目的克隆Ⅱfi m A型牙龈卟啉单胞菌菌毛fi m A基因并使其在结肠埃希菌中正确表达。方法利用聚合酶链反应技术克隆Ⅱ型fi m A基因,经酶切和测序验证后构建原核表达质粒p ET-Fim A,使其在结肠埃希菌中表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶...目的克隆Ⅱfi m A型牙龈卟啉单胞菌菌毛fi m A基因并使其在结肠埃希菌中正确表达。方法利用聚合酶链反应技术克隆Ⅱ型fi m A基因,经酶切和测序验证后构建原核表达质粒p ET-Fim A,使其在结肠埃希菌中表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定表达产物。结果克隆基因测序结果与Gene Bank数据库中的序列呈现95%同源性,成功构建fi m A基因原核表达载体p ET-Fim A。结论高效表达出Ⅱfi m A型重组菌毛蛋白,并获得较高纯度,且具有免疫原性和免疫反应性。展开更多
文摘目的克隆Ⅱfi m A型牙龈卟啉单胞菌菌毛fi m A基因并使其在结肠埃希菌中正确表达。方法利用聚合酶链反应技术克隆Ⅱ型fi m A基因,经酶切和测序验证后构建原核表达质粒p ET-Fim A,使其在结肠埃希菌中表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定表达产物。结果克隆基因测序结果与Gene Bank数据库中的序列呈现95%同源性,成功构建fi m A基因原核表达载体p ET-Fim A。结论高效表达出Ⅱfi m A型重组菌毛蛋白,并获得较高纯度,且具有免疫原性和免疫反应性。
文摘目的研究重组幽门螺杆菌菌毛蛋白Fla A Ig Y-硫糖铝乙基纤维素微囊对幽门螺杆旋菌（Helicobacter pylori）感染小鼠的治疗和清除效果。方法采用有机溶剂蒸发技术制备经硫糖铝处理后的Ig Y乙基纤维素微囊。模拟胃部环境,检测在不同p H的正常胃蛋白酶浓度（0.02 mg·m L-1）和异常胃蛋白酶浓度（0.04 mg·m L-1）的条件下不同浓度硫糖铝对r Fla A Ig Y的保护效果。将r Fla A Ig Y-硫糖铝微囊按0.8、1.6、3.2及6.4 mg·g-1·d-14种不同剂量灌服实验组小鼠,通过检测治疗前后血清中抗幽门螺杆旋菌抗体水平以及胃黏膜的尿素酶水平,评价不同浓度r Fla A Ig Y对小鼠胃部幽门螺杆旋菌的治疗和清除效果。结果结果表明,40%的硫糖铝处理过的Ig Y在p H 3.0条件下的模拟胃液中能维持77.87%~82.14%的活性达8 h,而在p H 2.0的模拟胃液条件中处理8 h能保持57.76%~63.28%,在p H 1.0模拟胃液中处理8 h能保持21.52%~22.79%。制备的r Fla A Ig Y-硫糖铝乙基纤维素微囊的包封率为83.79%,5 h体外释放率为95.92%。各组小鼠经r Fla A Ig Y微囊治疗后血清中幽门螺杆旋菌抗体水平与阳性对照组相比均显著下降（P〈0.001）。当使用剂量为0.8 mg·g-1·d-1时,对幽门螺杆旋菌的清除率为50%,当剂量为1.6 mg·g-1·d-1时,幽门螺杆旋菌清除率为70%,当剂量为3.2 mg·g-1·d-1时,H.pylori清除率为80%,当剂量达到6.4 mg·g-1·d-1时,H.pylori的清除率可达100%。结论 40%的硫糖铝对r Fla A Ig Y具有很好的保护作用,可以作为r Fla A Ig Y的保护剂。r Fla A Ig Y-硫糖铝乙基纤维素微囊具有良好的缓释效果,经口服对小鼠胃部幽门螺杆旋菌感染具有良好的治疗和清除效果。
