传染性软疣病毒MC148基因腺病毒重组粘粒构建

目的 构建传染性软疣病毒 (MCV )MC14 8基因腺病毒重组粘粒。方法 从软疣小体中提取病毒DNA ,经PCR扩增后构建于 pUC19克隆载体上。对克隆产物测序后 ,与粘粒pAxCAwt定向重组。 结果 克隆出MC14 8基因并构建了 pAxCAwt MC14 8粘粒重组体。结论 本方法建立为研究MC14 8基因转染对趋化因子的拮抗作用奠定基础。

重组粘粒pIXUR3502对甘蓝黑腐黄单胞菌胞外多糖生物合成的负调控

通过三亲交配，XCCNAU-1基因文库中的重组粘粒可以从Ecoli转移到XCCNAU－R3中，绝大多数重组粘粒的转入对甘蓝黑腐菌胞外多糖（Eps）生物合成无明显影响，但导致菌株生长较慢。重组粘粒pIXUR3502（约50kb）对Eps生物合成有负调控，使产量降低35.1％，发酵液粘度降低40．6％，其中，载体pIJ3200本身使产量降低6．7％，发酵液粘度降低9．4％，约28kb的外源DNA片段使产量降低28．4％，发酵液粘度降低31．2％。

表达禽流感病毒HA蛋白及传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建

为构建同时表达禽流感病毒(AIV)HA蛋白及传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT),本研究以本实验室构建的连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的5个重组粘粒(p Fos A、p Fos B、p Fos C、p Fos D和p Fos E)为基础,利用猪捷申病毒2A蛋白的编码序列,将HA基因和VP2基因串联,并克隆于p CAGGs载体中,构建重组质粒p CA-HA-2A-VP2。利用Gateway LR克隆技术,将重组质粒中的HA-2A-VP2的表达盒(Pec-HA-2A-VP2-POLYA)插入到p Fos C粘粒中HVT片段的复制非必需区HVT053与HVT054基因之间,构建重组粘粒p Fos C-5354-HA-VP2。将p Fos A、p Fos B、p Fos D、p Fos E和p Fos C-5354-HA-VP2 5个重组粘粒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),制备表达HA蛋白及VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT-5354-HA-VP2)。将重组病毒在CEF中连续传至20代后,通过PCR、间接免疫荧光和western blot鉴定分析,结果显示HA与VP2基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果表明,重组病毒在CEF中的增殖效率与野生型病毒HVT无显著差异。该重组病毒的制备为研制AIV-IBDV-马立克病毒三联苗奠定了基础。