重组胸腺素β4调节创伤皮肤层粘连蛋白5表达的研究

目的探讨重组胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)调节层粘连蛋白5(laminin5,LN-5)表达促进创伤愈合的机制。方法成年雄性SD大鼠60只,体重200～250g,采用直径8mm自制打孔器于脊柱两侧脊肋角处各制备1个全层皮肤缺损模型。根据伤口用药的不同,随机分为实验组(45只)和对照组(15只),实验组再根据用药剂量不同分为低、中、高剂量组,每组15只。实验组于模型制备后即刻、每天7:00、19:00分别予每个伤口表面滴加50μLTβ4,低、中、高剂量组Tβ4浓度分别为2、6、18μg/50μL,对照组同法滴加等量PBS液(pH7.2),共滴加7d。造模后观察大鼠大体情况,术后2、4、7d观察大鼠伤口愈合情况及取材行免疫组织化学观察。结果除高剂量组1只大鼠于术后7d死亡,余均存活至实验完成。术后7d,中剂量组伤口明显缩小,多数伤口与创缘皮肤衔接良好。术后2d,对照组和低、中、高剂量组伤口愈合率分别为7.67%±5.46%、29.01%±7.43%、26.54%±11.49%、10.39%±3.96%;术后4d分别为28.16%±13.76%、37.99%±13.05%、42.00%±9.56%、39.58%±12.74%;术后7d分别为59.08%±19.02%、64.15%±17.92%、77.39%±8.45%、69.78±8.45%。术后2d,低、中、高剂量组伤口愈合率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后2d,各组均可见较多LN-5阳性表达,对照组与低剂量组阳性表达强(P<0.05),中剂量组阳性表达最少;术后4d,中剂量组阳性表达最强(P<0.05);术后7d,中剂量组仍有较强阳性表达(P<0.01)。结论重组Tβ4早期抑制LN-5表达,有利于细胞的增殖、分化,中晚期上调LN-5表达,改善基质环境,促进表皮细胞迁移和创伤愈合。

重组胸腺素β4对大鼠心肌梗死心微血管及血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨重组胸腺素β4（Tβ4）对心肌梗死大鼠心微血管形成及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法：SD大鼠随机分为对照组、低剂量Tβ4组（0.08μg/100g）和高剂量Tβ4组（0.8μg/100g）,结扎大鼠左冠状动脉前降支,造成永久心肌梗死模型.对照组予PBS,低剂量组和高剂量组予Tβ4腹腔注射,1、5、10d在结扎线以下的部位取材,行碱性磷酸酶和VEGF免疫组织化学显色.结果：各组微血管面积、VEGF阳性细胞平均光密度（AOD）1d差异无统计学意义,给药组10d微血管密度高于对照组,高剂量组5、10d微血管密度高于低剂量组,高剂量组10dVEGF阳性细胞平均光密度高于对照组和低剂量组.结论：Tβ4能促进心肌梗死后微血管形成,增加心肌微血管密度,上调VEGF的表达,从而改善心功能.

重组胸腺素β4调节ICAM-1、MMP-2和LN-5促进创伤愈合的实验研究

目的探讨重组胸腺素β4(Thymosin β4,Tβ4)通过改善创面基质环境促进大鼠皮肤创伤愈合的作用机制。方法在大鼠背部制作直径8mm的全层皮肤损伤模型,动物分为对照组(PBS)、Tβ4低剂量组、Tβ4中剂量组、Tβ4高剂量组,每组5只,每天两次给药,2d、4d、7d取材,行ICAM-1(Intercellular adhesion molecule-1)、MMP-2(Matrix metallopoproteinase-2)、LN-5(Laminin-5)的免疫组化并进行平均积分光密度(IOD)分析。结果经Tβ4处理后的创面,ICAM-1阳性表达多,早期中、高剂量组表达较强(p<0.01),中期均减弱,高剂量组相对较强;晚期各组表达增强,高剂量组最强(p<0.01)。MMP-2早期对照组表达最高(p<0.01),高剂量组最弱(p<0.01);中期中剂量组表达明显(p<0.05);晚期基质阳性明显增多,对照组表达最强(p<0.01),高剂量组最弱(p<0.01)。LN-5早期各组均可见较多的阳性表达,对照组与低剂量阳性强(p<0.01),中剂量组阳性最少;中期中剂量组表达最强(p<0.01);晚期中剂量组仍然有较强的阳性表达(p<0.01)。结论Tβ4可能是通过调节ICAM-1、MMP-2、LN-5的表达,改善创面基质环境,促进皮肤创伤愈合。

重组人胸腺素β4对急性放射损伤小鼠多组织中炎症小体和凋亡相关基因表达的影响

目的探讨重组人胸腺素β4(rh-Tβ4)对急性放射损伤小鼠小肠、肺和脑组织中炎症小体和凋亡相关基因表达的影响。方法C57BL/6N小鼠随机分为正常对照组、放射损伤模型组和模型+rh-Tβ4组。8 Gy 60Coγ射线单次全身照射小鼠制备急性放射损伤模型,模型+rh-Tβ4组于照射后24 h立即ip给予rh-Tβ45μg·kg^(-1),每天1次,连续3 d。用放射免疫法检测小鼠小肠、肺和脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL^(-1)8)、IL-4、IL^(-1)3和转化生长因子β(TGF-β)等炎症细胞因子含量,用炎症小体和凋亡PCR芯片分别检测各组织中炎症小体和凋亡相关差异基因,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证部分差异基因。结果与正常对照组相比,模型组小鼠小肠、肺及脑组织中TNF-α,TGF-β和IL^(-1)8含量显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,模型+rh-Tβ4组小肠、肺及脑组织中TNF-α含量显著降低(P<0.05),小肠和脑组织中TGF-β和IL^(-1)8含量显著降低(P<0.05,P<0.01)。炎症小体PCR芯片结果显示,与正常对照组相比,模型组小鼠小肠、肺和脑组织中差异基因分别为13,9和11个;与模型组相比,模型+rh-Tβ4组小肠、肺和脑组织中差异基因分别为1,4和20个;与正常对照组相比,模型+rh-Tβ4组小肠、肺和脑组组织中差异基因分别为5,3和3个。RT-qPCR验证结果显示,组间存在显著差异且与PCR芯片变化趋势一致的基因为:小肠组织中,模型组炎症小体相关基因炎症小体负向调节基因Bcl2样1(Bcl2l1)mRNA较正常对照组显著下调(P<0.01),模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著上调(P<0.05),且与正常对照组无显著差异;脑组织中,模型组炎症小体相关基因NLR家族凋亡抑制蛋白1(Naip1)、炎症小体负向调节基因MEFV先天免疫调节因子(Mefv)及肿瘤坏死因子配体超家族成员11(Tnfsf11)mRNA较正常对照组显著上调(P<0.05);模型+rh-Tβ4组Tnfsf11 mRNA较模型组显著下调(P<0.05)。凋亡PCR芯片结果显示,与正常对照组相比,模型组小肠、肺和脑组织中差异基因分别为3,6和12个,模型+rh-Tβ4组小肠、肺和脑组织中差异基因分别为10,4和1个;与模型组相比,模型+rh-Tβ4组小肠和肺组织中无差异基因,脑组织中差异基因4个。RT-qPCR验证结果示,组间存在显著差异且与PCR芯片变化趋势一致的基因为:肺组织中,模型组抗凋亡基因肿瘤坏死因子配体超家族成员10(Tnfsf10)mRNA较正常对照组显著上调(P<0.01),模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著下调(P<0.05),且与正常对照组无显著差异;模型组及模型+rh-Tβ4组抗凋亡基因CD40配体(Cd40lg)mRNA较正常对照组显著下调(P<0.01);模型组促凋亡基因凋亡相关因子配体(Fasl)较正常对照组显著下调(P<0.05),模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著上调(P<0.05)。脑组织中,模型组抗凋亡基因Tnfsf10 mRNA较正常对照组显著上调(P<0.05);模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著下调(P<0.05),且与正常对照组无显著差异;模型组抗凋亡基因Cd40lg mRNA较正常对照组显著下调(P<0.05),模型+rh-Tβ4组该基因较模型组显著上调(P<0.05),且与正常对照组无显著差异。结论rh-Tβ4抑制照射所致促炎细胞因子表达,并可调节炎症小体和凋亡相关基因表达。

重组人胸腺素β4生物学活性测定方法的建立

目的:建立适用于重组人胸腺素β4(rhTβ4)体外质量控制的生物学活性测定方法,用于该制品的生物学活性评价。方法:利用ECV304细胞迁移法,摸索细胞密度、玻连蛋白(Vn)浓度、rhTβ4浓度等影响因素,并对试验条件进行优化及方法验证。结果:细胞密度为0.5×104/孔、Vn浓度为12.5μg/mL、rhTβ4浓度为200nmol/L、孵育时间24h和细胞迁移时间4h时,细胞迁移率较高。结论:建立了rhTβ4生物学活性测定方法,该方法专属性强、重复性好、准确性高,可用于rhTβ4生物学活性测定。

胸腺素β4调节皮肤创伤愈合时ICAM-1及VEGF的表达

目的研究重组胸腺素β4(thymosin 4,Tβ4)调节ICAM-1和VEGF的表达促进创伤愈合的机制。方法成年雄性SD大鼠,体质量200～250 g,制备全层皮肤缺损模型。动物随机分为PBS对照组和Tβ4 2μg/50 L组、6μg/50μl组和18μg/50μl组。实验组于模型制备后即刻、每天7:00、19:00伤口表面滴加Tβ4 50μl。对照组滴加等量PBS液。造模后2、4、7 d取材染色。结果H-E染色显示各组有不同程度的炎症反应和肉芽组织形成。Tβ4处理后,ICAM-1阳性表达增多,2 d时2、18μg组表达较强(P<0.01),4 d时各组均减弱,18μg组相对较强,7 d时各组表达增强,18μg组最强(P<0.01)。4 d时VEGF阳性最多,7 d时阳性减少,6μg组表达强度保持在较高水平(P<0.05)。结论重组Tβ4可能抑制炎细胞的活化和增殖,调节炎症反应影响ICAM-1、VEGF的表达,促进创伤愈合。