治疗性重组蛋白药物的异质性研究

在中国,治疗性重组蛋白药物已经经历了很多年。相关技术的进步和质量标准的提升在极大程度上确保了中国重组蛋白药物的安全性。因为重组蛋白药物自身存在结构不稳定性、生产工艺复杂。其基本特性为异质性。异质性来自工程菌/细胞表达、后续的储存、生产的过程,非常有可能针对产品有效性、安全性造成不良的影响。全球范围内,有很多国家的药典、技术指南都涵盖了和重组蛋白药物异质性分析有关的规定。现阶段,随着中国技术的发展以及进步,民众针对重组蛋白药物异质性分析水平也积极提升,想必对于相关药物的特性理解也会变得更为深入。基于此,本文分析治疗性重组蛋白药物的异质性研究情况,旨意为相关人员的研究工作提供参考资料。

用于生产重组蛋白药物的抗凋亡CHO宿主细胞株的建立

哺乳动物工程细胞在大规模培养生产重组蛋白时很容易发生细胞凋亡 ,从而导致生产过程提前终止 ,造成生产成本高昂。细胞代谢产物氨已被证明可以促进细胞凋亡 ,而线粒体膜整合蛋白Bcl 2可以通过促进线粒体膜完整性而抑制细胞凋亡。本实验应用谷氨酰胺合成酶加压系统在CHO工程细胞中高效表达中国仓鼠Bcl 2蛋白 ,使细胞具有抗凋亡能力的同时 ,利用谷氨酸和氨合成谷氨酰胺而有效降低培养基中氨的含量 。

长效重组蛋白药物的研究进展

重组蛋白药物经静脉和皮下注射后通常半衰期较短,目前延长蛋白药物半衰期的方法主要基于三种原理:1、增大蛋白药物分子量;2、利用血浆药物平衡;3、减少免疫原性。针对构建突变体、PEG化修饰和与血清白蛋白融合三种延长重组蛋白药物半衰期的方法,及其已上市的和正在研发中的长效重组蛋白药物的特征、半衰期和免疫原性问题进行了综述。

酵母中表达基因工程重组蛋白药物的研究进展

本文主要从酵母载体系统的选择、酵母表达宿主的选择、多拷贝菌株的构建、高密度发酵培养酵母细胞、应用酵母系统表达外源基因的研究现状、酵母表达系统的缺陷及对策等几个方面综述了近年来酵母表达体系在基因工程重组蛋白药物开发方面的研究进展。

载体两性电解质等电聚焦电泳及其在重组蛋白药物研究中的应用

载体两性电解质等电聚焦电泳技术是蛋白质理化性质研究的核心技术之一。对其基本原理、材料和方法、以及技术特点等作了介绍。综述了等电聚焦技术在重组蛋白药物研究中的应用,并对其今后的发展方向作了展望。

重组蛋白药物的生产技术进展

重组蛋白药物是生物药物中的核心产品,主要是通过基因工程菌来生产功能蛋白或其突变体,用于弥补体内蛋白的缺失,从而对疾病的治疗发挥关键作用。近年来,重组蛋白药物在疾病治疗中发挥作用越来越大,相关技术也发展迅速。通过综述重组蛋白药物的中上游生产流程,并重点分析了重组蛋白药物在表达系统、细胞培养、纯化和质量控制等环节的最新技术进展,展示了重组蛋白药物制备的技术提升水平,以期为国内重组蛋白药物的生产提供一定的参考依据。

重组蛋白药物的研究进展

近二十几年来蛋白质药物发展迅速。目前有近百种重组蛋白药物上市,几千种处于研发状态。欧美在蛋白质药物研究上整体实力强,在全球有较大的市场。我国重组蛋白药物的研发起步较晚,但发展较快。本文分析了国际和国内蛋白质药物的研发趋势,针对我国基因重组蛋白药物领域现状及存在的问题提出了相应的建议,对国内蛋白质药物研究具有一定的参考价值。

重组蛋白药物纯化方法优化

近来,生物工程药物的发展十分迅速,可利用基因工程技术生产重组蛋白类药物,其中产品纯化是获得目的的产物关键一步,也是较为困难的一步,它标志着生物产业水平的高低。因此,本文对重组蛋白药物的纯化方法作一具体介绍。 1.重组蛋白药物纯化重要性 生物工程重组蛋白一般工艺流程如下;

我国重组蛋白药物产业化取得重大突破

西北大学现代分离科学研究所成立于1994年(前身为现代分离科学研究室,成立于1986年),1995年被批准为陕西省重点实验室,是我国第一个专门从事现代分离科学理论研究,特别是生物大分子分离和纯化的新理论、新技术、新材料和新工艺的专门研究机构.

聚乙二醇化重组蛋白药物生产质量控制的一般考量

聚乙二醇化重组蛋白药物是由聚乙二醇(PEG)对重组蛋白药物修饰而成,在保留原型重组蛋白生物学活性前提下,克服原型蛋白体内代谢快、稳定性差、需多次给药等缺点,但也存在一定的特殊性,在对其质量控制的相关指导原则有限的情况下,通过对其生产用原材料控制、生产过程中工艺控制、中间产品及终产品的质量控制、稳定性研究等方面进行探讨,为其研究开发和生产质量控制提供一定参考。

用于重组蛋白药物生产的CHO细胞基因改造技术研究进展

细胞系的选择和优化是生物制品制造环节中非常关键的一步。其中CHO细胞是最常用的宿主细胞。CHO细胞源于中国仓鼠卵巢细胞,具有许多优势,如易于培养、具有较高的蛋白表达能力以及良好的糖基化修饰等。这些特点使得CHO细胞成为重组蛋白药物生产的理想候选。尽管CHO细胞已经实现在商业产生产重组蛋白类药物的广泛应用,但仍存在代谢途径难以调控、细胞株表达水平不稳定、表达蛋白的质量控制困难等问题。因此,科研人员不断致力于利用基因工程技术对CHO细胞进行改造,提高目的基因表达效率,进而优化重组蛋白生产工艺。本文对利用细胞工程技术改造CHO细胞用于重组蛋白药物生产进行了系统的研究,详细阐述了细胞工程技术在CHO细胞改造中的原理和方法,最后对未来潜在的发展方向进行了预测和展望。

重组蛋白药物游离巯基荧光法检测方法探索、优化及验证

目的:建立一种基于荧光法测定重组蛋白药物中微量游离巯基的检测方法。方法:采用基于荧光法巯基检测试剂盒进行游离巯基检测,首先对蛋白变性条件进行摸索优化,确定了变性剂种类及变性条件,并采用重组蛋白药物进行了方法验证,结果均符合验证标准。但在采用该方法对我公司PEG-GCSF和KGF产品(分子序列中理论均含有1 mol巯基/mol蛋白)进行检测时,发现游离巯基检测值均显著低于理论值,检测值最高仅为理论值的29%,可能与蛋白分子内部包埋的游离巯基未充分暴露有关。因此,本研究在已有分析方法的基础上采用蛋白酶酶解的方式,充分暴露蛋白分子中的游离巯基,并对样品的酶切条件及其他关键参数进行了优化,对优化后的分析方法进行了方法学验证。结果:通过筛选,确定了最佳变性条件:终浓度为8 mol·L^(-1)尿素37℃孵育30 min。针对已知理论游离巯基含量的重组蛋白1(PEG-GCSF)和重组蛋白2(KGF)产品游离巯基检测值明显低于理论值的问题,采用蛋白酶切方式,酶切条件为蛋白酶K酶切(目的蛋白):蛋白酶K(20∶1,w:w),37℃孵育1 hr,酶解后检测巯基实测值与理论值一致。经验证该方法实测结果RSD均<15%;各浓度的加标回收率均在80%~120%范围内;在1~15μmol·L^(-1)游离巯基范围内线性良好-1定量限(LOQ)为1μmol·L^(-1),各项验证指标均符合验证标准,满足检测需求。结论:本研究采用蛋白酶酶切的方式进行样品前处理,充分暴露重组蛋白药物分子内包埋的游离巯基,解决了复杂重组蛋白药物产品中游离巯基无法准确定量的难题,为该类蛋白分子中微量游离巯基的定量测定和表征研究提供了方法和参考。

重组药物相关蛋白质量分析专栏——重组蛋白药物制品相关蛋白的分析与评价

我国的重组蛋白药物产业经过20多年的发展，建立了一套比较完备的质量控制体系，但是与国外发达国家相比，还存在一定的差距。随着技术的更新和进步，我国重组蛋白药物的质量控制技术也有待加强。2017年，国家药典委员会立项标准提高课题，主要针对重组细胞因子的制品相关蛋白展开研究。作为课题的一部分，本文对制品相关蛋白的分析与评价进行了介绍，内容包括制品相关蛋白的概念、国内外对制品相关蛋白的技术法规要求、制品相关蛋白的产生及其对产品质量的影响、制品相关蛋白的分析方法等。

人源重组蛋白药物安全性评价的主要问题

人源重组蛋白类新药物因与小分子化药在生产方式、分子构成和药理作用等多方面的差异,在其临床前安全性评价研究过程中出现了一些新的问题,如相关动物种属的选择、剂量设置、试验过程中受试物免疫原性的干扰以及恰当的毒理学检测方法等。笔者综合该类新药在国内外的安全性评价研究进展和在实际工作中遇到的难点和解决方法,如重组人干扰素的相关动物选择、重组人胰岛素的剂量设定、重组人白介素1受体阻滞剂的免疫复合物检测等,对上述问题进行了初步探讨。

重组蛋白药物方兴未艾 中国疫苗研究捷报频传

重组蛋白类药物是基因工程药物中研究最早，上市最先、应用也最多的一大类药物，疗效显著，毒副反应小，已经在冶疗疑难疾病中发挥了重要作用，产生了很大的社会效益和经济效益。因此，各国科学家对重组蛋白类药物的研究均十分重视，我国科学家也不例外。从上世纪80年代初开始到上世纪末，我国以仿制和重复研制为主，已有20多个重组蛋白类药物上市。进入本世纪以来．开始走自主创新的路，取得了可喜的成绩，

重组蛋白多肽药物的临床药代动力学

扼要介绍重组蛋白多肽类药物的临床药代动力学研究的内容、方法和特点。综述了重组内皮抑制素、重组糖基化血小板生成素、改构肿瘤坏死因子、重组糖基化尿激酶原、人源化单抗trastuzumab和重组人肿瘤坏死因子受体临床药代动力学研究的方法学。

毛状根培养在植物化学成分和重组药物蛋白研究中的应用

毛状根培养是由发根农杆菌转化植物建立起来的体系,具有激素自养、生长迅速、化学成分含量与原植物相当或高于原植物及生物合成能力相对稳定等优点,近年来已在多种植物中建立,并开始用于重组药物蛋白的合成,不但为植物化学成分的大规模生产开辟了新的途径,而且使那些在细菌、酵母菌和哺乳动物体内难以表达的药物蛋白的合成成为了可能。文章系统综述了近年来毛状根培养在植物化学成分和重组药物蛋白研究方面的进展和成果,以期为毛状根培养的深入研究与开发提供指导。

基因重组蛋白质药物的研究进展(综述)

生物医药业是现代医药中发展最快的部分。近20年来以基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程为代表的现代生物技术发展迅猛,并日益影响和改变着人们的生产与生活方式。重组蛋白质药物是指利用DNA重组技术生产的蛋白质。一个重组蛋白质药物的诞生需要以下几部分工作,首先是鉴定具有药物作用活性的目的蛋白质,分离或合成编码该目的蛋白质的基因,然后将其插入合适的载体,转入宿主细胞(大肠杆菌等细菌、酵母或哺乳动物细胞),构建能高效表达目的蛋白质的菌种库或细胞库,最后扩大规模应用发酵罐或生物反应器进行发酵或细胞培养生产目的蛋白质药物。

长效重组蛋白药物发展动态

部分重组蛋白药物存在半衰期短的缺陷,临床给药频率高,且大多为注射给药,严重影响患者使用依从性。长效重组蛋白药物是近年来生物技术药物发展的重要趋势之一。对蛋白分子进行改造或修饰,延长重组蛋白药物的半衰期,实现长效以减少给药频率主要通过4种方式:化学修饰、构建突变体、蛋白融合、糖基化修饰。针对上述4种长效化方式及已上市相关产品进行了综述。展望未来,紧跟国外先进技术和质量标准发展,进一步提高国产长效重组蛋白药物质量水平,推进国内相关产品标准升级,推动创新长效重组蛋白药物开发及专利布局是未来几年国内该领域的发展方向。

用于重组药物蛋白生产的人源化细胞系研究进展

哺乳动物细胞表达系统由于存在翻译后加工修饰(PTMs)机制,能够产生分子量大、结构复杂的蛋白,是重组药物蛋白生产的优选系统。虽然非人源化的哺乳动物细胞系的PTMs与人源化细胞类似,但仍能进行人源化细胞不存在的其他PTMs,表达药物蛋白存在免疫原性、改变药物代谢动力学等缺点。近年来,人源化的细胞系已经用于治疗重组药物蛋白的生产,此类细胞系的优点在于具备和人源细胞完全一致的PTMs,表达的蛋白活性高、疗效好。目前用于重组药物蛋白生产及临床前研究的人源细胞系主要有HEK293、HT-1080、PER.C6等。本文综述了人源化细胞用于重组药物蛋白的最新进展。