重组病毒巨噬细胞炎性蛋白抗SIVmac251的体外研究

目的研究重组病毒巨噬细胞炎性蛋白vMIP体外抗猴艾滋病毒SIVmac作用效果和机制。方法分别在SIVmac接种前后将敏感细胞系与重组vMIP作用,检测细胞系病变(CPE)情况和病毒滴度水平,培养上清P27抗原水平。结果先用重组vMIP处理过的细胞,病毒感染后细胞病变程度很轻,培养上清P27抗原和病毒滴度水平明显低于对照组,先感染病毒再用重组vMIP处理组,病毒P27抗原水平和细胞内病毒滴度水平也显著降低,但降低程度不如先用重组vMIP处理后感染病毒组。结论重组vMIP有明显的抑制病毒进入靶细胞和保护靶细胞免受病毒感染的作用,进入靶细胞的抑制作用强于对已感染细胞的病毒抑制作用;说明主要作用机制为阻止病毒进入靶细胞,同时可能也通过某种机制抑制细胞内SIVmac病毒的产生。

重组病毒巨噬细胞炎性蛋白对HIV-1_(SF1)的体外抑制作用

目的:研究重组病毒巨噬细胞炎性蛋白(rvMIP)体外的抗HIV-1SF1作用效果和机制。方法:分别在HIV-1SF1接种前后将敏感的MT-4细胞系与rvMIP作用,检测MT-4细胞系病变情况和培养上清的P24抗原水平,用有限稀释PCR法测定前病毒DNA水平。结果:预先用rvMIP处理过的细胞,病毒感染后细胞病变程度很轻,培养上清的P24抗原和前病毒水平明显低于对照组,P24抗原抑制率可达90%;先感染病毒再用rvMIP处理组病毒P24抗原水平和细胞内前病毒DNA水平也显著降低,但降低程度不如先用rvMIP预处理组。结论:rvMIP能阻止病毒进入靶细胞,同时可能也通过某种机制抑制已感染细胞HIV病毒的复制。

重组病毒巨噬细胞炎性蛋白在大鼠体内的药动学及组织分布

目的了解重组病毒巨噬细胞炎性蛋白(vMIP)在SD大鼠体内的药动学及组织分布。方法对vMIP进行碘标、分离纯化和鉴定,然后利用其进行药动学实验。采用同位素示踪法测量vMIP在SD大鼠体内的药动学,并检测其在大鼠组织中的分布。结果60,240μg·kg-12个剂量组(静脉注射给药)的主要药动学参数分别为ρmax(249·4±84·50),(887·01±204·22)μg·L-1;t1/2β(1·5±0·28),(2·65±0·85)h;AUC0-∞(136·0±40·70),(493·84±49·42)μg·h·L-1。tmax10·0min。结论vMIP进入大鼠体内主要分布在肝和肺,在体内消除较快,其动力学特征符合一级吸收二室开放模型。

重组病毒巨噬细胞炎性蛋白致畸胎研究及骨髓微核实验

目的:研究重组病毒巨噬细胞炎性蛋白(rvMIP)的致畸胎和致细胞染色体损伤作用。方法:采用大鼠致畸胎、小鼠骨髓微核实验。结果:不同浓度的rvMIP实验组SD大鼠母鼠的畸胎率分别为29%,17%和25%,胎鼠总畸形率分别为3.1%,2.5%和1.6%。NIH小鼠骨髓微核率在给药后24h雌鼠分别为1.50,1.00和1.00,嗜多染红细胞与正染红细胞比值(PCE/NCE)分别为0.4,0.4和0.5,雄鼠分别为1.33,1.33和1.67,PCE/NCE比值分别为0.6,0.5和0.5。给药后48h的微核率雌鼠分别为2.00,1.33和1.33,PCE/NCE比值分别为0.5,0.5和0.5,雄鼠分别为1.50,2.00和1.00,PCE/NCE比值分别为0.3,0.4和0.5。各项检测指标在实验组与阴性对照组之间差别没有显著意义,P>0.05;在实验组与阳性对照组之间差别有非常显著意义,P<0.01。结论:在本实验条件下,rvMIP没有致畸胎和细胞染色体损伤作用。

血清人分泌型磷脂酶A2、人可溶性髓系细胞触发受体-1、巨噬细胞炎性蛋白3α在妊娠合并获得性重症肺炎患者中的临床应用价值

目的探讨血清人分泌型磷脂酶A2(sPLA2)、人可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)、巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α)在妊娠合并获得性重症肺炎(SCAP)疾病中的临床应用价值。方法选择2019年2月至2023年1月我院收治疗80例妊娠合并SCAP患者作为研究组,同期100例妊娠合并获得性非重症肺炎患者作为对照组,比较两组血清sPLA2、sTREM-1、MIP-3α水平、急性生理学及慢性健康状况评分系统II(APACHE-II)评分及孕妇妊娠结局与新生儿结局,经Spearman分析妊娠合并SCAP患者血清sPLA2、sTREM-1、MIP-3α水平与APACHE-II评分的关系;采用多元Logistic回归分析影响妊娠合并SCAP患者新生儿结局发展的因素。结果研究组血清sPLA2、sTREM-1、MIP-3α水平及APACHE-II评分明显高于对照组,其孕产妇不良妊娠结局发生率以及新生儿出现感染、窒息、败血症、宫内窘迫、新生儿肺炎发生率均高于对照组(P<0.05);经Spearman分析发现妊娠合并SCAP患者sPLA2、sTREM-1、MIP-3α水平与APACHE-II评分存在正相关(P<0.05);多元Logistic回归分析显示高水平sPLA2、sTREM-1、MIP-3α水平及APACHE-II评分升高是妊娠合并SCAP患者新生儿不良结局的危险因素(P<0.05);ROC曲线分析提示MIP-3α、sTREM-1、sPLA2均可预测妊娠合并SCAP患者新生儿不良结局,其中sTREM-1的诊断效能最高(P<0.05)。结论血清sPLA2、sTREM-1、MIP-3α与妊娠合并SCAP患者病情发展密切相关,能有效预测新生儿结局发展,可应用于临床。

血清tau蛋白和巨噬细胞炎性蛋白1α及胶质纤维酸性蛋白与高血压脑出血后血脑屏障的关系

目的探究血清tau蛋白、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平与高血压脑出血后血脑屏障损伤的关系。方法纳入2020年8月至2022年12月阳光融和医院收治的高血压脑出血患者180例作为研究组,选取同期来我院体检的健康人群180例作为对照组。根据白蛋白商值(QAlb)评估患者血脑屏障损伤,将研究组180例患者分为轻度组83例(QAlb 7.5~10)、中度组54例(10<QAlb≤30)、重度度组43例(QAlb>30)。对研究组180例患者展开6个月随访,根据改良的Rankin量表(mRS)评分评估预后,分为预后良好组119例(mRS评分0~2分)和预后不良组61例(mRS评分3~6分)。检测血清tau蛋白、MIP-1α和GFAP水平,分析血清tau蛋白、MIP-1α和GFAP水平与患者血脑屏障损伤和预后的关系。结果研究组血清tau蛋白、MIP-1α和GFAP水平显著高于对照组(P<0.01)。中度组、重度组tau蛋白水平显著高于轻度组,重度组MIP-1α和GFAP水平显著高于轻度组(P<0.05)。预后不良组血清tau蛋白、MIP-1α和GFAP水平显著高于预后良好组(P<0.01)。血清tau蛋白(r=0.532,P=0.000)、MIP-1α(r=0.487,P=0.001)和GFAP(r=0.571,P=0.000)分别与QAlb呈正相关。血清tau蛋白(r=0.507,P=0.000)、MIP-1α(r=0.425,P=0.004)和GFAP(r=0.533,P=0.000)分别与mRS评分呈正相关。ROC曲线分析显示,血清tau蛋白和MIP-1α及GFAP三者联合评估患者预后的曲线下面积为0.848(95%CI:0.787~0.897,P=0.000),显著高于三者单一检测。结论高血压脑出血患者血清tau蛋白、MIP-1α和GFAP水平较健康人群明显升高,与脑出血后血脑屏障损伤程度和预后密切相关。

巨噬细胞炎性反应蛋白3β复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定

目的构建小鼠巨噬细胞炎性反应因子-3β(mMIP3β)的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-mMIP3β),并在体外表达MIP3β。方法通过在细菌BJ5183内同源重组,利用AdEasyTM系统构建Ad-mMIP3β,经过噬斑筛选、PCR鉴定,然后用CsCl不连续密度梯度离心纯化。利用RT-PCR和Western blot方法研究Ad-mMIP3β的体外表达情况。结果成功构建了MIP3β的复制缺陷型重组腺病毒,并检测到分泌到胞外的MIP3β蛋白。结论MIP3β的复制缺陷型重组腺病毒构建成功,为下一步的肿瘤基因治疗研究奠定了基础。

巨噬细胞炎性蛋白1α对人牙周膜干细胞生物学行为的影响

背景:目前大量研究集中于炎症因子对人牙周膜干细胞的影响,然而关于趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)在人牙周膜干细胞中的表达,国内外相关文献报道较少。目的:探究不同质量浓度MIP-1α对人牙周膜干细胞增殖、凋亡及迁移的影响及与Notch信号通路的相关性。方法:将12-25岁患者(均签署知情同意书)拔下的健康正畸减数前磨牙,通过组织块法联合酶消化法分离培养人牙周膜干细胞。将第3代对数生长期人牙周膜干细胞分为对照组和1,10,100 mg/L MIP-1α组,干预第1,3,5,7天采用CCK-8法检测细胞增殖能力,干预48 h采用流式检测细胞凋亡能力,Transwell小室检测细胞迁移能力,ELISA检测分泌肿瘤坏死因子α水平,qRT-PCR、Western blot检测Notch1、Hes1mRNA和蛋白表达量。结果与结论:(1)1 mg/L MIP-1α对人牙周膜干细胞生物学行为无明显影响,10 mg/L MIP-1α显著促进人牙周膜干细胞的增殖及迁移,而100 mg/L MIP-1α显著促进人牙周膜干细胞的凋亡,抑制人牙周膜干细胞的增殖和迁移;(2)1 mg/L MIP-1α对人牙周膜干细胞中Notch1及Hes1蛋白表达无明显影响;10 mg/L MIP-1α对人牙周膜干细胞中Notch1蛋白表达无显著影响,但可下调细胞中Hes1蛋白表达水平,100 mg/L MIP-1α可上调细胞中Notch1及Hes1蛋白表达水平;(3)1 mg/L MIP-1α组人牙周膜干细胞分泌的肿瘤坏死因子α水平与对照组无显著差异;10 mg/L MIP-1α促进肿瘤坏死因子α分泌;100 mg/L MIP-1α抑制肿瘤坏死因子α分泌;(4)结果表明:10 mg/L MIP-1α促进人牙周膜干细胞增殖、迁移及肿瘤坏死因子α分泌,其机制可能与下调Notch信号通路相关;100 mg/L MIP-1α抑制人牙周膜干细胞增殖、迁移及肿瘤坏死因子α分泌,促进人牙周膜干细胞凋亡,其机制可能与上调Notch信号通路有关。

病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ N端肽调控SDF-1α/CXCR4诱导趋化机制

目的:评价病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN端肽(NT21MP)是否通过干扰SDF-1α/CXCR4信号抑制人乳腺癌细胞株SKBR3细胞的趋化作用。方法:以RT-PCR和免疫组化检测SKBR3和MCF-7两种人乳腺癌细胞中CXCR4的表达;用细胞转移实验检测在NT21MP存在或缺乏的情况下SDF-1α诱导SKBR3细胞的趋化作用;以Fluo3/AM为细胞内游离钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜测定NT21MP对SDF-1α诱导SKBR3细胞内游离钙浓度的影响;Western blot分析ERK1/2和FAK蛋白的磷酸化水平变化。结果:相对于MCF-7细胞,SKBR3细胞中CXCR4蛋白表达水平较高;经SDF-1α处理后,SKBR3的迁移能力提高,CXCR4抑制剂AMD3100可有效抑制SKBR3细胞的迁移,细胞经NT21MP预处理后,可剂量依赖性地抑制SKBR3细胞的迁移(P<0.05);NT21MP也可抑制由SDF-1α诱导的细胞内Ca2+峰值(P<0.05),而钙离子浓度升高是SKBR3细胞迁移的重要信号之一;另外,相对于阴性对照组,NT21MP也可下调SDF-1α诱导的SKBR3中信号蛋白ERK1/2和FAK的磷酸化水平(P<0.05)。结论:NT21MP可抑制SDF-1α诱导的SK-BR3细胞的迁移,可能与其上游钙离子释放和ERK1/2及FAK磷酸化阻断信号有关。

巨噬细胞炎性蛋白-2在病毒性心肌炎小鼠中的表达及黄芪的干预作用

目的:探讨巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)在病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌中的表达及黄芪的干预作用。方法:将40只雄性Bal b/c小鼠随机分为正常对照组[腹腔接种不含柯萨奇B3病毒(CVB3)的Eagle’培养液,10例]、模型组(15例)和治疗组(15例),模型组和治疗组腹腔接种CVB3建立VMC模型,治疗组腹腔注射黄芪注射液(10g/kg.d),其余两组注射等容积生理盐水。第14d处死小鼠,行苏木素伊红(HE)染色计算心肌病理积分,用化学发光法检测肌钙蛋白(cTnI),蛋白质免疫印迹法检测MIP-2蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MIP-2 mRNA表达。结果:14d后,治疗组生存率较模型组明显升高(80.0%∶53.33%,P<0.05);与正常对照组比较,模型组病理积分[0分∶(2.57±0.48)分]、血清cTnI水平[(0.27±0.04)ng/mL∶(0.62±0.17)ng/mL]、心肌MIP-2 mRNA[(0.31±0.06)∶(0.92±0.23)]及蛋白表达[(0.24±0.05)∶(0.67±0.18)]水平均明显提高(P<0.01),且MIP-2蛋白表达与病理积分和cTnI呈正相关(r=0.89,P<0.01;r=0.74,P<0.05);治疗组病理积分[(1.42±0.27)分]、cTnI[(0.39±0.11)ng/mL]、MIP-2 mRNA[(0.71±0.18)]及蛋白表达[(0.43±0.12)]较模型组明显降低(P均<0.05)。结论:病毒性心肌炎MIP-2表达显著增加,其表达水平与心肌病变严重程度密切相关,提示MIP-2参与病毒性心肌炎发病过程,减少其产生可能是黄芪治疗病毒性心肌炎的机制之一。

病毒巨噬细胞炎性蛋白与趋化因子受体结合的效应分析

目的:探讨人疱疹病毒8 K6基因编码的产物病毒巨噬细胞炎性蛋白(viral m acrophage inflamm atory prote in,vM IP)是否具有结合趋化因子受体以及趋化作用。方法:受体配体交联试验检测vM IP与受体结合能力。趋化实验及细胞内钙流检测判断vM IP的生物学活性。结果:vM IP可与外周血单个核细胞(PBMCs)膜上的趋化因子受体结合,抑制hM IP-1α对PBMC的趋化能力,EC50为3.39 ng/m l。其本身只有较弱的趋化能力。钙流实验证实vM IP轻度升高胞内钙离子浓度,但可明显抑制hM IP-1α所引起的胞内钙离子高峰。结论:重组vM IP与hM IP-1α受体(CCR5)结合后,可有效的阻断人源性趋化因子的结合与信号传导,但其本身对细胞未有明显的激活作用,因此可作为趋化因子受体的天然阻断剂,可用于免疫移植中的排斥反应或H IV-1病毒感染等。

病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ-N端肽联合三氧化二砷对乳腺癌生长和转移的抑制作用

目的利用荷乳腺癌动物模型观察病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ-N端肽(NT21MP)联合三氧化二砷(As2O3)对乳腺癌生长和肺转移的抑制效应,为选择最佳的乳腺癌治疗方案提供依据。方法建立荷乳腺癌BALB/c小鼠模型,测量荷瘤小鼠的肿瘤大小,计算抑瘤率;苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤病理组织学变化和肺转移情况;苦味酸浸泡法计数肺结节;利用TUNEL法及免疫组化SP法检测各组原发肿瘤组织中细胞凋亡指数(AI)以及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 NT21MP和As2O3均可抑制原发瘤的生长,抑制率分别为30.4%和40.0%,联合用药效果更显著(54.4%)。NT21MP和As2O3均可抑制肺转移,以两者联合用药作用更明显。与生理盐水对照组相比,NT21MP组、As2O3组及NT21MP+As2O3组增殖细胞核抗原指数明显降低(均P<0.05),凋亡指数明显升高(均P<0.05),以联合用药作用更明显(P<0.05)。结论 NT21MP和As2O3可通过抑制增殖、促进凋亡而抑制肿瘤的生长和转移,并具有协同效应。

巨噬细胞炎性蛋白-1α与病毒性心肌炎

巨噬细胞炎性蛋白-1α（macrophage inflammatory protein1α，MIP-1α）是-种趋化因子，与受体结合后，可以发挥趋化、吞噬以及调节炎症因子合成和分泌的生物学功能，与多种疾病息息相关。以下就MIP-1α与病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）的关系作-综述。

巨噬细胞炎性蛋白-1α在病毒性心肌炎患者血清中的变化及其与心肌损害的关系

目的 探讨巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）在病毒性心肌炎（VMC）患者血清中的变化及其临床意义.方法 收集26例急性期、20例恢复期VMC患者及25名健康人（对照组）血清,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定MIP-1α、心肌肌钙蛋白I（cTnI）水平,通过日立7180型全自动生化分析仪检测磷酸肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平.结果 VMC急性期组血清MIP-1α、cTnI、CK-MB水平显著高于VMC恢复期组及对照组（P.＜0.01）;但VMC恢复期组与对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.VMC急性期患者MIP-1α与cTnI、CK-MB呈正相关（r=0.78,0.75;P＜0.05）;而VMC恢复期MIP-1α与cTnI、CK-MB无相关性（r=0.32,0.39;P＞0.05）.结论 MIP-1α可能在VMC的发生发展中起重要作用,可作为评价VMC患者心肌损害的血清学指标.

病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN-端肽对乳腺癌miRNAs表达谱的影响

目的:阐明病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ(virus macrophage inflammatory protein-Ⅱ,v MIP-Ⅱ) N末端21个氨基酸的多肽(NT21MP)对乳腺癌MCF-7细胞miRNAs表达谱的调控作用。方法:收集各组细胞抽提RNA,RNA质量评估后逆转录成c DNA。采用染料法(SYBR GreenⅠ)进行相对定量分析,实验按照2-△△Ct解析法进行设计。结果:总共检测了168个miRNAs,以上调> 2倍或下调<0. 5倍筛选。相对于S组,N组升高的有9个:miR-223、miR-451a、miR-128、miR-489、miR-141、miR-320a、miR-155-3p、miR-335、miR-320e,降低的有2个:miR-15a、miR-339。结论:筛选得到NT21MP调控miRNAs差异表达谱,其为研究miRNAs在NT21MP调控中的作用机制提供依据。

爱罗咳喘宁对慢性阻塞性肺疾病大鼠肿瘤坏死因子-α、巨噬细胞炎性蛋白-2、髓过氧化物酶、炎细胞及肺组织病理变化的影响

目的观察爱罗咳喘宁口服液对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺匀浆中肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2、和髓过氧化物酶(MPO)变化及肺组织结构的影响,探讨爱罗咳喘宁方对COPD作用的可能机制。方法采用脂多糖(LPS)加烟雾诱导COPD大鼠模型,大鼠被随机被分为正常组、模型组、爱罗咳喘宁口服液低、中、高剂量组。正常组、模型组灌胃蒸馏水(10 g·kg-1·d-1),爱罗咳喘宁口服液低、中、高剂量组分别灌胃混悬液5,10,20 g·kg-1·d-1,连续7 d。酶联免疫法(ELISA)测定各组大鼠BALF和肺组织匀浆中TNF-α和MIP-2的含量,比色法测定MPO活性。结果与正常组比较,模型组BALF和肺组织匀浆TNF-α、MIP-2和MPO均显著升高(P均<0.05);与模型组相比,爱罗咳喘宁口服液中剂量组TNF-α、MIP-2和MPO均显著降低(P均<0.05)。结论爱罗咳喘宁口服液治疗COPD的作用机制可能与抑制TNF-α、MIP-2和MPO的释放有关。

巨噬细胞炎性蛋白1α mRNA在人炎症牙髓组织中的表达及意义

目的:探讨炎症牙髓中巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)的表达,揭示MIP-1α在牙髓炎发生及发展中的可能作用。方法:选择正常牙髓组织及炎症牙髓组织各4例,采用HE染色观察正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织形态学改变,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测正常牙髓组织及牙髓炎牙髓组织中MIP-1α的表达。结果:正常牙髓组织镜下可见成纤维细胞、胶原纤维、毛细血管及组织细胞;炎症牙髓组织可见血管扩张充血,淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞和中性粒细胞浸润,受损区可见毛细血管增生和胶原纤维的形成。正常牙髓组织中MIP-1αmRNA表达率为0;而炎症牙髓组织中MIP-1αmRNA表达率为100%,各例相对表达量分别为1.07、1.11、1.21和0.96。经确切概率法分析,炎症牙髓与正常牙髓组织中MIP-1αmRNA水平比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:MIP-1α在正常牙髓组织中无表达,而在炎症牙髓组织中有表达,MIP-1α参与了牙髓的炎症反应。

咳嗽变异性哮喘患儿血清巨噬细胞炎性蛋白-1α水平的变化及其意义

目的探讨咳嗽变异性哮喘患儿血清巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)水平的变化及其在鉴别诊断中的临床价值。方法选择我院收治的感染性咳嗽患儿(感染性咳嗽组)49例,咳嗽变异性哮喘患儿(咳嗽变异性哮喘组)37例及体检无异常儿童30例(正常组),检测并比较3组儿童的血清MIP-1α水平。结果3组儿童的血清MIP-1α水平间差异有统计学意义(P<0.01)。其中感染性咳嗽组、正常组与咳嗽变异性哮喘组比较血清MIP-1α水平间差异均有统计学意义(P<0.05);而感染性咳嗽组与正常组儿童血清MIP-1α水平间差异无统计学意义(P>0.05)。咳嗽变异性哮喘患儿血清MIP-1α水平与咳嗽的持续时间呈正相关(P<0.05)。结论血清MIP-1α水平可反映气道炎症类型,是鉴别感染性咳嗽与咳嗽变异性哮喘的一项参考指标。

1,25(OH)_2D_3干预IL-17及巨噬细胞炎性蛋白3α表达抑制大鼠肝纤维化形成的作用机制

目的探讨在肝纤维化形成过程中肝组织及外周血中IL-17和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)3α的表达变化,以及1,25(OH)2D3经干预IL-17通路抑制肝纤维化形成的作用机制。方法 48只SD大鼠随机分为4组:正常组(橄榄油)、模型组(CCl4橄榄油溶液)、药物对照组(CCl4橄榄油溶液+橄榄油灌胃)、治疗组(CCl4橄榄油溶液+1,25(OH)2D3橄榄油溶液灌胃)。8周后取肝组织行HE染色和Masson染色,并对其纤维化程度进行病理分期;采用ELISA法检测干预后不同时间点(4、6、8周)血清中IL-17水平;免疫组化法分析不同时间点(4、6、8周)各组大鼠肝组织IL-17和MIP3α的蛋白表达;real time-PCR法检测第8周各肝组织IL-17和MIP3α的mRNA表达。计量资料的组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验,相关性检验采用直线相关分析。结果 8周时模型组及药物对照组肝纤维化显著,治疗组肝纤维化程度明显减轻。4组间各个时间点(4、6、8周)血清IL-17水平比较差异均有统计学意义(F值分别为6.13、5.79、7.18,P值均<0.05);正常组血清IL-17水平很低,各个时间点(4、6、8周)模型组及药物对照组血清IL-17水平与正常组比较显著升高(P值均<0.01);治疗组各时间点血清中IL-17表达水平较模型组和药物对照组均显著降低(P值均<0.05),但均以第4周表达水平最高。免疫组化和real time-PCR法检测显示,对照组肝组织中几乎不表达IL-17,且MIP3α表达甚微;随着肝纤维化的进展,血清中IL-17水平逐渐降低,肝组织中IL-17水平逐渐升高(r=-0.793,P<0.01);4组间各时间点(4、6、8周)肝组织表达IL-17、MIP3α水平差异有统计学意义(IL-17:F值分别为11.02、9.61、7.45,P值均<0.05;MIP3α:F值分别为9.47、8.93、6.15,P值均<9.05);模型组及药物对照组各时间点(4、6、8周)肝组织表达IL-17、MIP3α蛋白较正常组均显著升高(P值均<0.01),治疗组肝组织各时间点表达量较模型组和药物对照组均明显降低且差异均有统计学意义(P值均<0.05),均于第8周时表达量最高。模型组及药物对照组第8周IL-17、MIP3αmRNA表达水平较正常组明显增多,治疗组较药物对照组和模型组显著减少,组间比较差异有统计学意义(F值分别为7.36、10.15,P值均<0.05)。结论 (1)在肝纤维化发生发展过程中,血清IL-17水平先升高后降低,而肝组织中IL-17表达水平呈逐渐升高趋势,提示肝纤维化后期血清中Th17渐被趋于肝脏;(2)1,25(OH)2D3治疗组肝脏中IL-17和MIP3α蛋白及mRNA水平较模型组及药物对照组均明显降低,提示IL-17通路可能为1,25(OH)2D3抑制肝纤维化发生发展的作用机制之一。

高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉平滑肌细胞中巨噬细胞炎性蛋白1α和C-C型趋化因子受体1的表达

目的通过检测高同型半胱氨酸血症大鼠胸主动脉平滑肌细胞中巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)和C-C型趋化因子受体1(CCR1)蛋白的表达,探讨高同型半胱氨酸血症引起动脉粥样硬化(AS)的机制。方法8周龄SD雄性大鼠16只随机分为对照组和高蛋氨酸组,每组8只。对照组给予普通饲料喂养,高蛋氨酸组在普通饲料喂养的基础上加质量分数2%的蛋氨酸。喂养8周后处死大鼠,心脏采血,取胸主动脉。肉眼及光镜下观察血管形态学改变,采用高效液相色谱法测定血浆同型半胱氨酸(Hcy)浓度,S-P免疫组织化学染色法检测MIP-1α和CCR1的表达。结果(1)血浆Hcy浓度:高蛋氨酸组大鼠血浆Hcy浓度(45.74±9.65)mmol.L-1显著高于对照组(7.38±2.28)mmol.L-1(P<0.01)。(2)形态学改变:肉眼观可见对照组大鼠胸主动脉内膜光滑,高蛋氨酸组胸主动脉内膜粗糙、隆起;光镜下可见对照组大鼠主动脉内膜内皮细胞排列整齐,高蛋氨酸组内膜细胞排列紊乱,脂质沉积。(3)免疫组织化学染色结果:MIP-1α和CCR1蛋白的阳性表达表现为细胞质呈棕褐色。MIP-1α和CCR1蛋白在高蛋氨酸组的阳性表达强于对照组,二者在高蛋氨酸组的阳性表达平均灰度值明显低于对照组(P<0.01)。结论高同型半胱氨酸血症可诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞MIP-1α及其受体CCR1的表达,引起血管壁的炎症,导致AS形成。