对重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)在家禽免疫效果方面的调研

2006-2007年，通过检测免疫注射H5N1重组禽流感病毒灭活疫苗（Re-1株）后3～4周的444个鸡场、66个鸭场和28个鹅场共计16140份血清中H5亚型禽流感血凝抑制抗体水平，比较A、B、c、D、E5个不同厂家的疫苗对鸡、鸭、鹅免疫效果。结果显示：重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型，Re-1株）对鸡的免疫效果明显好于鸭和鹅；不同厂家疫苗质量和免疫效果有差异，其中A厂疫苗质量和免疫效果最好。

重组鸡痘病毒vFV282疫苗株在鸽体内的分布及毒性试验

采用翅内侧皮肤无血管处刺种途径给30日龄幼鸽接种重组鸡痘病毒vFV282疫苗株,利用PCR的方法检测其在鸽体内的分布及其动态并对其毒性进行了研究。结果显示,接种后6 h即在脾脏检测到病毒DNA;接种后1 d,脾、肺PCR检测阳性;3 d,在心、肝、脾、肺、肾、皮肤均检测到病毒DNA;7 d,心、肝、脾、肺、肾、脑PCR检测均呈阳性;10 d,除脑外所有内脏器官中均未检测到病毒DNA,15 d后所有内脏器官PCR检测结果均为阴性。而对照组在整个试验期间PCR检测结果均为阴性。毒性试验表明,重组鸡痘病毒vFV282疫苗株使用安全。

犬腺病毒 1型疫苗株 E3缺失表达载体的构建

探索以犬腺病毒 1型疫苗株 (Cannaught Laboratory Limited, CLL)作为病毒重组疫苗和基因转移载体的可行性。方法构建带增强型绿色荧光蛋白（ enhanced green fluorescent protein, EGFP）报告基因的 E3缺失重组病毒 CLLEGFP。将 CLLEGFP感染各种人源细胞，并以灌胃、腹腔注射、尾静脉注射和肌肉注射等不同途径接种昆明小鼠。多时间点取小鼠组织标本，冷冻干燥切片，观察 EGFP的表达。 4周后采集小鼠血清，以 Western blot分析抗 EGFP抗体的产生。结果 CLLEGFP能够感染各种人源细胞并表达 EGFP。在腹腔接种 CLLEGFP 3 d的小鼠肝组织细胞中可见转导的 EGFP。 Western blot分析显示，以各种途径免疫接种重组病毒 4周后的小鼠血清中均存在抗 EGFP特异抗体。结论 CLL具有开发成为病毒重组疫苗和基因转移载体的潜力。

免疫鸡血清新城疫病毒抗体水平与攻毒保护效果的相关性研究

为了明确不同血清新城疫病毒(NDV)抗体水平对鸡的保护效果,本研究采用重组NDV灭活疫苗(A-Ⅶ株)对鸡进行免疫,通过交叉血凝抑制(HI)试验比较A-Ⅶ株与La Sota株间的血清学差异,并采用NDV标准强毒株F_(48)E_(8)和基因Ⅶ型强毒株JSC0804对不同抗体水平免疫鸡进行了攻毒保护试验。结果显示:抗A-Ⅶ株血清用A-Ⅶ株抗原测得的平均HI抗体效价显著高于La Sota株抗原(P<0.01),约高1.5log2,而抗La Sota株血清用La Sota株抗原测得的平均HI抗体效价稍高于A-Ⅶ株抗原,但无显著差异(P>0.05),表明2种疫苗株存在一定的血清学差异。在试验条件下,所有免疫鸡经点眼滴鼻攻毒后均未表现明显临床症状,但存在不同程度的排毒现象,排毒率总体上随抗体效价升高呈逐渐下降趋势。A-Ⅶ株疫苗免疫鸡血清HI抗体效价分别达≥13log_(2)和≥14log_(2)时可完全阻止F_(48)E_8株和JSC0804株排毒。免疫鸡排毒一般仅限于攻毒后5 d内。本研究阐明了免疫鸡的抗体水平和免疫保护效果的相关性,为新城疫免疫控制提供了依据。

福建省脊髓灰质炎Ⅱ型疫苗重组株病毒特性与分析

对福建省脊髓灰质炎 (脊灰 )Ⅱ型病毒基因的VP1区和 3D区进行PCR -RFLP分析 ,结果有 5株为脊灰Ⅱ型疫苗重组株病毒 ,均表现为VP1区为Ⅱ型疫苗株 ,3D区为Ⅲ型疫苗株 ,有 4株在VP1区出现不同于标准脊灰Ⅱ型疫苗株病毒的变异。流行病学资料揭示 ,分离出脊灰Ⅱ型重组株病毒的急性弛缓性麻痹 (AFP)病例大多具有脊灰的症状 ,且发病表现出明显的季节性 ;而从“零”剂次免疫儿童或近 6个月从未服过脊灰疫苗儿童的粪便标本中 ,只分离到此病毒。这表明福建省自然环境中存在脊灰Ⅱ型疫苗重组株病毒循环 ,此病毒可能是这类AFP病例的致病因子。在我国保持无脊灰状态下如何控制脊灰Ⅱ型重组株病毒的致病 ,适时采取相应对策对今后的工作提出了新的挑战。

1株H9N2亚型重组禽流感病毒的生物学特性

为研制高效特异的H9N2亚型AI疫苗,试验对利用反向基因操作技术构建的1株表面基因由A/chicken/Shanghai/10/01(H9N2)(简称SH10)提供、内部基因由12质粒系统提供的重组病毒SH/PR8的生物学特性进行了研究。结果表明,与亲本毒相比重组病毒的毒力有所下降,重组病毒在鸡胚上生长的适应性能更好,更适于作为新型疫苗株使用。

H5N1DNA疫苗与重组痘苗病毒疫苗在小鼠中不同联合免疫方案对免疫原性的影响

目的：本研究旨在优化人高致病性禽流感病毒H5N1重组DNA疫苗与重组痘苗病毒疫苗联合应用的免疫方案。方法我们将前期制备的含H5N1（安徽株）结构基因的两种重组DNA疫苗（分别基于pVRC与pIRES载体骨架）及一种重组痘苗病毒（天坛株）疫苗，采用不同初免方式联合免疫BALB/c小鼠，比较分析抗原特异的体液[血凝素（hemagglutinin，HA）抑制抗体（HAI）、神经氨酸酶（neuraminidase，NA）特异性抗体、中和抗体]与细胞免疫应答（IFN-γELISPOT）特点。结果H5N1重组DNA疫苗初免、H5N1重组痘苗病毒疫苗加强的联合免疫可激发较强的体液与细胞免疫应答；其中H5N1重组DNA疫苗皮内电转初免组比肌肉电转初免组诱导的中和抗体更高。此外，基于pVRC载体的H5N1重组DNA疫苗初免诱导的HAI抗体及NA特异的细胞免疫均高于基于pIRES载体的DNA疫苗初免组；基于pVRC载体的H5N1重组DNA疫苗肌肉注射电转初免组诱导的HA特异的细胞免疫亦高于基于pIRES载体的H5N1重组DNA疫苗。结论各组H5N1重组DNA疫苗与重组痘苗病毒疫苗联合应用可诱导多个抗原特异的体液与细胞免疫应答，不同联合免疫方案对免疫原性的影响显著。该研究为新型H5N1疫苗的研发及免疫方案的优化应用奠定了基础。

含H5N1多个结构抗原的DNA疫苗与重组痘苗病毒疫苗联合免疫小鼠可明显增强免疫原性

本研究旨在研发经济、高效的人高致病性禽流感病毒H5N1实验疫苗并优化免疫方案。利用本实验室前期构建的含有H5N1(安徽株)结构基因的多个单顺反子(HAop和NAop)和双顺反子(HAop/M2和NAop/M1)DNA疫苗及重组痘苗病毒(天坛株)疫苗,采用不同方案(单独或联合)免疫BALB/c小鼠,初步分析了抗原特异性体液免疫(HA血凝抑制抗体,NA特异性抗体,中和抗体及M1与M2特异性抗体)和细胞免疫应答(IFN-γELIS-pot)的特点。结果表明:DNA疫苗与重组痘苗病毒(天坛株)疫苗联合免疫可以激发较强的多个抗原特异的免疫应答,尤其是体液免疫应答,明显优于DNA疫苗或重组痘苗病毒(天坛株)疫苗单独免疫;联合免疫方案中DNA疫苗初免所激发的HA与NA特异的体液免疫应答强于重组痘苗病毒(天坛株)疫苗初免,然而M1与M2特异的体液免疫应答则反之。本研究为新型H5N1疫苗的研发及免疫方案的优化奠定了基础。

利用反向遗传技术拯救H9N2重组病毒

为研制高效特异的H9N2亚型AI疫苗,选取我国具有代表性的毒株A/chicken/Shanghai/10/01(H9N2)(简称SH10),以12质粒系统为基础,利用反向遗传操作技术构建了1株表面基因由SH10提供、内部基因由12质粒系统提供的重组病毒SH/PR8,为新型疫苗的研制提供了新的毒株。

四川省近4年高危急性弛缓性麻痹病例的发现及处理

目的 探讨早期发现与处理高危急性弛缓性麻痹 (AFP)病例。方法 开展高危AFP病例早期流行病学调查与评估 ,针对性实施脊灰疫苗应急强化免疫。结果 发现高危AFP16例 ,发病年龄 0～ 3岁 ,1岁占 5 6 2 5 % ;2例有聚集性 ;13例检出脊灰疫苗病毒 ,其中 4例为Ⅱ型疫苗重组株 ,密切接触者检出 3株与病例同源脊灰Ⅱ型疫苗重组株病毒 ;13例残留麻痹 ;14例为超生儿童其基础免疫为“0”剂次 ,15县病例当地乡镇脊灰疫苗接种率平均值 72 18% ,低于 85 %者 9个县 ,且流动和超生儿童明显低于常住和计生儿童 ,病例所在县均实施脊灰疫苗应急强化免疫 ,评估接种率均达95 %以上。结论 四川省曾有脊灰Ⅱ型疫苗变异病毒在自然界的局部循环 ,脊灰疫苗应急强化免疫能有效阻断该变异病毒。增强AFP监测敏感性 ,尽早发现和及时调查处理高危AFP病例 ,有利于提高敏锐发现、有力阻断输入性脊灰野病毒传播循环的整体能力。

中国急性弛缓性麻痹病例高发地区脊髓灰质炎病毒分离株性质的研究

中国云南省昭通地区从 1 997年以来每年都是急性弛缓性麻痹 (Acuteflaccidparalysis,AFP)病例的高发地区 ,该地区的镇雄县 1 997～ 2 0 0 1年每年都有≥ 2例由Ⅱ型脊髓灰质炎 (脊灰 )疫苗相关株引起的AFP病例。日本国际协力事业团 (JICA)中国消灭脊灰项目的临床专家曾于 2 0 0 1年赴当地核查这些AFP病例 ,最终临床确认了 4例脊灰 ,认为存在脊灰病例聚集现象。针对此情况 ,对云南省镇雄县 1 997～ 2 0 0 1年从AFP病例中分离到的Ⅱ型脊灰毒株 (共 1 3株 )进行了序列分析 ,发现其VP1和 3D区核苷酸序列变化位点、变化数目及改变各不相同 ,其中有 8株为S2×S3重组株 ,5株为S2×S2疫苗相关株。病毒基因的分析不支持聚集病例间毒株的传播关系 ,不存在单一毒株循环引起的聚集现象。发现其中 1株为脊灰疫苗衍生病毒 (VDPV) ,但未发现其自然循环引发疾病流行。