毛状根培养在植物化学成分和重组药物蛋白研究中的应用

毛状根培养是由发根农杆菌转化植物建立起来的体系,具有激素自养、生长迅速、化学成分含量与原植物相当或高于原植物及生物合成能力相对稳定等优点,近年来已在多种植物中建立,并开始用于重组药物蛋白的合成,不但为植物化学成分的大规模生产开辟了新的途径,而且使那些在细菌、酵母菌和哺乳动物体内难以表达的药物蛋白的合成成为了可能。文章系统综述了近年来毛状根培养在植物化学成分和重组药物蛋白研究方面的进展和成果,以期为毛状根培养的深入研究与开发提供指导。

用于重组药物蛋白生产的人源化细胞系研究进展

哺乳动物细胞表达系统由于存在翻译后加工修饰(PTMs)机制,能够产生分子量大、结构复杂的蛋白,是重组药物蛋白生产的优选系统。虽然非人源化的哺乳动物细胞系的PTMs与人源化细胞类似,但仍能进行人源化细胞不存在的其他PTMs,表达药物蛋白存在免疫原性、改变药物代谢动力学等缺点。近年来,人源化的细胞系已经用于治疗重组药物蛋白的生产,此类细胞系的优点在于具备和人源细胞完全一致的PTMs,表达的蛋白活性高、疗效好。目前用于重组药物蛋白生产及临床前研究的人源细胞系主要有HEK293、HT-1080、PER.C6等。本文综述了人源化细胞用于重组药物蛋白的最新进展。

转基因植物生产重组药物蛋白的研究进展

转基因植物作为一种新型生物反应器,可以安全、经济、有效的生产各种重组蛋白,以此作为大规模的重组药物生产平台备受瞩目。但是表达量低、下游处理复杂、糖基化结构改变是植物反应器中经常遇到的困难,这些困难限制了植物表达重组药物蛋白的商业化发展。针对这些问题,人们分别采用不同的生物技术策略加以解决,对此做一简要综述。

基于种子生产植物源重组药物蛋白研究进展

种子作为植物重要储藏器官之一,为高效表达外源重组药物蛋白提供了理想的载体。与其他植物生产系统相比,植物种子反应器具有多方面的优势,如表达水平较高,重组蛋白活性稳定,易于储藏和运输以及便于加工、分离和纯化等。在过去的20年中,利用植物种子作为反应器表达了一系列重组药物蛋白,部分药物蛋白已进入商业化生产阶段。本文对种子生物反应器的特点及利用,就近年来基于种子生产植物源重组药物蛋白的研究进展进行了综述,并对植物种子生物反应器研究中的几个问题及未来的发展方向进行了探讨。

用于生产重组蛋白药物的抗凋亡CHO宿主细胞株的建立

哺乳动物工程细胞在大规模培养生产重组蛋白时很容易发生细胞凋亡 ,从而导致生产过程提前终止 ,造成生产成本高昂。细胞代谢产物氨已被证明可以促进细胞凋亡 ,而线粒体膜整合蛋白Bcl 2可以通过促进线粒体膜完整性而抑制细胞凋亡。本实验应用谷氨酰胺合成酶加压系统在CHO工程细胞中高效表达中国仓鼠Bcl 2蛋白 ,使细胞具有抗凋亡能力的同时 ,利用谷氨酸和氨合成谷氨酰胺而有效降低培养基中氨的含量 。

长效重组蛋白药物的研究进展

重组蛋白药物经静脉和皮下注射后通常半衰期较短,目前延长蛋白药物半衰期的方法主要基于三种原理:1、增大蛋白药物分子量;2、利用血浆药物平衡;3、减少免疫原性。针对构建突变体、PEG化修饰和与血清白蛋白融合三种延长重组蛋白药物半衰期的方法,及其已上市的和正在研发中的长效重组蛋白药物的特征、半衰期和免疫原性问题进行了综述。

酵母中表达基因工程重组蛋白药物的研究进展

本文主要从酵母载体系统的选择、酵母表达宿主的选择、多拷贝菌株的构建、高密度发酵培养酵母细胞、应用酵母系统表达外源基因的研究现状、酵母表达系统的缺陷及对策等几个方面综述了近年来酵母表达体系在基因工程重组蛋白药物开发方面的研究进展。

载体两性电解质等电聚焦电泳及其在重组蛋白药物研究中的应用

载体两性电解质等电聚焦电泳技术是蛋白质理化性质研究的核心技术之一。对其基本原理、材料和方法、以及技术特点等作了介绍。综述了等电聚焦技术在重组蛋白药物研究中的应用,并对其今后的发展方向作了展望。

基因重组蛋白质药物的研究进展(综述)

生物医药业是现代医药中发展最快的部分。近20年来以基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程为代表的现代生物技术发展迅猛,并日益影响和改变着人们的生产与生活方式。重组蛋白质药物是指利用DNA重组技术生产的蛋白质。一个重组蛋白质药物的诞生需要以下几部分工作,首先是鉴定具有药物作用活性的目的蛋白质,分离或合成编码该目的蛋白质的基因,然后将其插入合适的载体,转入宿主细胞(大肠杆菌等细菌、酵母或哺乳动物细胞),构建能高效表达目的蛋白质的菌种库或细胞库,最后扩大规模应用发酵罐或生物反应器进行发酵或细胞培养生产目的蛋白质药物。

重组蛋白药物的生产技术进展

重组蛋白药物是生物药物中的核心产品,主要是通过基因工程菌来生产功能蛋白或其突变体,用于弥补体内蛋白的缺失,从而对疾病的治疗发挥关键作用。近年来,重组蛋白药物在疾病治疗中发挥作用越来越大,相关技术也发展迅速。通过综述重组蛋白药物的中上游生产流程,并重点分析了重组蛋白药物在表达系统、细胞培养、纯化和质量控制等环节的最新技术进展,展示了重组蛋白药物制备的技术提升水平,以期为国内重组蛋白药物的生产提供一定的参考依据。

植物生物反应器在药物蛋白生产中的应用

以植物为生物反应器表达和生产药物蛋白是近十几年来基因工程研究的一大热点．植物药物蛋白的生产具有成本低、安全、有效等优点,但是植物药物蛋白生产中存在表达量低、下游加工处理困难、糖链结构改变等问题,严重限制了植物表达重组药物蛋白的产业化发展．综述了植物生产重组药物蛋白的优缺点,并对潜在的问题及应对策略进行了探讨．

重组蛋白药物的研究进展

近二十几年来蛋白质药物发展迅速。目前有近百种重组蛋白药物上市,几千种处于研发状态。欧美在蛋白质药物研究上整体实力强,在全球有较大的市场。我国重组蛋白药物的研发起步较晚,但发展较快。本文分析了国际和国内蛋白质药物的研发趋势,针对我国基因重组蛋白药物领域现状及存在的问题提出了相应的建议,对国内蛋白质药物研究具有一定的参考价值。

重组蛋白类药物蛋白含量测定方法探究

在生物技术药物质量控制进程中,对蛋白类药物实现精确定量始终是一项重要课题。本文从宏观的角度出发,将测定蛋白含量的方法分为标准定量、比色分析及紫外线吸收法,对以上三种方法实现精确定量的过程一一列举。希望与同行共同分享实践经验,实现对重组蛋白类药物蛋白含量的更精确测量,促进重组蛋白类药物完善进程。

皮下注射剂型治疗用重组蛋白类药物的药学专业审评思考

为了提高患者依从性,皮下注射剂型是治疗用重组蛋白类药物差异化开发的重要方向之一。近年来,其临床试验申请和上市申请数量显著增加。而皮下注射剂型产品因治疗用重组蛋白类药物本身的固有属性、高浓度制剂对产品质量和稳定性的潜在影响、以透明质酸酶为代表的特殊辅料的应用等因素,在制剂处方开发、辅料质量控制、制剂质量控制和稳定性研究等方面与静脉给药剂型的药学研究相比存在一些特殊考量。本文汇总了2020年以来皮下注射剂型治疗用重组蛋白类药物申报情况,对药学专业审评中的特殊考量展开讨论,并提出该类药物研发与生产过程中可能存在的挑战,以期通过研发生产机构和监管机构共同努力,强化技术交流,为患者提供安全有效、质量可控、使用便捷的新型治疗用重组蛋白类药物。

治疗性重组蛋白药物的异质性研究

在中国,治疗性重组蛋白药物已经经历了很多年。相关技术的进步和质量标准的提升在极大程度上确保了中国重组蛋白药物的安全性。因为重组蛋白药物自身存在结构不稳定性、生产工艺复杂。其基本特性为异质性。异质性来自工程菌/细胞表达、后续的储存、生产的过程,非常有可能针对产品有效性、安全性造成不良的影响。全球范围内,有很多国家的药典、技术指南都涵盖了和重组蛋白药物异质性分析有关的规定。现阶段,随着中国技术的发展以及进步,民众针对重组蛋白药物异质性分析水平也积极提升,想必对于相关药物的特性理解也会变得更为深入。基于此,本文分析治疗性重组蛋白药物的异质性研究情况,旨意为相关人员的研究工作提供参考资料。

重组蛋白药物纯化方法优化

近来,生物工程药物的发展十分迅速,可利用基因工程技术生产重组蛋白类药物,其中产品纯化是获得目的的产物关键一步,也是较为困难的一步,它标志着生物产业水平的高低。因此,本文对重组蛋白药物的纯化方法作一具体介绍。 1.重组蛋白药物纯化重要性 生物工程重组蛋白一般工艺流程如下;

我国重组蛋白药物产业化取得重大突破

西北大学现代分离科学研究所成立于1994年(前身为现代分离科学研究室,成立于1986年),1995年被批准为陕西省重点实验室,是我国第一个专门从事现代分离科学理论研究,特别是生物大分子分离和纯化的新理论、新技术、新材料和新工艺的专门研究机构.

一种表达于大肠杆菌体内的重组蛋白质药物下游纯化过程的研究

叙述了一种表达于大肠杆菌中的重组蛋白质药物的下游纯化工艺研究过程。新工艺采用离子交换层析联合疏水层析进行纯化,与传统的工艺相比,降低了生产成本,缩短了批生产时间,更有利于对该重组蛋白质药物进行大规模生产。

全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性

评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(p I 5.95±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH 2.5~5.0与pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦电压1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测。

长循环双靶向重组蛋白药物偶联体用于抗肿瘤治疗

药物的靶向性以及体内长效循环特性对于药物在病灶部位的累积和疗效发挥着至关重要的作用.本研究设计合成了长循环双靶向重组蛋白药物偶联体RPDC-L(long-circulated dualtargeted recombinant protein drug conjugate),用于抗肿瘤治疗.RPDC-L包含4个部分,分别是靶向人表皮生长因子受体2(HER2)的anti-HER2纳米抗体、整合素受体αvβ_(3)的多肽配体RGD、白蛋白结合域以及小分子化疗药物阿霉素.其中,anti-HER2纳米抗体和RGD多肽提供肿瘤靶向功能;白蛋白结合域通过结合血液中的白蛋白,赋予药物较长的体内循环时间;化疗药物阿霉素通过酸响应聚乙二醇-腙键连接子与重组蛋白偶联,在微酸性的肿瘤微环境中通过pH响应性释放,进行肿瘤杀伤.与非长循环双靶向重组蛋白相比,融合表达白蛋白结合单元后,长循环双靶向重组蛋白在小鼠体内的半衰期时间提升到了1.51倍.与抗肿瘤药物阿霉素偶联后,药物在肿瘤组织中的累积提升到了1.6倍.体内抗肿瘤试验表明,RPDC-L实现安全高效的抗肿瘤效果,肿瘤抑制率达到78.4%,是非长循环双靶向重组蛋白药物偶联体的1.50倍.