rhVEGF_(165)在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达、纯化及其生物学活性

利用哺乳动物细胞表达系统,稳定表达和纯化高生物学活性的人重组血管内皮生长因子(VEGF165)蛋白。将VEGF165克隆于表达载体pCDNA4.0,与T-GS载体共同转染CHO-S(中国仓鼠卵巢细胞)细胞,MSX(Methionine sulphoximine)加压筛选高表达细胞株,5 L发酵罐培养,细胞培养上清液通过三步纯化得到rhVEGF165蛋白,通过Western blotting、Biacore和人脐静脉内皮细胞增殖实验等对表达蛋白的特异性、亲和力及生物学活性等进行检测。所建立的细胞株其rhVEGF165蛋白表达量约50 mg/L,纯化后纯度达到90%以上,细胞活性EC50为1.94 ng/mL。成功筛选到高表达rhVEGF165的CHO细胞株,纯化得到高活性、高亲和力的rhVEGF165蛋白。