重组细小病毒对胶质瘤细胞的生长抑制作用

[目的]研究表达趋化因子MIP-1α/LD78β的重组细小病毒对胶质瘤细胞的生长抑制作用。[方法]共转染法制备重组病毒。用重组病毒感染人胶质瘤细胞系U87MG以及鼠胶质瘤细胞系GL261,监测细胞生长并用ELISA方法测定细胞培养上清中MIP-1α蛋白每日和累积表达量。克隆形成实验测定病毒的细胞毒性。[结果]与未处理的细胞相比,MOI=3RU/cell的重组病毒感染使GL261细胞克隆形成减少。U87MG和GL261细胞感染重组病毒后均可产生大量MIP-1α蛋白。日表达量的高峰分别出现在感染后第3d和第4d。2×105的GL261和U87MG细胞在感染(MOI=3)5d后累积蛋白表达量分别为780ng/ml和250ng/ml。和对照相比,重组病毒感染的GL261细胞生长减慢,但表达MIP-1α或LD78β的重组病毒与不含外源基因的重组病毒感染GL261后,活细胞数目没有明显差异。U87MG对病毒的敏感性低于GL261,感染重组病毒的各组细胞生长比对照略缓慢。[结论]重组细小病毒在体外对U87MG和GL261胶质瘤细胞的生长有抑制作用,但转导外源基因MIP-1α/LD78β在体外对细胞生长无明显影响,抑制作用主要是由于病毒的细胞毒性引起。

1株重组型番鸭细小病毒的分子特征解析

为了对1株番鸭细小病毒(MDPV)分离株NY18株的分子特征予以准确揭示,通过设计重叠PCR引物,扩增NY18株的完整基因组并进行了测序。结果显示,NY18株基因组由5071个碱基组成,5′和3′端末端倒置重复序列(inverted terminal repeats,ITR)均由424个碱基组成,其外侧385个碱基形成回文发夹结构。Simplot 3.5.1和RDP4软件分析表明,NY18株经历了2次重组事件,第1次重组产生在VP3基因的1.1 kb区域,第2次重组事件产生在P9启动子至Rep基因上游约100 bp区域内。2次重组均以经典型MDPV YY株作为主要亲本,而经典型鹅细小病毒(GPV)强毒株DY16和鹅胚化的弱毒疫苗株SYG61v作为次要亲本参与了重组。NY18株的ITR与经典型MDPV FM和YY株的同源性为97.9%和99.1%,而与GPV强毒株YZ99-6的同源性仅有86.0%,表明NY18株ITR仍来自于经典型MDPV。以VP1基因1.1 kb重组区片段构建遗传进化树,NY18株与经典型GPV处于同一分支,而以非重组区的Rep1基因1774 bp和VP1基因氨基端694 bp、羧基端405 bp片段分别构建遗传进化树,NY18株则与经典型MDPV处于同一分支。结果表明,NY18株既不同于经典型MDPV也不同于GPV,其本质是1株重组型的MDPV。

重组杆状病毒细小VP2蛋白40L生物反应器放大工艺研究

研究了Sf9细胞生产重组杆状病毒细小VP2蛋白在机械搅拌式生物反应器(STR)中从3L至40L的放大工艺。首先在3L反应器中,通过DO和搅拌转速的优化,使反应器中的VP2蛋白HA效价不低于摇瓶结果。在40L反应器放大时,温度、p H、DO保持不变,根据输入搅拌功率、体积溶氧系数和叶尖线速度等工程参数的计算,得到了该反应器的合理搅拌转速,最终HA效价测定结果与小罐一致。豚鼠免疫试验证实,反应器中表达的VP2蛋白制成疫苗,与HN2011灭活苗及商品化灭活疫苗相比,抗体水平上升较快且高于传统灭活苗。