地奈德乳膏联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子治疗婴幼儿刺激性尿布皮炎的临床效果

目的评价地奈德乳膏联合重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rb-bFGF)治疗婴幼儿刺激性尿布皮炎的临床效果和安全性。方法选取2020年1月至2021年6月赣州市妇幼保健院皮肤科门诊收治的83例尿布皮炎患儿作为研究对象,采用随机数字表法将其分为治疗组(42例)与对照组(41例)。治疗组采用rb-bFGF凝胶涂患处,待局部干燥后外涂地奈德乳膏,对照组仅用清水洗净患处,局部干燥后外涂地奈德乳膏。分别于治疗3、7、14 d随访,比较两组的疗效、愈合时间及不良反应、复发情况。结果两组患儿治疗前的严重程度指数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组的总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组的治疗效果优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组的治愈时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组的不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组的复发率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论地奈德乳膏联合rb-bFGF凝胶治疗婴幼儿刺激性尿布皮炎安全、有效,复发率低,无明显不良反应,可用于临床。

重组人粒细胞集落刺激因子对糖尿病大鼠脑缺血后胰岛素样生长因子-1表达的研究

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)是否能改善局灶性脑缺血糖尿病大鼠的神经功能,并观察对神经细胞凋亡及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)蛋白表达的影响。方法线栓法复制糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞模型,rhG-CSF干预组连续皮下注射rhG-CSF,50μg/(kg·d),进行神经功能缺损评分,采用TUNEL染色计数脑缺血周边区神经细胞凋亡数,免疫组织化学方法检测IGF-1的蛋白表达。结果rhG-CSF干预组神经功能缺损评分明显低于对照组(P<0.01);rhG-CSF干预组缺血周边区的TUNEL阳性细胞数均明显少于对照组(P<0.01);IGF-1蛋白免疫阳性细胞明显多于对照组(P<0.01)。结论rhG-CSF可增加糖尿病脑缺血之后缺血周边区IGF-1蛋白的表达,拮抗神经细胞凋亡,改善神经功能。

肝细胞生长因子基因重组腺病毒修饰间充质干细胞修复急性放射性损伤大鼠的创面

背景:基因药物与干细胞联合应用促进难治性大面积创面修复。目的:观察携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒(adenovirus hepatocyte growth factor,Ad-HGF)修饰的间充质干细胞对大鼠皮肤放射性损伤创面促愈合的作用。方法:体外分离、培养雄性Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,转染Ad-HGF后备用。40只雌性Wistar大鼠用X射线局部照射制备急性放射性皮肤损伤模型。并将模型大鼠随机分为单纯间充质干细胞治疗组、单纯Ad-HGF治疗组、Ad-HGF修饰的间充质干细胞治疗组、溶剂对照组4组,制备模型即刻各组将相应细胞悬液、病毒悬液及溶剂行创面边缘多点注射。结果与结论:苏木精-伊红染色结果显示,伤后21d Ad-HGF修饰的间充质干细胞治疗组再生表皮明显薄于溶剂对照组,并可见丰富的新生小血管,且表皮较单纯间充质干细胞治疗组和单纯Ad-HGF治疗组更平整,新生小血管更丰富;免疫组织化学结果表明,Ad-HGF修饰的间充质干细胞治疗组创面中肝细胞生长因子表达均强于其他组;羟脯氨酸含量Ad-HGF修饰的间充质干细胞治疗组在7d后显著低于其他组(P<0.05);原位杂交结果显示,Ad-HGF修饰的间充质干细胞治疗组修复的皮肤组织中性别决定基因sry表达强于单纯间充质干细胞治疗组。结果提示,Ad-HGF修饰的间充质干细胞对皮肤放射性损伤创面有显著的促愈合修复作用,且优于二者单独应用。

重组人粒细胞集落刺激因子对糖尿病脑缺血大鼠神经细胞凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对糖尿病脑缺血大鼠神经细胞凋亡及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法制备糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞模型;对模型鼠采用rhG-CSF50μg/(kg.d)皮下注射;分别于注射后7d、14d和21d采用神经功能评分(NSS)量表进行评分;对脑组织切片予以TUNEL染色,计数脑缺血周边区神经细胞凋亡数;免疫组化法检测脑组织VEGF表达。结果与对照组比较,rhG-CSF组各时间点NSS明显降低(均P<0.01);脑缺血周边区的TUNEL阳性细胞数明显减少(均P<0.01);VEGF蛋白免疫阳性细胞明显增多(均P<0.01)。结论rhG-CSF通过增加糖尿病脑组织缺血后VEGF蛋白的表达,减轻神经细胞的凋亡而发挥脑保护作用。

纯化肝细胞生长因子对肝癌细胞的增殖刺激作用

利用ＤＥＡＥ纤维素层析、ＦＰＬＣ和ＨＰＬＣ分离，从人胎肝中获得了纯化的特异刺激肝来源细胞ＤＮＡ合成的肝细胞生长因子（ＨＧＦ）。进一步研究表明，ＨＧＦ明显刺激人肝癌细胞的增殖，其刺激活性具有量效关系，并诱导肝癌细胞从Ｇ０／Ｇ１期进入Ｓ期。本研究为探讨ＨＧＦ作用机理建立了模型。

重组人肝细胞生长因子α的纯化与活性测定

目的纯化重组人肝细胞生长因子α(rhHGFα)包涵体,复性并测定其活性。方法大肠杆菌中表达的rhHGF琢以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的25%。离心分离包涵体,用8mol/L尿素溶解,梯度稀释复性。经SephadexG75凝胶过滤和POROSHQ阴离子交换纯化,噻唑蓝法(MTT)测定活性。结果rhHGF琢纯度达到90%以上,其刺激肝细胞生长的活性达到rhHGF标准品的80%。结论建立了纯化rhHGF琢的技术路线,rhHGF琢具有刺激原代培养大鼠肝细胞生长的作用。

重组人肝细胞生长因子-β链的高效表达及包涵体纯化研究

目的 构建重组人肝细胞生长因子 - β链 (rh HGF- β)的表达体系。筛选高效表达工程菌株 ,分离纯化 rh HGF- β。方法 用工程菌诱导培养技术筛选 rh HGF- β的高效表达菌株。从诱导起始时间、诱导时间、温度、p H值、培养基组分等方面优化 rh HGF-β的表达体系。进一步对 rh HGF-β进行粗纯化 ,采用超声波破菌 ,溶菌酶破菌 ,高速离心反复洗涤获得包涵体。采用凝胶过滤层析纯化 rh HGF-β。结果 经十二烷基硫酸钠 -多丙烯酰胺冻胶电泳 (SDS- PAGE)及扫描分析目的蛋白的表达量达 3 0 % ,经纯化后可获得纯度在 90 %以上的 rh HGF-β。结论 建立了高效稳定的 rh HGF- β表达体系 ,获得实验室水平 rh HGF-

重组腺病毒肝细胞生长因子对乙型肝炎病毒感染滋养层细胞的抑制作用

目的:探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)体外感染滋养层细胞(JEGⅢ)的治疗作用。方法:在转染与不转染rAd-HGF两种情况下,HBV阳性血清感染JEGⅢ。用GIMSA染色、透射电镜及荧光定量PCR三种方法观察感染后细胞形态学及培养物中HBV-DNA含量的变化。结果:形态学观察转染rAd-HGF组细胞病变较未转染组有明显减轻,且未转染组胞质内可见HBV颗粒。荧光定量PCR显示未转染Ad-HGF组培养上清中HBV-DNA含量较转染组明显增高(P<0.05)。结论:HGF可有效抑制HBV感染滋养层细胞。

肝细胞生长因子及肝细胞刺激因子的研究概况

目前的研究表明 ,能够特异性促进肝细胞生长的因子分为两种 :血源性肝细胞生长因子和肝源性肝细胞刺激因子。本文分别综述了这两种因子的来源、结构、理化性质、功能及临床应用 ,阐明二者并非同一物质。

携带肝细胞生长因子基因重组质粒在大鼠体内的组织分布研究

目的研究携带肝细胞生长因子基因的重组质粒(pUDKH)经肌肉注射给药后在大鼠体内的组织分布及其与大鼠基因组DNA的整合情况。方法二级Wistar大鼠雌雄各20只,按体重和取样时间的不同随机分为12h、24h、3d、7d、14d、21d的各实验组(给予pUDKH,2.0mg/kg)和注射后3d取样的对照组(给予PBS,200μl/只),依次将各组大鼠摘眼球取血后脱臼处死,按脑、心、肺、胸腺、肝、肠系膜淋巴结(MLN)、脾、肾、生殖腺、左腿肌肉、右腿肌肉的顺序取样。经典酚/氯仿抽提法提取各组织总DNA,应用紫外分光光度计测定其浓度和纯度,PCR方法检测其中的β肌动蛋白基因;巢式PCR检测各组织总DNA中pUDKH的分布情况;ApaLI酶切分离pUDKH分布阳性各组织中的pUDKH DNA和基因组DNA,巢式PCR检测pUDKH DNA与基因组DNA的整合情况。结果各组织总DNA浓度与纯度均符合实验需要,并适于采用PCR或巢式PCR方法进行体内组织分布及基因组DNA整合情况检测。巢式PCR检测显示,在各时间点的右腿肌肉与外周血、注射后3和7d的肝脏、3和14d的生殖腺、7d的胸腺、7和14d的MLN与左腿肌肉等组织中pUDKH分布均呈阳性,而在各时间点的脑、心、肺、脾、肾等组织中pUDKH分布均呈阴性。pUDKH分布阳性的各组织中均未检测到pUDKH DNA与基因组DNA的整合。结论pUDKH经肌肉注射给药后,在各时间点大鼠体内各组织中呈现不同的分布谱。在pUDKH分布阳性的各组织中,pUDKH DNA与基因组DNA发生随机整合的概率较低。

人类重组肝细胞生长因子影响膀胱癌细胞株生长和抑制丝裂霉素C诱导细胞凋亡的研究

目的 :观察人类重组肝细胞生长因子 (rhHGF)对膀胱移行细胞癌T2 4细胞增殖和丝裂霉素C(MMC)诱导的细胞凋亡的影响。方法 :以T2 4细胞为研究材料 ,用不同浓度rhHGF干预T2 4细胞生长及MMC诱导的细胞凋亡作用。利用MTT实验、流式细胞仪技术来判定rhHGF对细胞增殖和凋亡的影响。结果 :不同浓度rhHGF组间 ,T2 4相对增殖细胞数差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;rhHGF预处理后 ,MMC诱导的T2 4细胞凋亡率明显下降 ,在一定范围内有量效关系。结论 :HGF并不显著诱导T2 4细胞增殖 ,而一定剂量范围内的HGF能抑制MMC诱导的细胞凋亡 ,可能与膀胱癌的复发。

重组腺病毒介导的肝细胞生长因子基因体外转染骨髓间充质干细胞源性脂肪细胞

背景：肝细胞生长因子可促进血管内皮细胞增生及新生血管形成，已广泛应用于病理性瘢痕、心肌缺血等的实验性治疗。目的：鉴于重组腺病毒的宿主范围广，探讨重组腺病毒介导的人肝细胞生长因子对骨髓间充质干细胞源性脂肪细胞转染效率、目的蛋白表达及细胞活性的影响。设计、时间及地点；2006—08／2007-07在解放军兰州军区兰州总医院完成的细胞对比实验。材料：清洁级2月龄Wistar大鼠25只用于制备骨髓间充质干细胞。携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒毒株、重组腺病毒介导的人肝细胞生长因子由解放军兰州军区兰州总医院博士后科研工作站哈小琴博士惠赠。方法：向体外培养至第3代的骨髓间充质干细胞中加入含地塞米松、IBMX、牛胰岛素、吲哚美辛、胎牛血清的L-DMEM进行成脂诱导。以不同感染强度的携带绿色荧光蛋白基因重组腺病毒转染诱导后的脂肪细胞。重组腺病毒介导人肝细胞生长因子以最佳感染强度转染诱导后的脂肪细胞。主要观察指标：油红。染色检测成脂情况。流式细胞仪计数绿色荧光蛋白阳性表达，计算转染效率。ELISA法检测转染上清中肝细胞生长因子的表达，MTT法检测转染脂肪细胞的活性。结果：①骨髓间充质干细胞成脂诱导后胞质内富含橙红色的脂滴，成脂率（97-31±0．46）％。②以100pfu／cell携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒转染脂肪细胞72h后，绿色荧光蛋白表达量达高峰，此时转染效率为65．39％。③以100pfu／cell作为最佳感染强度转染脂肪细胞72h后，肝细胞生长因子的表达量为峰值。与未转染空白对照比较，转染后24，48，72，96，168h脂肪细胞活性均无明显变化（t=-0．024～0．092，P〉0．05）。结论：重组腺病毒可介导肝细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞，有效表达目的蛋白，且转染该基因对脂肪细胞的活性无影响。

重组人肝细胞生长因子激活因子质粒的构建、表达和功能研究

背景：肝细胞生长因子激活因子（HGFA）是活化单链前体HGF（pro—HGF）成为有生物学功能的HGF的关键酶．在受损组织器官的修复和再生中发挥重要作用。目的：制备rhHGFA—Fc融合蛋白并证实其具有肝细胞保护功能。方法：采用基因重组技术构建表达人源化HGFA成熟肽段与人IgGFc段融合蛋白的载体，以脂质体介导法转染人胚肾293细胞。纯化293细胞表达产物，以蛋白质印迹法鉴定纯化蛋白（rhHGFA—Fc融合蛋白）及其对pr0．HGF的酶切活性，以流式细胞术检测融合蛋白介导的肝细胞凋亡抑制作用。结果：SDS—PAGE显示转染重组质粒的293细胞总蛋白纯化产物在62kDa处显示单一蛋白条带。蛋白质印迹法结果显示纯化的rhHGFA-Fc融合蛋白能与抗hHGFA单克隆抗体发生特异性反应，并将pro-HGF酶切为仅链和p链，酶切活性呈剂量依赖性，半效酶切活性（IC50）为8．22nmol／L；流式细胞术结果显示融合蛋白通过激活pro．HGF发挥其抑制肝细胞凋亡的作用。结论：293细胞表达的rhHGFA—Fc融合蛋白纯度高、酶切活性强，可高效激活pro—HGF，对于肝组织严重损伤，特别是肝硬化基础上肝损伤的治疗具有潜在价值。

人肝细胞生长因子基因腺病毒重组体的构建及转染血管平滑肌细胞的表达

为探讨构建能表达肝细胞生长因子基因的腺病毒重组体的方法,以及这种腺病毒重组体能否在血管平滑肌细胞表达。将含有肝细胞生长因子基因片段的质粒用限制内切酶酶切,以琼脂糖凝胶电泳回收得到目的基因片段;将它用DNA连接酶插入至腺病毒穿梭质粒中,并用限制内切酶鉴别插入方向,得到插入方向正确的重组腺病毒穿梭质粒。用限制内切酶酶切重组腺病毒穿梭质粒和表达载体,使它们线性化;以电转化方法使它们共转化至BJ5183细胞中进行同源重组,构成肝细胞生长因子基因腺病毒重组体。以脂质体为转染介质,将肝细胞生长因子基因腺病毒重组体转染到人胚肾细胞中进行包装,使病毒复性具有感染能力。用包装后的肝细胞生长因子基因腺病毒重组体感染体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞;经逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹检测发现肝细胞生长因子呈现过表达。此外,酶切及测序发现重组腺病毒穿梭质粒和肝细胞生长因子基因腺病毒重组体是正确的;绿色荧光蛋白标记对重组体在人胚肾细胞中的包装及包装后感染大鼠主动脉平滑肌细胞进行了荧光示踪。结果提示。肝细胞生长因子基因腺病毒重组体构建成功,为血管疾病转基因治疗奠定了基础,具有一定临床价值。

重组人肝细胞生长因子的纯化及鉴定

目的对重组人肝细胞生长因子（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｏｒ， ｒｈＨＧＦ）进行初步纯化及鉴定。方法 培养上清液经过离心、超滤，在ＦＰＬＣ系统上经肝素亲和层析分离纯化，用ＥＬＩＳＡ法检测、收集ｒｈＨＧＦ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电 泳鉴定纯度和相对分子质量，大鼠原代肝细胞培养法检测ｒｈＨＧＦ的生物学活性。结果ｒｈＨＧＦ主要在０．９～１．３ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ 范围内被洗脱，由约６２ ０００和３４ ０００两个亚基组成，明显促进大鼠肝细胞ＤＮＡ合成。结论 经肝素亲和层析分离，从 表达山ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞培养上清液中纯化出有活性的ｒｈＨＧＦ。

重组人肝细胞生长因子β链体外生物学活性的测定

目的 建立一种稳定灵敏的方法用于检测重组人肝细胞生长因子β链 (rhHGF β)对原代培养成年大鼠肝细胞的增生作用。方法 利用噻唑蓝 (MTT)比色方法在多种实验条件下对rhHGF β进行生物学活性检测。结果 对于体外原代培养成年大鼠肝细胞 ,rhHGF β可刺激肝细胞的增生 ,且有剂量依赖效应。 结论 确定了原代培养肝细胞检测rhHGF

重组人肝细胞生长因子真核表达的定性及定量检测

将人肝细胞生长因子 ( human hepatocyte growth factor ,h HGF)全长 c DNA重组入 p EE1 4真核稳定表达质粒 ,用 lipofectin脂质体将 p EE1 4 /rh HGF转染入 CHO-K1细胞 ,蛋氨酸亚氨基代砜 ( methioninesulfoximine,MSX)筛选出阳性细胞克隆 .利用 RT-PCR检测 rh HGF m RNA的表达 ,通过 ELISA法测定rh HGF的蛋白表达 ,3H掺入法检测培养上清液对大鼠原代培养肝细胞 DNA合成的影响 .结果表明转染p EE1 4 /rh HGF的细胞可扩增出 h HGF特异的 396bp RT-PCR片段 ,培养上清液明显促进大鼠肝细胞 DNA的合成 ,ELISA法测出上清液中 rh HGF的含量在 8μg/L以上 ,显示 rh HGF在

重组人肝细胞生长因子β链工程菌的高密度发酵

目的 实现重组人肝细胞生长因子 β链 (rhHGFβ)工程菌的高密度高表达发酵。 方法 首先在摇瓶中进行了培养条件的摸索 ,确定了该工程菌的培养条件、诱导起始时间和诱导时间 ,然后用 15L自控发酵罐进行分批补料培养 ,发酵中分阶段限制性流加氮、碳源 ,保持溶氧在 30 %以上。结果 菌体发酵密度达到 39g/L(湿菌重 ) ,达到并超过了重组蛋白在摇瓶中的表达水平 ,重组蛋白的表达占菌体总蛋白的 30 %左右。结论 本研究为rhHGFβ进一步下游纯化及功能研究奠定了基础。

重组人源性肝细胞生长因子的纯化及其生物学活性的初步研究

目的获取高纯度的重组人源性肝细胞生长因子(rhHDSSF),并探讨rhHDSSF在体外的生物学活性。方法收获大量培养的表达细胞,以冻融法提取蛋白质;以IMAC pH递减非变性法纯化表达的rhHDSSF;以MTT法测定其对HepG2,T24,Fibroblast和Hela细胞的增殖效应。结果从细胞裂解物中纯化得到20 kD左右的单一蛋白条带,其纯度达89％。细胞增殖实验证实这一蛋白产物对HepG2,Hela细胞有显著的增殖作用,并表现出良好的量效和时效关系,而对T24,Fibroblast细胞则增殖效果不明显。结论 本研究证实,人源性肝细胞生长因子(HDSSF)转染细胞株中有20 kD左右HDSSF相应蛋白表达,与HDSSF、598 bp开放读码框理论值相一致,且纯度达89％,并发现其有良好的细胞增殖作用。rhHDSSF是一种非特异性促细胞增长物质,但它也有一定的选择性,这可能与不同细胞表达的细胞受体差异而导致蛋白信号传导不同有关。

人重组卵泡刺激素和表皮生长因子对性未成熟小鼠卵母细胞和颗粒细胞复合体体外发育的作用

卵泡刺激素（FSH）对有腔卵泡和排卵前卵泡的促生命作用已被普遍接受，但关于其对腔前卵泡发育的作用报道结果不尽相同，关于表皮生长因子（EGF）对腔前卵泡的作用尚不确切，本研究目的在于探讨人重组卵泡刺激素（rechFSH)和EGF对早期卵泡发育的作用，利用胶原酶消化法从12日龄的小鼠卵巢中分离得到卵母细胞－颗粒细胞复合体（OGCs)(Fig.1)。体外每孔30－40个培养物并分别添加胎牛血清（FBS），rechFSH和EGF。培养物每4天测量卵母细胞和OGCs直径，并每天照相，结果显示，rechFSH显著促进小鼠OGCs 及其卵母细胞的体外发育，这一作用可被EGF进一步增强（P＜0．05）（Fig.2),但到第八天培养结束时，培养后的OGCs卵母细胞要显著小于体内期生长对照组（P＜0．05）（Fig.3)，说明FSH和EGF在卵泡早期发育中起重要作用。