重组牛乳铁蛋白肽包含体的复性与纯化

通过分析透析液pH值,包含体蛋白浓度,DTT浓度3个参数对复性率的影响,确定了重组牛乳铁蛋白N-末端多肽(pGEX-4T1/rbLF-N)包含体透析复性的最佳条件和复性后蛋白纯化的适宜方法。采用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B柱(Glutathione SapharoseTM 4B)对复性后的蛋白溶液进行纯化,纯化后的融和蛋白经胃蛋白酶酶解并检测其酶解产物的抗菌活性。试验表明包涵体蛋白可以部分复性。当pH值为8.5,包含体蛋白质量浓度为100mg/L,DTT浓度为24 mmol/L时,包含体的复性率最高。纯化后的融合蛋白酶解产物具有抗菌作用。

重组牛乳铁蛋白N末端多肽对真空包装猪肉品质的影响

以Nisin和乳酸作为参照,采用本试验室获得的重组牛乳铁蛋白肽对生鲜猪肉进行保藏试验。生鲜猪肉浸沾并真空包装后置于4℃下存放,测定肉样的微生物数、抗氧化值(TBA)、pH值、肉的红度值(Huntera)及感官评价。结果显示,重组的牛乳铁蛋白肽保鲜效果优于Nisin组,接近乳酸组。其保鲜期可达到19d。

重组大肠杆菌BL21(DE3)/rbLF-N高密度培养条件优化

研究了6种不同培养基,pH值和诱导条件对表达量的影响。结果表明,培养基为2×TY+M9+微量元素溶液,pH值为7.0,在对数生长中后期(OD600=1.96)用浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导4 h,rbLF-N的表达量最高,达到25.2%。在此条件下,用Bioengineering 19 L自控式发酵罐,以pH-stat的培养技术,高密度培养重组E.coli BL21(DE3)/pGEX-4T1,生产重组牛乳铁蛋白N末端多肽(recombinant bovine lactoferrin-N polypeptide,rbLF-N)。通过控制pH值、溶解氧以及补料方式,使工程菌E.coli BL21(DE3)/pGEX-4T1的发酵菌体OD600值达到72.6,发酵菌体干重为31.9 g/L,rbLF-N表达量为菌体总蛋白的26.8%。