热休克蛋白60及重组热休克蛋白60对U937细胞IL-6分泌量的影响

目的观察重组热休克蛋白60(hsp60)对U937细胞分泌细胞因子IL-6的影响。方法对幽门螺杆菌标准株26695的基因进行定点突变,利用重叠延伸PCR法使1398和1399位点的AG突变为GC,获得重组hsp60基因片段并构建原核表达质粒pEASY-E1-rhsp60,经IPTG诱导在大肠杆菌表达突变型rhsp60,将50、100、200μg/mL的rhsp60(rhsp60组)、hsp60(hsp60组)分别与U937细胞共培养,于12、18、24 h收集上清液,ELISA法检测上清中细胞因子IL-6水平,设PBS对照组。结果 rhsp60组、hsp60组IL-6分泌水平均明显高于对照组(P均<0.05),且同时点同浓度下rhsp60组IL-6分泌水平明显高于hsp60组(P均<0.05),IL-6的分泌随着蛋白刺激浓度的升高而增高。结论 rhsp60与hsp60皆可促进U937细胞分泌IL-6,胃癌来源的rhsp60使IL-6分泌量更多。

热休克蛋白60在激活的少突胶质前体细胞的表达

目的研究热休克蛋白60(HSP60)在重组人干扰素-γ(IFN-γ)和重组人热休克蛋白60(rhHSP60)激活的少突胶质前体细胞中的表达情况。方法分离SD大鼠的少突胶质细胞前体细胞(OPC),经IFN-γ和rhHSP60激活后,应用western blot方法检测细胞中的HSP60蛋白的表达;采用ELISA方法检测细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-6的释放量。结果经IFN-γ和rhHSP60分别激活后,OPC胞体内的HSP60蛋白表达均显著升高,胞外TNF-α及IL-6的释放量也明显增加。结论在激活状态下,OPC中的HSP60蛋白表达显著增高,刺激细胞产生大量炎症因子,从而参与细胞的应激反应。

宁心痛颗粒抑制HSP60诱导MyD88^(-/-)THP-1细胞炎症反应

目的利用siRNA沉默THP-1源性巨噬细胞(Mφ)的髓样分化因子88(MyD88)基因表达,论证MyD88在介导重组人热休克蛋白60(rhHSP60)诱导Mφ炎症反应中的作用及益气活血方宁心痛颗粒含药血清的抗炎机制。方法 THP-1细胞诱导分化为Mφ,分为空白对照组、模型组、阴性对照组、RNAi组(MyD88^(-/-)Mφ)、含药血清组、RNAi+含药血清组共6组,荧光定量PCR法测定MyD88基因表达,免疫印迹法测定MyD88及磷酸化核因子κB(p-NF-κB)的蛋白表达,酶联免疫法测定TNF-α、IL-6的含量。结果 1模型组MyD88基因表达升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);RNAi组、含药血清组分别与模型组相比表达均下降,差异有统计学意义(P均<0.01);含药血清可增强siRNA的抑制作用,RNAi+含药血清组与RNAi组相比,差异有统计学意义。2模型组MyD88及p-NF-κB蛋白表达升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.01);RNAi组二者表达均下降,与模型组相比,差异有统计学意义;含药血清可增强siRNA的抑制作用,RNAi+含药血清组与空白对照组相比,差异无统计学意义。3模型组TNF-α、IL-6含量升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均<0.01);转染MyD88 siRNA可抑制二者升高,RNAi组与模型组相比,差异具有统计学意义(P均<0.01);含药血清单独使用可抑制二者升高,并可增强siRNA的抑制效果,RNAi+含药血清组与RNAi组相比差异有统计学意义(P均<0.01)。结论 MyD88/NF-κB是人热休克蛋白60诱导THP-1源性Mφ发生炎症反应的关键信号通路,宁心痛颗粒含药血清可通过调控该信号通路发挥抗炎作用。