药物浓度和pH依赖性;rHV2在鼻黏膜匀浆液中的稳定性优于在肠黏膜匀浆液中的稳定性;鼻黏膜酶提取液对rHV2的降解作用较小;酶抑制剂杆菌肽对rHV2在鼻黏膜匀浆液中的降解具有一定的抑制作用。结论与口服给药途径相比,rHV2鼻腔给药更有优势。

重组水蛭素-2鼻腔给药纳米粒冻干粉制备工艺及体外渗透特性研究

目的:优选重组水蛭素-2(rHV2)鼻腔给药纳米粒冻干粉最佳制备工艺;考察rHV2纳米粒冻干粉稳定性及经家兔鼻黏膜的体外渗透特性。方法:选用不同冻干保护剂制备水蛭素纳米粒冻干粉末,以外观、再分散性及包封率作为评价指标,对冻干保护剂及制备工艺进行优选,并考察了光照、高温等因素对冻干粉的影响;采用直立式扩散池法,以家兔鼻中隔黏膜为渗透屏障,测定rHV2壳聚糖溶液、rHV2纳米粒溶液及冻干粉的渗透系数(P),并计算与rHV2生理盐水溶液的促渗比(ER)。结果:rHV2鼻腔给药纳米粒冻干粉最佳制备工艺为:用5%甘露醇与葡萄糖(1∶1)作为冻干保护剂,于-70℃预冻24h后,置真空冻干箱中冷冻干燥,24h后取出,该冻干粉中rHV2的含量为1.1μg/mg。光照对rHV2纳米粒冻干粉的外观、再分散性以及包封率影响均较小,而高温对rHV2纳米粒冻干粉的影响较大;rHV2壳聚糖纳米粒具有较高的渗透系数,是生理盐水组的5倍多,冻干粉仍然保持了良好的渗透性。结论:壳聚糖鼻腔给药纳米粒冻干粉有可能成为rHV2鼻腔给药的良好给药剂型。

重组水蛭素-2鼻腔给药纳米粒制备工艺研究

目的优选重组水蛭素-2(rHV2)鼻腔给药纳米粒最佳制备工艺。方法采用壳聚糖与三聚磷酸钠复凝聚法,以包封率、载药量等为评价指标,以单因素考察和正交试验设计,对壳聚糖黏附纳米粒制备过程中有关影响因素及工艺参数进行优化。结果壳聚糖的类型、壳聚糖溶液的pH值、壳聚糖与多聚磷酸钠的最终质量比以及搅拌速率对rHV2纳米粒的包封率和载药量均有较显著影响;优选工艺的包封率可达到70%以上,载药量>8%。结论经优选的工艺稳定可靠,可用于rHV2鼻腔给药纳米粒的制备。

重组水蛭素-2鼻腔黏附纳米粒的体外评价

目的:对制备的重组水蛭素-2(rHV2)壳聚糖鼻腔黏附纳米粒进行体外评价。方法:测定纳米粒的形态、粒径大小分布及表面电位;以超速离心测定纳米粒在不同介质中的释放度;采用在体蟾蜍上腭纤毛运动试验法考察纳米粒的纤毛毒性。结果:制备的rHV2壳聚糖纳米粒呈较为均匀分散的颗粒状,平均粒径为213.2 nm,纳米粒带正电荷,Zeta电位值为+30.61 mV,体系相对稳定性较高;rHV2纳米粒在乙酸缓冲液中的累积释放百分数明显高于在磷酸缓冲液中的累积释放百分数;rHV2纳米粒溶液的纤毛毒性较小(与生理盐水组相比,P>0.05)。结论:壳聚糖鼻腔黏附纳米粒有望成为rHV2鼻腔给药的递释系统。

重组水蛭素-2鼻腔黏附纳米粒及其冻干粉药代动力学和抗凝活性研究

目的:对重组水蛭素-2(rHV2)鼻腔壳聚糖(CS)黏附纳米粒及其冻干粉进行药代动力学和抗凝活性评价。方法:采用呈色肽比色法检测rHV2血药浓度;以正常麻醉大鼠为模型,测定经鼻腔给予rHV2生理盐水溶液、rHV2纳米粒溶液及其纳米粒冻干粉复溶液的药-时曲线,计算药代动力学参数及与rHV2生理盐水溶液皮下注射给药的相对生物利用度;同时以部分凝血活酶时间(APTT)为指标比较它们的抗凝活性。结果:rHV2纳米粒比其生理盐水溶液鼻腔给药的相对生物利用度提高了8.99倍,rHV2纳米粒冻干粉复溶液也较其生理盐水溶液鼻腔给药的相对生物利用度提高了8.48倍。rHV2纳米粒及其冻干粉鼻腔给药后,均表现出显著的抗凝血活性,而rHV2生理盐水鼻腔给药则基本无效。结论:制备的rHV2鼻腔壳聚糖黏附纳米粒制剂具有较高的生物利用度,制成冻干粉后,仍保持较高的生物利用度。由于rHV2冻干粉制剂稳定性更高,有望成为rHV2经鼻腔给药的有效制剂。

重组水蛭素口服给药的抗凝效应

目的:考察不同剂量重组水蛭素-2(rHV2)口服给药后的抗凝效应。方法:以凝血时间(ClottingTime,CT)和凝血酶时间(Thrombin Time,TT)为指标,测定大鼠口服不同剂量的rHV2的抗凝效应。结果:rHV2口服给药后,凝血时间及凝血酶时间试验均表现出显著的抗凝效果,并且从给药后1h到4h抗凝效应一直延续。当rHV2剂量范围在50mg·kg-1-100mg·kg-1之间,抗凝血效应随着剂量的增加而加强,说明抗凝血效应是有剂量依赖性的。结论:rHV2经大鼠口服后能够产生抗凝效应,说明rHV2的口服是可行的。