FSHR－LHR特异肽段重组疫苗对内蒙古公绒山羊睾酮分泌水平的影响

为研究FSHR-LHR特异肽段重组疫苗（以后简称受体疫苗）对内蒙古公绒山羊睾酮分泌的影响，分别用促卵泡素受体（FSHR）疫苗和促黄体素受体（LHR）疫苗及其二者受体的混合疫苗对内蒙古公绒山羊进行了免疫实验。实验从1月龄开始，每45d免疫1次（接种疫苗采用股部和体两侧皮下3点注射法），至12月龄结束，每次实验都要采血，制备血清，并用ELISA和RIA方法分别测定血清抗体与睾酮水平；同时，对羊的体重，产绒量，绒厚，睾丸性状，爬跨行为进行检测和观察。结果表明；各实验组在抗体水平明显高于对照组；实验1，2组的睾酮水平与对照组差异不显著（P>0.05)；实验3组的睾酮水平和爬跨次数明显低于对照组（P<0.05)，证明该组受体疫苗能有效地抑制公绒山羊睾酮分泌和推迟性成熟；各实验组的体重，产绒量，绒厚，睾丸性状与对照组差异不显著（P>0.05)。说明注射的该受体疫苗对公绒山羊生长发育无不良影响。

日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶特异性肽段的基因克隆表达及特性鉴定

目的 应用基因工程方法制备 Sj C- TPI中特有抗原表位区域的肽段。方法 用 PCR法对Sj C- TPI与人的 TPI相应部分同源性较低的两个亲水区 15～ 6 6 aa和 12 9- 16 3aa的 DNA的基因序列进行扩增。采用基因拼接法连接后 ,克隆入表达质粒载体 p MAL - c2 x,转化入大肠杆菌 TB1 ,进行表达和鉴定。结果 该目的基因片段被成功地克隆入表达质粒载体 p MAL - c2 x,并能融合表达。经进一步纯化获得特异的重组肽段具有良好的抗原性 ,能被日本血吸虫病人血清识别 ,而不被正常人血清识别。结论 获得与人的 TPI同源性较低的特异重组肽段 。

巴泰病毒G1_(189aa-239aa)肽段的原核表达、纯化及间接ELISA方法的建立

本研究旨在获得高纯度巴泰病毒(Batai virus,BATV)G1蛋白强抗原性肽段,并建立一种用于检测BATV羊血清抗体的间接ELISA方法。首先对G1蛋白51个氨基酸编码的189-239位氨基酸强抗原肽段进行密码子优化,基因合成后构建重组表达质粒pET-32a-G1_(189aa-239aa),转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达。优化表达条件获得大量rHis-G1_(189aa-239aa)肽段,利用镍柱亲和层析方法进行纯化,并用BCA试剂盒进行蛋白浓度的测定。通过Western blotting对rHis-G1_(189aa-239aa)肽段进行抗原特异性分析,以rHis-G1_(189aa-239aa)肽段为抗原,羊BATV阳性血清作为抗体,通过方阵滴定优化反应条件,建立BATV间接ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示,rHis-G1_(189aa-239aa)肽段在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在,分子质量为24.5 ku,在0.1 mmol/L的IPTG诱导5 h后rHis-G1_(189aa-239aa)肽段表达量达到峰值。通过镍柱亲和层析纯化后,测得蛋白浓度为0.296 mg/mL。Western blotting结果显示,rHis-G1_(189aa-239aa)肽段特异性较好。以rHis-G1_(189aa-239aa)肽段为抗原建立的间接ELISA方法,通过条件优化确定最佳抗原包被浓度为2.5μg/mL,血清和二抗稀释度为1∶60和1∶10000。样品D450 nm值≥0.367为阳性,D450 nm值≤0.319为阴性。该方法与山羊痘病毒和布鲁氏杆菌的阳性血清均无交叉反应,批内和批间的变异系数均<10%,阳性血清最高可稀释至1600倍,该方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好的特点。利用本方法对云南地区的120份羊血清样本进行检测,血清阳性率为21.67%。本研究获得了特异性强和纯度较高的rHis-G1_(189aa-239aa)肽段,建立了间接ELISA方法,可应用于羊BATV血清流行病学调查,为疫病防控及致病机制研究奠定基础。

赤羽病病毒Gc_(405aa—480aa)肽段的高效可溶性表达及抗原性鉴定

为表达和鉴定赤羽病病毒Gc蛋白强抗原性肽段,对Gc蛋白的1个75氨基酸肽段(405aa—480aa)编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体p ET-Gc_(405aa—480aa),转化表达菌株BL21(DE3),在28℃用0.1 mmol/L IPTG诱导重组肽段表达。将重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段,通过Ni^+-NTA树脂亲和层析方法纯化后,用Western-bloting和ELISA分析其抗原性。SDS-PAGE显示,重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段以完全可溶性形式在大肠杆菌中得到高效表达;用Ni+-NTA树脂亲和层析方法纯化,获得了较高纯度的重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段;Western-blotting显示,该重组肽段对赤羽病病毒阳性血清具有很强的反应原性。本研究表达、纯化和鉴定了具有强抗原性的重组rHis-Gc_(405aa—480aa)肽段,为进一步开展Gc蛋白单克隆抗体制备、B细胞表位鉴定和诊断试剂研制奠定了基础。