人偏肺病毒融合蛋白N-糖基化位点的预测及不同N-糖基化修饰突变体的构建

目的预测人偏肺病毒(hMPV)融合蛋白N-糖基化位点,构建N-糖基化修饰突变体。方法NetNGlyc1.0 Server神经网络软件预测hMPV4个亚型代表株F蛋白氨基酸序列的N-糖基化位点;根据预测结果针对性地设计突变引物,应用基因工程技术进行定点突变,从而获得特定位点去糖基化的F基因,包括单位点突变体、双位点突变体及三位点突变体;双酶切鉴定、基因序列分析重组质粒,明确N-糖基化修饰突变体构建是否成功。结果hMPV4个亚型代表株F蛋白氨基酸序列从N端起第57、172、353位均存在可能性大于50%的N-糖基化位点。构建hMPVF蛋白7个不同的N-糖基化修饰突变体,并通过序列分析测定证实重组突变质粒构建成功。结论hMPVF蛋白的N-糖基化位点保守,不同亚型的代表株有相同的糖基化位点,利用定点突变技术成功构建了糖基化突变体重组质粒。