保幼激素类似物对重组甜菜夜蛾核多角体病毒SeXD1增殖的影响

用重组甜菜夜蛾核多角体病毒SeXD1感染甜菜夜蛾幼虫,并于同龄期点滴保幼激素类似物Methoprene（ZR-515）,研究其对SeXD1增殖的影响。研究表明,用5×10^7PIB/ml的SeXD1感染甜菜夜蛾五龄幼虫,并以2μg/头Methoprene点滴处理效果最佳,其感染死亡率、平均单头病毒含量、病毒总产量分别为95.3%、8.6×10^8PIBs/头和2.45×10^11PIBs;比对照提高65.1%、115.0%和264.1%。研究了Methoprene对染毒及未染毒宿主消化生理的影响。结果显示,Methoprene处理不仅延长甜菜夜蛾幼虫历期,增加其取食量,还显著提高幼虫的食物转化率。

甜菜夜蛾核型多角体病毒vp39基因重组真核表达质粒的构建及鉴定

利用DNA重组技术 ,将杆状病毒极早期基因ie1启动子基因克隆至重组质粒pGEM Se39中 ,成功地构建了重组真核表达质粒pGEM IE1 Se39.

基因重组核型多角体病毒AcMNPV-AaIT对甜菜夜蛾幼虫的毒力研究

研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPV AaIT和野生型多角体病毒AcMNPV C6对甜菜夜蛾的病原性,并添加感染增效物质,研究其增效作用。结果表明:AcMNPV AaIT对甜菜夜蛾3、4龄幼虫的LD50分别为151、379PIB/头,比AcMNPV C6少39、906PIB/头;LT50分别比AcMNPV C6缩短1.1d和1.5d;昆虫病毒感染增效物质具有强烈的感染增效作用,增效比值为617倍。

甜菜夜蛾核多角体病毒BAC-TO-BAC外源基因表达系统的建立

用直接克隆法将miniF lacZ attTn7 kan片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhe drovirus,SeMNPV)美国分离株 (SeUS1)基因组的多角体蛋白基因框内 ,miniF是大肠杆菌F因子复制子 ,携带miniF的重组病毒能够在大肠杆菌中低拷贝稳定复制 ,称为bacmid。由于SeUS1由不同的SeMNPV基因型组成 ,每个bacmid携带了一种病毒基因型 ,所有bacmid构成了SeUS1分离株的BAC文库。REN对 111个bacmid分析表明 ,SeUS1分离株中除了包含具有完整SeMNPV遗传信息的基因型外 ,还包括不同类型的缺失基因型。将具有完整SeMNPV基因组的基因型SeBAC10转染昆虫细胞 ,可产生子代病毒 ,故SeBAC10是一种在真核细胞和原核细胞中均能复制的穿梭质粒。因为SeBAC10中多角体蛋白基因 (Seph)被插入失活 ,将Seph作为报告基因通过位点特异性重组方式插入位于LacZ框内转座子Tn7的附着靶位点attTn7,得到重组SeBAC10 (即SeBAC10ph)转染甜菜夜蛾培养细胞Se3 0 1后 ,细胞出现典型的病理变化 ,核中出现多角体 ,证明SeMNPVBAC TO

荧光增白剂对重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的增效作用

以 β -半乳糖苷酶基因为标志基因的重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体 (AcMNPV -hsp70 /lacZ)研究光增白剂对该病毒的增效作用及其作用方式 .通过病毒毒力的生物测定表明 :光增白剂FB - 2 8能提高甜菜夜蛾幼虫的死亡率 ,降低半致死浓度 ,缩短半致死时间 ;光增白剂的增效作用与感染虫龄有关 .此外 ,应用组织切片技术对中肠组织病理以及血淋巴细胞感染观察表明 :在幼虫的病毒接种物中添加合适浓度的荧光增白剂不会改变病毒在幼虫中肠组织中的感染部位 ,却可以提高幼虫对病毒的敏感性 ,产生更多的病灶 .图版 1图 4表 3参

表达蝎毒素的重组斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltMNPV)的构建及毒力

【目的】开发高毒力的重组斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedroviruse,SpltMNPV)杀虫剂。【方法】构建编码蜕皮激素UDP-葡萄糖基转移酶(ecdysterioid UDP-glucosyl transferase gene,egt)基因缺失并插入东亚钳蝎神经毒素(B.martensi Karsch,BmK ITa1)基因的重组转移载体,重组转移载体与SpltMNPVⅡ基因组DNA共转染斜纹夜蛾细胞,通过荧光斑法与有限稀释法相结合筛选重组病毒。【结果】成功筛选出缺失egt基因的、早期启动子(ie-1)启动的、表达BmK ITa1成熟肽的重组病毒SpltMNPV-Δegt-Pph-egfp-ie-1-BmK ITa1。生物测定结果显示,重组病毒的杀虫速度(LT50)较野生病毒提前0.7-0.8 d。【结论】通过在SpltMNPV病毒基因组中插入外源毒素基因可明显增强病毒的杀虫效果,结果说明开发高毒力SpltMNPV生物杀虫剂具有可行性。

杆状病毒在细胞水平上异源重组规律初探

无包涵体的重组粉纹夜蛾核多角体病毒TnNPV-galF7(简称vF7)和野生型斜纹夜蛾核多角体病毒(SINPV)或甜菜夜蛾核多角体病毒(SeNPV)的非包埋病毒粒子混和,分别接种甜菜夜蛾SE-1细胞,和草地夜蛾SF-21细胞,以出现多角体为重组标记,探讨在细胞水平上异原杆状病毒的重组及其扩大寄主范围的可能性,在SF-21细胞中,vF7与SINPY重组而在SE-1细胞中二者不重组,F7与SeNPY混和,分别接种SF-21和SE-1细胞,无重组发生。