鼠重组白细胞介素-1对小鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

探讨重组白细胞介素 1(rIL 1)对下丘脑 垂体肾上腺轴的作用。采用rIL 1静脉注入 (C组注入前用抗 CRH血清预处理 ) ,测定注入rIL 1后不同时间CRH、ACTH及CORT血浆含量变化。结果表明 ,rIL 1可使CRH ,ACTH ,CORT血浆含量有不同水平的升高 (B组 ) ,预先注射抗 CRH血清可阻断该效应 (C组 ) ,说明rIL

甲泼尼龙醋酸酯对重组白细胞介素-1β介导的颞下颌关节炎症损伤大鼠软骨细胞MMPs表达的影响

目的探究甲泼尼龙醋酸酯对重组白细胞介素-1β(rh IL-1β)介导的颞下颌关节炎大鼠软骨细胞中基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法以雄性SD大鼠作为研究对象,采用关节腔注射rh IL-1β法制备颞下颌关节炎大鼠模型,HE染色法观察颞下颌关节变化;对照组不进行任何处理。模型制备后将大鼠分为模型组、甲泼尼龙醋酸酯低剂量组(5 mg/kg)、中剂量组(15 mg/kg)、高剂量组(30 mg/kg),每组10只。对照组、模型组经腹腔静脉注射1 ml生理盐水,甲泼尼龙醋酸酯各剂量组分别经腹腔静脉注射甲泼尼龙醋酸酯。HE染色、番红染色观察各组颞下颌关节组织变化,采用Mankin's评分对颞下颌关节炎程度进行评定。RT-PCR法、Western Blot法、免疫组化法检测软骨组织中MMP-1、MMP-3、MMP-9的表达。结果 HE染色显示模型组大鼠颞下颌关节滑膜出现炎症细胞浸润、血管扩张、细胞黏附。与对照组相比,模型组Mankin's评分升高,与模型组相比,给药物组评分降低,且随着药物浓度的升高,评分逐渐下降(P <0. 05)。与对照组相比,模型组MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA、蛋白表达量均升高,与模型组相比,给药组MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA、蛋白表达量均降低,且随着药物浓度的升高,三者表达量均逐渐降低(P <0. 05)。免疫组化结果显示,模型组阳性细胞表达率高于对照组,经药物处理后MMP-1、MMP-3、MMP-9阳性细胞表达率随药物剂量的增加呈剂量性降低(P <0. 05)。结论甲泼尼龙醋酸酯能够缓解rh IL-1β介导的颞下颌关节炎,其作用机制可能与下调软骨细胞中MMP-1、MMP-3、MMP-9的表达有关。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂质量控制研究

目的建立重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1ra)的质控方法和标准。方法采用黑色素瘤A375.S2细胞杀伤中和试验测定rhIL-1ra的生物学活性,还原型SDS-PAGE测定相对分子质量,SDS-PAGE和反相高效液相色谱测定纯度,用胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按《中国药典》三部(2005版)规定进行。结果用建立的质控方法对rhIL-1ra原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2005版)的要求。结论建立的质控方法和标准可保证产品安全有效,可用于rhIL-1ra的检定。

双向电泳分析重组人白细胞介素-1β对人牙髓细胞的影响

目的:观察rhIL-1β对培养的HDPCs产生蛋白质的影响,揭示rhIL-1β与牙髓炎的关系。方法:在HD-PCs的培养液中加入rhIL-1β,用2-DE分离HDPCs全蛋白,获得对照组和诱导组HDPCs蛋白质图谱,ImageMaster2DElit 5.0软件分析确认差异表达蛋白。结果:比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达。结论:HDPCs对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。

重组人白细胞介素-1β诱导人牙髓细胞蛋白质组的差异分析

目的分析重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)诱导前后牙髓细胞蛋白质的差异,鉴定2组间差异表达的蛋白质。方法采用双向凝胶电泳技术分离牙髓细胞全蛋白,获得对照组和诱导组牙髓细胞蛋白质图谱,Image Master 2D Elit5.0软件分析确认差异表达蛋白。通过基质辅助的激光解吸飞行时间质谱对差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定,得到肽质量指纹图谱。结果比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达;质谱鉴定后,10个蛋白得到确认。结论牙髓细胞对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。鉴定了牙髓细胞中与rhIL-1β作用密切相关的2个差异蛋白,为探索早期牙髓炎的应答机制提供了新的线索和思路。

重组人白细胞介素-1α在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性检测

在毕赤酵母中分泌表达重组人白细胞介素-1α(rh IL-1α),优化rh IL-1α的发酵工艺及纯化方法,以获得高表达、高纯度具有生物学活性的rh IL-1α。通过PCR扩增获得h IL-1α基因,构建其真核表达载体p PICZαA/h IL-1α,电转化至毕赤酵母X-33,用PCR和SDS-PAGE方法筛选高效表达rh IL-1α的工程菌株并进行Western blot鉴定,DEAE弱阴离子离子交换层析一步纯化表达产物,并用MTT法初步检测其对人肝癌细胞7402的生物学作用。rh IL-1α在摇瓶规模下,经甲醇诱导4 d后表达量约为30 mg/L。Western blot检测rh IL-1α的特异性结合,获得纯度约95%,收率40%左右的rh IL-1α,并证明rh IL-1α能够抑制人肝癌细胞7402的增殖。构建了重组h IL-1α的基因工程菌,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为进一步研究其生物学活性和功能奠定了基础。

重组人白细胞介素对人外周血淋巴细胞功能的影响及芍药苷的作用

目的观察重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)对人外周血淋巴细胞(PBLC)增殖及产生白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-10(IL-10)的影响及芍药苷(Pae,抗炎免疫中药)对PBLC的作用。方法用密度梯度离心法,分离人PBLC;用MTT法检测PBLC的增殖反应;用放射免疫法检测PBLC培养的上清液中IL-2水平;用酶联免疫吸附法检测PBLC培养的上清液中IL-10水平。结果体外给予rhIL-1β(1×10-2、0.1、1.0、10.0、100.0μg.L-1)可不同程度促进人PBLC增殖和IL-2产生;但可抑制IL-10产生。体外给予1μg.L-1rhIL-1β(3、6、12、24、48 h),可使人PBLC产生IL-2水平升高和IL-10水平降低;不同浓度(1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol.L-1)Pae体外可不同程度抑制1μg.L-1rhIL-1β对人PBLC促增殖反应和IL-2产生;但可促进IL-10产生。结论rhIL-1β体外,可促进人PBLC的增殖,升高IL-2水平;而降低IL-10水平。Pae体外可逆转rhIL-1β对其增殖及产生IL-2和IL-10的影响。

重组人白介素-1α生物学活性测定方法的建立

目的建立并优化采用D10.G4.1细胞测定重组人白介素-1α(rh IL-1α)生物学活性的方法,并用于rh IL-1α样品的检测。方法 MTT法测定rh IL-1α促进D10.G4.1细胞增殖能力,从而反映rh IL-1α的生物学活性。结果建立了D10.G4.1细胞增殖法测定rh IL-1α生物学活性的方法。优化后实验条件如下,样品稀释培养基:RPMI1640+10%FBS+0.5%T-STIM with Con A+0.05m M 2-巯基乙醇;样品上板浓度:10ng·m L-1;细胞密度:4×105个/m L;培养时间:72h;样品梯度稀释倍数4倍。利用优化后的实验条件对rh IL-1α样品活性进行3次测定,评价方法的可重复性。结果 3次实验的变异系数为5.7%,符合方法的要求,表明方法重复性好。结论建立了D10.G4.1细胞测定rh IL-1α生物学活性的方法,该方法操作简便,重复性好,可应用于rh IL-1α的生物学活性检测。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂治疗骨关节炎的药效学分析

目的观察重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)对碘乙酸钠(sodium iodoacetate,MIA)诱导的骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠的治疗作用。方法将雌性Wistar大鼠根据热痛阈值均衡分为正常对照组(11只)和造模组(55只),造模3 d后,依据左后肢膝关节肿胀率将造模组随机分为溶剂对照模型组(安慰剂)及原料药低(9 mg/kg rhIL-1Ra)、高(18 mg/kg rhIL-1Ra)剂量组,每组12只,均经颈部皮下注射给药,1 mL/kg,1次/d,连续14 d。分别于造模前后3 d及首次给药后2、4、7、14 d,测量左后肢膝关节同一处的直径,计算肿胀度、肿胀率及肿胀抑制率;取左后肢膝关节标本固定,经石蜡包埋、切片后,番红O染色,显微镜下进行病理损伤评分。结果造模3 d后,除正常对照组外,其他各组大鼠膝关节肿胀率均约达30%;与溶剂对照模型组比较,原料药低剂量组肿胀度和肿胀率在给药后2、4 d(1.52±0.38、1.26±0.43)时均降低(t分别为1.924、1.945,P均<0.05),而原料药高剂量组在给药后2、4、7 d(1.51±0.37、1.15±0.24、1.14±0.39)时均显著降低(t分别为2.976、2.874、2.902,P均<0.01)。与溶剂对照模型组比较,原料药低、高剂量组(8.33±1.86、8.17±2.79)大鼠关节软骨病变程度相似,病理评分统计结果显示有轻微降低(t=1.814,P均>0.05),造模成功。结论给药14 d,高剂量rhIL-1Ra能显著减轻MIA诱导的大鼠骨关节炎急性期关节肿胀,但对MIA诱导的慢性骨关节炎的痛觉感受无明显影响,且未见其显著逆转MIA诱导的膝关节软骨损伤。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂制剂和沉淀中相关蛋白化学修饰类型的鉴定

目的 鉴定重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)制剂和室温加速获得的制剂沉淀中相关蛋白的化学修饰类型。方法 利用反相高效液相色谱(reverse phase-high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)对rhIL-1Ra制剂和室温加速获得的制剂沉淀进行相关蛋白检测,并按面积归一化法确定相关蛋白的百分比;再用液质联用质谱法对rhIL-1Ra制剂和室温加速获得的制剂沉淀进行相关蛋白的鉴定。结果 RP-HPLC结果显示,rhIL-1Ra制剂中有6个相关蛋白色谱峰,所占百分比依次为0.414%、0.870%、0.871%、0.304%、0.104%、1.182%,rhIL-1Ra室温加速获得的沉淀中有5个相关蛋白色谱峰,所占百分比依次为0.350%、3.603%、1.118%、0.629%、0.866%。液质联用结果显示,rhIL-1Ra制剂6个相关蛋白色谱峰化学修饰类型分别为甲硫氨酸氧化、天冬氨酸脱水环化+甲硫氨酸氧化、甲硫氨酸氧化、甲硫氨酸氧化、天冬氨酸脱水环化、天冬氨酸脱水环化;rhIL-1Ra室温加速获得的沉淀中5个相关蛋白色谱峰化学修饰类型分别为甲硫氨酸氧化、天冬氨酸脱水环化+甲硫氨酸氧化、以甲硫氨酸氧化为主、以天冬氨酸脱水环化+甲硫氨酸氧化为主、以天冬氨酸脱水环化为主。结论 rhIL-1Ra制剂和室温加速获得的制剂沉淀的相关蛋白修饰类型相同,主要存在3种:甲硫氨酸氧化修饰、天冬氨酸脱水环化、天冬氨酸脱水环化+甲硫氨酸氧化,本研究为提高rhIL-1Ra制剂的质量提供了参考。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂卡那霉素抗性菌种的构建、表达、纯化及质量鉴定

目的构建卡那霉素抗性的重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)菌种,并进行rhIL-1Ra蛋白的表达、纯化及质量鉴定,以降低β-内酰胺抗生素带来的风险。方法分别以氨苄抗性的质粒rhIL-1Ra(A-rhIL-1Ra)、pET-28a为模板,进行PCR扩增,获得线性化载体和卡那霉素基因片段,经同源重组构建卡那霉素抗性的质粒rhIL-1Ra(K-rhIL-1Ra),测序正确后转化E.coli BL21(DE3),构建重组工程菌,经IPTG诱导表达后,进行CM Bestarose Fast Flow、DEAE Bestarose Fast Flow两步柱层析纯化。收集纯化产物,15%SDSPAGE、分子排阻高效液相色谱法(size-exclusion high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、反相高效液相色谱法(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测纯度,串联质谱法检测质谱相对分子质量,Western blot法鉴定特异性,报告基因法检测生物学活性,液相色谱-质谱(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)法分析比对产品相关杂质。结果经菌落PCR及测序鉴定证明质粒K-rhIL-1Ra构建正确。表达的K-rhIL-1Ra蛋白相对分子质量约17000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%以上;两步纯化的K-rhIL-1Ra蛋白纯度分别为97%和99%,单体含量分别为99.33%和100%,色谱纯度分别为91.86%和96.96%,质谱相对分子质量与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致,可与小鼠抗人IL-1Ra单抗发生特异性反应;纯化的K-rhIL-1Ra蛋白生物学活性为1.29×10^(5)U/mg,相关蛋白化学修饰类型与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致。结论成功构建了K-rhIL-1Ra菌种,表达并纯化后的蛋白符合rhIL-1Ra的特征和质量标准,为rhIL-1Ra菌种变更及可比性研究奠定了基础。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂免疫大鼠ELISA抗体阳性血清中和抗体活性检测方法的建立及验证

目的 建立用于检测重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)免疫大鼠ELISA抗体阳性血清中和抗体活性的方法,并进行验证。方法 分别用3、20、100 mg/kg的rhIL-1Ra注射液经皮下免疫SD大鼠,10只/组,雌雄各半,每天给药2次,间隔至少4 h,连续给药13周,于给药期及恢复期经大鼠颈静脉采血,分离血清,ELISA法检测血清抗体效价,Protein A层析柱纯化经ELISA筛选为rhIL-1Ra抗体阳性的血清样本。以D10G4·1细胞生物学活性试验为基础建立中和抗体活性检测方法,并验证方法的专属性、灵敏度及精密性。采用建立的方法检测ELISA筛选为rhIL-1Ra抗体阳性血清的中和抗体活性。结果 随着给药次数的增加,各剂量组大鼠血清抗体滴度逐渐增强,至恢复期时仍有抗体存在,且滴度仍较高。兔抗rhIL-1Ra单抗对rIL-1Ra有明显的中和作用,兔抗rIFN-2b单抗与rIL-1Ra无剂量效应关系;该方法的灵敏度为171.93μg/mL;精密性验证CV均≤20%。ELISA筛选为阳性抗体血清对rhIL-1Ra注射液均可产生中和效应,与ELISA法检测结果相符。结论 本研究建立了用于检测rhIL-1Ra免疫大鼠血清中和抗体活性的方法,具有良好的特异性、专属性及较高的灵敏度,可用于rhIL-1Ra重复给药动物血清中和抗体活性的检测。

IL-1β对大鼠胆碱能神经元的影响

目的 探讨 IL- 1β对大鼠胆碱能神经元的损伤作用及机制。方法 将 IL- 1β缓慢释放颗粒 (IL- 1βpellet)植入大鼠右侧 Meynert核 (nb M,基底核 ) ,复制胆碱能系统受损的动物模型 ;将不同剂量的人重组白细胞介素 - 1β(rh IL- 1β)加入培养大鼠前脑基底神经元中 ,复制 rh IL- 1β诱导神经元损伤模型 ,检测 (乙酰胆碱酯酶 ) Ach E活性和脂质过氧化物 (L PO)含量的变化。结果 IL- 1β损伤侧皮质 Ach E活性较未损伤侧、正常组及假手术组均显著降低 (P <0 .0 1)。 5 0 - 5 0 0 U/ ml rh IL- 1β可引起培养的神经元 Ach E活性明显下降 (P <0 .0 5 ) ;10 0 - 5 0 0 U/ ml rh IL-1β可引起神经元 L PO含量明显升高 (P <0 .0 1)。结论 IL- 1β慢性作用可以造成大鼠中枢胆碱能系统的损害 。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎病情、影像学影响的临床评价

目的评价重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)治疗活动性类风湿关节炎(RA)的24周疗效及对RA影像学的影响。方法采用多中心、随机、双盲、平行对照的临床试验研究,南方医院试验中心确诊的活动期RA受试者40例,依照方案以3:1比例,随机分为rhIL-1Ra组(治疗组)和MTX组(对照组),治疗组30例予rhIL-1Ra联合MTX治疗,对照组10例予MTX治疗,并进行随访观察,疗程均为24周。主要评价指标为12周和24周时较基线期达到RA疗效评价标准20(ACR20)的患者比例;次要评价指标包括随访12周及24周时较基线期达到RA疗效评价标准50、70(ACR50、ACR70)的患者比例、晨僵持续时间、关节肿胀和关节触痛计数、VAS评分、健康评估问卷(HAQ)、急性期反应物水平(ESR、CRP),并对患者治疗前后的双腕关节进行影像学Sharp评分。结果第12周时治疗组ACR20为73%、ACR50为37%、ACR70为13%,对照组ACR20为10%、ACR50为10%、ACR70为0%(P=0.000);第24周时治疗组ACR20为87%、ACR50为50%、ACR70为37%,对照组ACR20为50%、ACR50为10%、ACR70为0%(P=0.000);其他各项疗效指标也反映出相似的改善程度及趋势(P=0.000)。双腕关节Sharp评分:治疗组0周关节侵蚀评分平均值为2.33,治疗24周为2.23(P=0.795),0周关节狭窄评分的平均值为1.70,治疗24周为1.43(P=0.343);对照组0周关节侵蚀评分平均值为2.60,治疗24周为3.60(P=0.024),0周关节狭窄评分的平均值为1.70,治疗24周为2.50(P=0.019)。结论rhIL-1Ra联合MTX治疗RA24周的疗效明显优于单用MTX,能明显控制RA病程并提示rhIL-1Ra有可能阻止RA患者影像学的进展。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂对急性肝衰竭小鼠肝脏保护作用的评价

采用(+)-D-氨基半乳糖盐酸盐(D-Ga1N)结合脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肝衰竭(AHF)来评价重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)对肝脏的保护作用。本研究用SPF级雄性C57BL/6小鼠建立AHF模型。造模前1 h,小鼠腹腔注射3、9 mg/kg的rhIL-1Ra或等体积的生理盐水(NS),注射造模药物后4 h采集小鼠血液和肝组织样本。分析各组小鼠循环中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平和肝组织切片,并用荧光定量PCR方法分析肝组织中一氧化氮合成酶2(NOS2)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平变化。本研究还进一步通过死亡率试验考察rhIL-1Ra对AHF模型小鼠的保护作用。结果表明,9mg/kg剂量的rhIL-1Ra可以显著抑制AHF模型小鼠循环中的ALT和AST活性以及TBIL水平,减轻肝组织坏死和肝细胞变性程度,降低肝组织中NOS2和IL-6的表达。2个剂量(3和9mg/kg)的rhIL-1Ra都可以显著地改善AHF模型小鼠的生存率。结果表明,rhIL-1Ra在AHF药物开发和临床应用中具有潜在价值。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂生物学活性检测方法的建立及验证

目的建立重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)生物学活性检测方法,并对方法进行验证。方法根据IL-1Ra阻断IL-1β杀伤人黑色素瘤细胞A375.S2的能力评价IL-1Ra的生物学活性,结果用标准品进行校正。对方法的样品起始浓度(8、10、12、14μg/mL)和IL-1β终浓度(2、4、6 ng/mL)进行优化,并验证方法的专属性、准确度、线性范围、中间精密度、耐用性。用建立的方法检测本公司在研产品3批原液和3批成品的生物学活性。结果确定该方法的样品起始浓度为8μg/mL,IL-1β终浓度为4 ng/mL。IL-1Ra原液缓冲液成分及成品中辅料成分对检测结果无影响;线性范围为6~13μg/mL,相关系数R2为0.9921;准确度验证线性回归方程的斜率为0.9758;不同试验人员于不同时间对1批原液、1批成品检测结果的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)分别为13.895%和8.670%,均<20%;不同细胞代次、不同细胞密度下相对效价测定值的GCV为5.595%,<20%。用建立的方法检测3批原液和3批成品的结果较稳定。结论成功建立了重组人IL-1Ra生物学活性检测方法,该方法准确度高,精密度好,耐用性强,检测结果稳定可靠,可用于产品的生物学活性评价和质量控制。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂对兔实验性骨关节炎软骨中Caspase-3、Bcl-2表达影响的研究

目的:探讨重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(Recombinant human interleukin1 receptor antagonist,RhIL-1ra)对骨关节炎软骨细胞凋亡的影响,并研究其对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨中Caspase-3和Bcl-2表达的影响。方法:首先采用改良Hulth法建立实验性OA模型,术后4周经关节腔注射给予RhIL-1ra治疗,治疗结束后,首先对膝关节进行解剖观察以及HE染色进行评分,采用Tunel染色法检测两组兔软骨细胞凋亡情况,采用Western-blot以及RT-PCR检测凋亡因子Caspases-3和凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白和基因的表达。结果:大体形态学和HE染色结果表明,正常组大体形态学评分较低,模型组较高,RhIL-1ra治疗组较模型组相比降低(P<0.01);RhIL-1ra可降低软骨细胞的凋亡率,与模型组相比差异具有统计学意义(P<0.01);Western-blot以及RT-PCR结果表明,RhIL-1ra可通过下调caspase-3以及上调bcl-2蛋白和基因的表达抑制细胞凋亡。结论:RhIL-1ra对Hulth诱导的实验性OA具有一定的疗效,且可调控Caspase-3和Bcl-2的表达抑制OA中软骨细胞凋亡。

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂对眼角膜上皮细胞损伤的修复作用研究

目的：研究重组人白细胞介素-1受体拮抗剂（RhIL-1ra）对眼角膜上皮细胞损伤的修复作用。方法将40只大鼠随机分为五组：对照组、模型组和 RhIL-1ra（10、50、100μg/ ml 三组）治疗组，在显微镜下用角膜环钻刻痕，以虹膜铲刮除角膜上皮，术后 RhIL-1ra 治疗组给予 RhIL-1ra（10、50、100μg/ ml）治疗，对照组和模型组给予氯化钠注射液治疗；治疗结束后在裂隙灯显微镜下观察角膜的损伤情况、HE 染色观察角膜损伤程度和炎性细胞浸润情况。结果在裂隙灯显微镜下 RhIL-1ra 50μg/ ml 及 RhIL-1ra 100μg/ ml 治疗组着色区域较小，结膜充血、角膜水肿、房水混浊及虹膜表面新生血管等情况逐渐改善，其中以100μg/ ml 治疗组效果最为明显，且缺损面积得到一定修复。HE 染色结果也表明，RhIL-1ra 治疗组可见细胞的排列以及形态等逐渐恢复，角膜损伤减轻，炎性细胞浸润也减少等现象。结论 RhIL-1ra 对损伤的眼角膜上皮细胞有恢复作用，可望成为治疗眼部炎症的新方法。

通痹灵对胶原诱导型关节炎大鼠软骨及其细胞代谢的影响

目的探讨中药通痹灵(TBL)抗软骨破坏的作用机制。方法以胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠为动物模型,分组灌胃治疗后,做大鼠趾关节病理切片,常规HE染色,观察软骨病变;培养软骨细胞,以鼠重组白细胞介素-1β(rrIL-1β)体外刺激软骨细胞导致软骨细胞基质降解作为药理模型,加用不同浓度的通痹灵总碱,并以地塞米松作为对照组,培养48h后,收集细胞上清液,用阿利新蓝法检测葡糖胺聚糖(GAG)含量;用硝酸酶还原法检测NO的含量。结果①趾关节病理HE切片评价结果显示:通痹灵总碱组软骨破坏程度小于造模组(P<0.05〉;②不同浓度的rrIL-1β(1、10、100、500、1000ng/ml)促进了软骨细胞蛋白多糖的降解(P<0.01),且呈量效关系;③不同浓度的通痹灵总碱(200、100、50、25mg/L)及地塞米松可明显地抑制软骨细胞蛋白多糖的降解(P<0.01)及NO的产生(P<0.01)。结论通痹灵总碱可抑制CIA大鼠趾关节软骨破坏;体外实验结果显示通痹灵总碱可对抗软骨细胞蛋白多糖的降解,其作用途径可能是通过抑制NO的生成来实现的。

醋酸泼尼松片联合重组人白细胞介素受体拮抗剂治疗特发性间质性肺炎的临床疗效

目的探讨醋酸泼尼松片联合重组人白细胞介素-1（IL-1）受体拮抗剂治疗特发性闯质性肺炎的临床疗效。方法入选128例特发性间质性肺炎患者，随机分为2组，每组64例。在常规治疗的基础上对照组口服醋酸泼尼松片60mg／d，连续服用1个月，治疗组在对照组的基础上每日皮下注射重组人IL-1受体拮抗剂80mg，连续给药1个月。比较2组患者的临床疗效、治疗前后的肺功能和血气分析指标，分析2组患者治疗前后的血清肿瘤患死因子（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）。结果治疗后，治疗组咳嗽、呼吸困难、紫绀和肺哆音的治疗有效率分别为83．0％、89．1％、78．1％和90．6％，均显著性高于对照组（P〈0．05）；治疗组患者治疗后肺总活量（VC）、第1秒用力呼气容积（FEV1）占用力呼气容积（FVC）的百分比和肺弥散量（DLCO）均较对照组显著升高（P〈0．05）；治疗后血清TNF-α和IL-6均显著较治疗前降低（P〈0．05），且治疗组较对照组降低更明显，组间比较差异具有显著性差异。结论醋酸泼尼松联合重组人IL-1受体拮抗剂治疗特发性间质性肺炎的临床疗效显著，且无明显不良反应发生，为特发性间质性肺炎提供了新的治疗方案。