重组白细胞介素13对成纤维细胞增殖的影响

目的:观察重组白细胞介素13(rIL-13)对NIH3T3细胞增殖作用的影响,探讨肺纤维化的发病机制。方法:NIH3T3细胞分为rIL-13组和不含rIL-13的对照组r,IL-13组加入不同浓度的rIL-13,作用24及48h。透射电镜观察3T3细胞的超微结构,Hoechst试剂盒观察细胞DNA形态变化,噻唑蓝比色试验(MTT法)测定细胞增殖率。结果r:IL-13呈剂量依赖方式刺激3T3细胞细胞生长。经rIL-13 80 ng/ml孵育的细胞DNA合成增加,细胞核增大,细胞质中可见较多核糖体及线粒体。rIL-13组细胞增殖率增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论r:IL-13可能通过促进成纤维细胞增殖,在肺纤维化的发病机制中发挥重要作用。

三氧化二砷抑制重组白细胞介素13促成纤维细胞胶原的表达

目的观察三氧化二砷(As2O3)对重组白细胞介素13(rIL-13)促成纤维细胞的增殖及分泌胶原是否有抑制作用。方法体外培养3T3成纤维细胞,细胞分组为DMEM对照组、rIL-13(80 ng/mL)组及rIL-13加不同浓度As2O3(2μmol/L和4μmol/L)组。24 h和48 h后,MTT法观察细胞生长抑制情况,用细胞抑制率表示;各组药物作用细胞48 h后,Western blot法检测I型胶原(CoI I)的表达。结果 As2O3可显著抑制3T3成纤维细胞增殖,且呈剂量-效应关系(P<0.01)。各组均可检测到Ⅰ型胶原表达。其中,rIL-13(80 ng/mL)组Ⅰ型胶原表达显著高于其他各组细胞;rIL-13加不同浓度As2O3(2μmol/L和4μmol/L)组成纤维细胞分泌I型胶原的量显著低于rIL-13组(P<0.01),但4μmol/LAs2O3+rIL-13组与2μmol/L As2O3+rIL-13组相比,细胞分泌I型胶原的水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 As2O3对白细胞介素13促3T3成纤维细胞增殖和分泌I型胶原有抑制作用。

重组白细胞介素13诱导成纤维细胞分泌巨噬细胞炎症蛋白1α

目的观察重组白细胞介素13对3T3成纤维细胞巨噬细胞炎症蛋白-1αmRNA表达的影响。方法分别用DMEM(对照组)和40ng/ml、80ng/ml重组白细胞介素13(干预组)培养液作用于3T3成纤维细胞,24h和48h后MTT法观察细胞生长情况,用细胞增殖率表示;两组细胞24h后原位杂交方法检测巨噬细胞炎症蛋白-1αmRNA的表达。结果重组白细胞介素13可显著促进3T3成纤维细胞增殖,且呈时间-剂量效应关系(P<0.01)。对照组及重组白细胞介素13组均可检测到巨噬细胞炎症蛋白-1αmRNA的表达,但与对照组相比,重组白细胞介素13显著促进巨噬细胞炎症蛋白-1αmRNA的表达。结论重组白细胞介素13促进成纤维细胞分泌巨噬细胞炎症蛋白-1α,可能在肺纤维化的发生、发展过程中起重要作用。

重组人白细胞介素-13对造血细胞白细胞介素-13受体α1表达的调控

目的探讨白细胞介素-13受体α1(interleukine-13 receptor α1,IL-13,Rα1)在造血细胞的表达及其在重组人白细胞介素-13(recombmant human ineterleukine-13,rhIL-13)作用下的表达变化。方法细胞培养,提取细胞总RNA,用RT-PCR及图象分析法检测Dami细胞白细胞介素-13受体浕1mRNA表达的水平。结果Dami细胞均表达白细胞介素-13受体α1;rhIL-13作用Dami细胞4h后,白细胞介素-13受体α1 mRNA表达降低12h后,IL-13Rα1 mRNA表达恢复。结论①Dami细胞表达IL-13Rα1。②rhIL-13短暂下调Dami细胞IL-13Rα1的表达。

人白细胞介素13重组蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌的表达

目的 构建人白细胞介素 13(rh IL- 13)重组蛋白表达载体 ,热诱导 rh IL- 13在 E.coli DH5 α表达。方法 经巢式 RT- PCR从非粘附贴壁生长的 PBMC活化细胞中克隆 h IL- 13成熟蛋白编码基因 ,随后构建 rh IL13- PBV重组蛋白表达质粒 ,热诱导表达重组蛋白。结果 在 h IL13- PBV/ DH5 α工程菌热诱导全菌蛋白中检测到相对分子质量大小约为 10× 10 3的 h IL- 13重组蛋白 (rh IL- 13蛋白 )。结论 rh IL- 13的表达成功 ,为今后进一步研究 h IL-13的生物学功能 ,探讨其临床应用价值奠定了一定的物质基础。

重组人白细胞介素-13对巨核细胞系-Dami细胞原癌基因c-mpl表达的影响

目的 :研究重组人白细胞介素 13 (rhIL 13 )对巨核细胞系 -Dami细胞原癌基因c mpl表达的影响。方法 :实验组细胞培养系统中分别加入 2 5ng/ml,5 0ng/ml,10 0ng/mlrhIL 13 ,对照组不加任何细胞因子。用RT PCR法检测c mplmRNA的表达。结果 :经 2 5ng/ml、5 0ng/ml、10 0ng/mlrhIL 13处理过的实验组Dami细胞较之对照组其c mplmRNA的表达分别提高 2 4 .8%、2 7.9%和 3 1.5 %。结论 :rhIL 13增强了Dami细胞原癌基因c mpl表达 ;rhIL 13促进Dami细胞增殖的部分机制可能是通过上调c mpl的表达来实现的。

重组人白细胞介素-13在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

采用大肠杆菌(Escherichia coli)作为宿主,通过300L发酵罐进行中试发酵表达重组人白细胞介素-13(rhIL-13)融合蛋白;经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导,离心发酵液收集菌体,菌体经溶解、变性、稀释复性及亲和层析捕获,获得融合蛋白;融合蛋白经肠激酶酶切后,再经亲和层析分离和分子筛精细纯化等步骤,获得高纯度rhIL-13原液.每升发酵液可获得高纯度的rhIL-13原液约30mg.通过本纯化工艺获得的rhIL-13原液经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法检测,纯度大于98.75%;经高效液相色谱分子排阻(HPLC-SEC)法检测,纯度为100%;质谱(MS)法测定rhIL-13分子质量为12 348u,与理论值基本一致;采用噻唑蓝(MTT)法进行比活性检测,比活大于8.0×106 IU/mg;采用HPLC-SEC法和MS法对rhIL-13二硫键数目和位置进行分析,结果显示二硫键数目和位置与理论一致.此操作方法可获得高纯度、高活性的rhIL-13原液,并且操作简单,易于放大,可实现工业化规模生产.

人重组白细胞介素-13在毕氏酵母中的表达及其体外诱导DC分化作用的研究

目的:在毕氏酵母中表达重组人IL-13并探讨其对DC的诱导作用。方法:用基因工程的方法人工合成IL-13的全长片段,并转化至毕氏酵母菌株GS115中,筛选后获得表达量相对较高且分泌稳定的rhIL-13基因工程菌株,用rhIL-13来替代IL-4体外诱导DC。结果:得到表达量达25 mg/L且分泌稳定的rhIL-13基因工程菌株;rhIL-13具有rhIL-4同样的体外诱导外周血单核细胞向DC增殖分化的作用,MHCII、CD1α、CD80、CD83、CD86等DC表型分析和混合淋巴细胞反应刺激T细胞增殖的作用与IL-4诱导得到的成熟DC并无显著差别,其所诱导的未成熟DC具有很强的摄取抗原能力。结论:获得表达量相对较高且分泌稳定的rhIL-13基因工程菌株,rhIL-13在体外可有效地诱导外周血单核细胞向DC分化。

三氧化二砷对rIL-13诱导肺成纤维细胞增殖和炎性介质表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)的抗肺纤维化机制。方法将体外培养的肺成纤维NIH3T3细胞株随机分为对照组及观察组,对照组仅予DMEM培养基,观察组予80 ng/ml重组白细胞介素(rIL)-13及不同浓度As2O3处理24、48 h。MTT法检测细胞增殖;原位杂交方法检测巨噬细胞炎症蛋白(MCP)-1αmRNA表达;放射免疫法检测细胞培养上清液IL-6、IL-8水平。结果 As2O3处理后细胞增殖明显受抑,且呈时间和剂量依赖性(P<0.01);rIL-13处理后细胞MCP-1αmRNA和IL-6、IL-8表达增强,联用As2O3后此作用明显受抑(P<0.01)。结论 As2O3可能通过抑制rIL-13诱导的肺成纤维细胞增殖及炎性介质表达而发挥抗肺纤维化作用。

重组白喉毒素-人白细胞介素13嵌合毒素诱导胶质瘤细胞凋亡作用的初步研究

目的 探讨重组白喉毒素-人白细胞介素13嵌合毒素DT389-IL13对胶质瘤细胞的杀伤作用机制。方法 在U251细胞中加入不同浓度的嵌合毒素DT389-IL13,作用72 h后分别进行H33342染色,观察胶质瘤细胞核形态,电镜观察细胞超微结构,用流式细胞仪计数亚二倍体细胞百分数等。结果 3种检测结果均表明,嵌合毒素DT389-IL13可诱导U251胶质瘤细胞发生凋亡,1×10-9mol/L嵌合毒素作用72 h后亚二倍体细胞百分比为38％,1×10-8mol/L.作用后亚二倍体细胞百分比为99％,明显高于对照组(3.63％),与荧光染色观察的结果一致;电镜下还可见固缩的线粒体。结论 嵌合毒素DT389-IL13可诱导胶质瘤细胞凋亡。