绿荧光蛋白的双光子激发的荧光特性研究

利用双光子激发方式研究了重组绿荧光蛋白 (recombinantgreenfluorescentprotein,简称rGFP)的光转换特性 ,研究结果表明rGFP具有较强的双光子激发荧光。双光子激发的荧光偏振光谱表明rGFP在辐照前质子态和去质子态之间存在着有效的能量转移过程。rGFP辐照后导致生色团构象的变化 ,部分阻断了rGFP内源的氨基酸与生色团之间的能量转移过程 ,导致rGFP的双光子激发的荧光强度下降。观察到rGFP的三光子激发的荧光特性 ,这种三光子激发的荧光主要来源于rGFP内源的氨基酸 (色氨酸 ,酪氨酸等 )的吸收。研究结果对在实际使用定量的荧光显微镜时具有一定的指导意义。