重组蛹虫草超氧化物歧化酶对氧化压力下E.coli细胞的保护作用

为考察外源蛹虫草超氧化物歧化酶（cm-SOD）基因或蛋白对强氧化剂环境中E．coli的保护作用，分别在含强氧化剂和不含强氧化剂的培养基中培养重组蛹虫草超氧化物歧化酶菌株和对照菌株并诱导表达，测定菌体的生长速率及菌体内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和活性氧（ROS）的变化。结果表明重组菌株对百草枯引起的生长抑制作用具有抗性，当百草枯的浓度在（0．02～1．5）mmol／L范围内，重组菌株的生长速率明显高于对照菌株；重组菌株的SOD酶活力明显高于同一环境中的对照菌株，CAT酶活力略高于对照菌株，而细胞内ROS含量明显低于对照菌株。说明外源cm—SOD基因在E．coli中的高效表达提高了菌体抵抗自由基引起的损伤的能力。

蛹虫草菌丝体超氧化物歧化酶的制备

目的 从蛹虫草（Cordyceps militaris）菌丝体中制备Cu，Zn-超氧化物歧化酶。方法 超声破碎、硫酸铵沉淀、离子交换。结果 10g湿菌丝体，最佳超声破碎功率400W，超声时间15min。粗酶液经55％-95％硫酸铵沉淀，DEAE-FF阴离子交换柱，CM-52阳离子交换柱纯化，酶蛋白收率22．4％，比活达到13592．1U·mg（蛋白）^-1，纯化倍数214．1倍。SDS-PAGE电泳分析呈现均一条带。紫外最大吸收峰为266nm。该酶对KCN和H2O2敏感。氨基酸组成和其他来源Cu，Zn-SOD相似。结论 本制备工艺切实可行，能获得理想的电泳纯蛋白。

蛹虫草超氧化物歧化酶理化性质的研究

超氧化物歧化酶[Superoxide dismutase，SOD，（EC．1．15．1．1）]是广泛存在于生物体内的超氧阴离子自由基（·O2-）的天然清除剂，在机体保护方面起重要作用。在对SOD进行的一系列研究中，发现SOD的存在与生物体抗衰老、抗肿瘤、营养状况、免疫性疾病、炎症及辐射防护有关。许多动植物及微生物体中含有丰富的SOD，可以从中提取作为药物或化妆品、饮品的添加剂。经研究发现人工栽培的蛹虫草SOD活性较高，为此，对分离纯化后的蛹虫草SOD的部分理化性质进行了研究，为保健饮品及保健药品的开发研制提供一定实验依据。

葡萄糖和Cu^(2+)对蛹虫草Cu，Zn超氧化物歧化酶在E．coli中表达的影响

对含有蛹虫草Cu,Zn-超氧化物歧化酶(cm-SOD)基因的重组E．coli培养条件进行了初步优化。结果表明,LB培养基国含有Cu^(2+)可明显提高超氧化物歧化酶比活力；而在菌体培养中补加葡萄糖,可提高重组蛋白表达量和细胞生物量。在含有0．6mmol/L Cu^(2+)、Zn^(2+)的LB培养基中补加22mmol/L葡萄糖,每200ml培养液可获得lg湿细胞,超氧化物歧化酶比活力达到3305u/mg。

蛹虫草子实体的人工培育及超氧化物歧化酶的活性测定

笔者在人工控制环境条件下,使接种在不同培养基上的蛹虫草菌长出了与野生蛹虫草一样的子实体,并测定了子实体及培养基-菌丝体混合物中超氧化物歧化酶(SOD)的活性。

重组蛹虫草超氧化物岐化酶脱辅基蛋白的表达、纯化及其活性重建

目的表达并纯化重组蛹虫草超氧化物歧化酶脱辅基蛋白,并考查各种金属离子对其活性重建的作用。方法用不含Cu2+和Zn2+的培养基培养重组菌株,并表达重组蛋白,采用DEAE-FF和CM-52进行纯化;在脱辅基蛋白溶液中加入Cu2+、Mn2+、Mg2+、Ni2+或Ag+,测定SOD酶活力的变化。结果蛹虫草脱辅基Cu,Zn-SOD在不含Cu2+和Zn2+的培养基中得到表达,纯化后的样品经SDS-PAGE分析,在相对分子质量17000处出现单一条带,经活性电泳分析无酶活力;脱辅基蛋白活性重建的最适宜Cu2+浓度为0.005mmol/L,但其紫外吸收图谱与天然SOD不同;0.1mmol/L的Mn2+、Mg2+、Ni2+、Ag+重建的酶活力远低于Cu2+重建的cm-SOD的酶活力。结论已成功表达并纯化了蛹虫草脱辅基Cu,Zn-SOD,各种金属离子只能有限地重建脱辅基Cu,Zn-SOD的活性。

Cu^(2+)、Zn^(2+)胁迫对蛹虫草(Cordyceps militaris)抗氧化酶活性及脂氧化水平的影响

研究了Cu2+、Zn2+对蛹虫草菌丝体抗氧化酶活性及脂氧化水平的影响。结果表明:高浓度的Cu2+抑制菌丝体的生长和细胞内抗氧化酶的活性;高浓度的Zn2+对菌丝体的生长也有抑制作用但抗氧化酶的活性变化不大。脂氧化水平随细胞内过氧化状态的变化而变化。蛹虫草菌丝体对Cu2+、Zn2+有较高的耐受度。

蛹虫草对紫外诱导果蝇氧化损伤的保护作用

为了探讨蛹虫草对紫外辐射所致氧化损伤果蝇的保护作用,以不同质量分数的蛹虫草培养基饲养经不同时间紫外辐射的果蝇,观察统计其体内的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果表明:蛹虫草粉质量分数为0.4%的培养基能极显著提高紫外辐射20 min雄果蝇的SOD活性(13.09%,P=0.005 9<0.01)并极显著降低MDA含量(17.11%,P=0.003 2<0.01);蛹虫草粉质量分数为0.2%的培养基能极显著提高紫外辐射40 min雄果蝇的SOD活性(8.99%,P=0.006 6<0.01)并极显著降低MDA含量(9.06%,P=0.006 1<0.01);蛹虫草对雄性果蝇的抗氧化保护作用优于对雌性的。由此可见,适宜质量分数的蛹虫草粉能够修复紫外辐射对果蝇造成的损伤,对机体起到抗氧化保护作用。

蛹虫草提取物对H22小鼠抗氧化能力的影响

目的探讨蛹虫草提取物抗肿瘤作用的特点。方法采用化学比色法分别测定蛹虫草提取物对H22荷瘤小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT),丙二醛的影响(MDA),对肝脏中SOD,GSH-Px的影响。结果蛹虫草提取物可使小鼠血清中SOD,GSH-Px,CAT,肝脏中SOD,GSH-Px水平明显升高;使血清中MDA水平降低。结论蛹虫草提取物通过调整荷瘤动物的抗氧化能力而达到抗肿瘤作用的目的。

蛹虫草多糖对衰老小鼠抗氧化水平及小鼠H22瘤组织Bcl-2、Bax mRNA表达的影响

目的:蛹虫草多糖(CMPS)对D-半乳糖所致衰老模型小鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平及移植型小鼠腹水型肝癌(H22)瘤组织B-淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B-淋巴细胞瘤-2相关X(Bax) mRNA表达的影响。方法:75只小鼠随机均分为对照组、模型组及CMPS高、中、低剂量组;模型组及3个CMPS组小鼠每日给予0. 3 g/kg D-半乳糖溶液颈部皮下注射建立衰老模型,同时模型组每日给予0. 033 g/kg肌肉注射生理盐水,CMPS高、中及低剂量组分别给予100、50及25 mg/kg CMPS大腿外侧肌肉注射,对照组分别在颈部及大腿外侧肌肉注射等量生理盐水,每日注射前记录小鼠行动、进食、饮水、生长、发育、毛色等情况;连续注射6周后检测小鼠肝脏组织SOD、CAT活性及MDA含量;另取30只腋下移植瘤小鼠,均分为模型组、CMPS中、低剂量组,CMPS中、低剂量组小鼠分别注射50、25 mg/kg CMPS(1次/d),模型组给予等量生理盐水处理,连续10 d;第10天时,取瘤组织采用RT-PCR方法检测H22瘤组织中Bcl-2及Bax mRNA表达水平。结果:观察可见,衰老模型小鼠活动减少,精神萎靡,倦怠嗜睡,行动迟缓,形体瘦弱,体力较弱,皮毛松散,毛色枯槁缺乏光泽,皮肤弹性差,进食明显减少等衰老体征; CMPS组小鼠活动量较模型组增加,活力更强,生长发育状况与精神状况较好,皮毛滑顺有光泽;注射6周后,模型组小鼠肝脏组织SOD、CAT活性较对照组显著下降,MDA含量较对照组显著升高(P <0. 05); 3个CMPS剂量组小鼠肝组织SOD、CAT活性较模型组升高,MDA含量较模型组降低(P <0. 05),与模型组比较,CMPS两个剂量组H22瘤组织Bcl-2 mRNA表达水平显著降低,BaxmRNA的表达水平显著升高(P <0. 05);与CMPS低剂量组比较,CMPS中剂量组变化更明显(P <0. 05)。结论:CMPS可有效减轻D-半乳糖所致衰老小鼠的肝组织损伤,其机制可能与CMPS抗氧化损伤,提高氧自由基清除能力有关; CMPS可能通过氧化应激抑制及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的mRNA表达水平参与H22荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡过程。

柞蚕蛹虫草对老龄大鼠LPO含量和SOD、GSH-Px活性的影响

目的 探讨柞蚕蛹虫草对老龄雄性 Wistar大鼠 LPO含量和 SOD、GSH- Px活性的影响。方法 经口给药 1 4 d后 ,用 NBA法测定红细胞中的 SOD活性 ;DTNB法测定全血中 GSH- Px活性 ;TBA法测定肝脏中 LPO含量。结果 柞蚕蛹虫草对 SOD活性的影响除 1 2 .5mg/ kg体重剂量组与对照组比较差异显著 (P <0 .0 5)外 ,其余 2个剂量组与对照组比较均有极显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,柞蚕蛹虫草对 GSH- PX的活性和 LPO含量的影响除 50 .0 mg/ kg体重剂量组与对照组比较均有极显著性差异 (P<0 .0 1 )外 ,其余 2个剂量组与对照组比较差异显著 (P<0 .0 5)。结论 柞蚕蛹虫草具有提高老龄大鼠 SOD,GSH- Px活性和明显降低

富硒蛹虫草主要化学成分测定及其对运动小鼠的抗疲劳作用研究

目的:探讨富硒蛹虫草主要化学成分和抗疲劳能力,为富硒蛹虫草作为抗疲劳功能性食品和药品提供理论依据。方法:菌丝体成分测定:在培养基中添加一定量的硒通过液体发酵法获得富硒蛹虫草菌丝体,经粉碎后测定菌丝体多糖、有机硒含量和超氧化物歧化酶活性。抗疲劳能力测定:50只健康昆明小鼠随机分为纯空白组、空白对照组和低、中、高剂量组5个实验组。每天以不同剂量的富硒蛹虫草菌丝体灌胃小鼠,共14 d。分别测定小鼠负重游泳力竭时间和小鼠安静时、运动后即刻及运动休息后三个阶段的血乳酸和血尿素氮含量。结果:富硒蛹虫草菌丝体胞内多糖含量和SOD酶活力分别比正常菌丝体提高13.7%和60.9%,富硒蛹虫草菌丝体有机硒含量是空白菌丝体的3.11倍。喂饲187.5 mg/kg bw剂量富硒蛹虫草的小鼠负重游泳力竭时间显著延长,比空白组提高3.18倍。187.5 mg/kg bw富硒蛹虫草的实验剂量可以延缓和减少运动时小鼠体内乳酸的产生,加快运动后小鼠体内的乳酸清除。结论:富硒蛹虫草可以缓解小鼠运动性疲劳的产生,具有抗疲劳作用。

蛹虫草工厂化袋栽技术要点

蛹虫草（Cororceps rnitaris L Link）又称北虫草、北冬虫夏草,为子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草属真菌,与冬虫夏草（Cordyceps sinensis）同属异种,其药用价值与冬虫夏草相似,是我国一种名贵药用滋补真菌,含有氨基酸、蛋白质、虫草酸、虫草素、虫草多糖、超氧化物歧化酶、麦角甾醇、矿物质和维生素等多种有效成分,具有抑菌消炎、镇静安神、抗肿瘤、抗衰老、降血压和增强机体免疫力等功效。

蛹虫草高产栽培技术

蛹虫草又称北冬虫夏草．子座单生或丛生，颜色为橘黄或橘红色，全长2～8cm，是一种具有药用、滋补功能的珍贵中药材．其药用价值与冬虫夏草相似。北冬虫夏草除了富含蛋白质、氨基酸、维生素等营养物质及钙、铁、锰、锌、硒等微量元素外，还含有虫草酸、虫草素、虫草多糖和超氧化物歧化酶等生物活性物质，与人参、鹿茸齐名为为中国传统的三大补品，广泛用于保健食品、保健膳食和其它滋补类食品。

蛹虫草高产栽培技术

蛹虫草又名北虫草，为子囊菌亚门麦角菌目、麦角菌科真菌，迄今已检测或分离到的生理活性物质有虫草素、虫草酸、蛹虫草多糖和超氧化物歧化酶等，药效类似冬虫夏草，具镇静、消炎、止血化痰、补精髓、抗肿瘤、抗缺氧等功效，对肾炎、肝炎、肿瘤、哮喘、神经衰弱等疾病有明显的治疗效果。如今野生冬虫夏草资源被过度开发，数量锐减，价格暴涨，因此作为冬虫夏草的理想替代品的蛹虫草，近年来越来越受到人们的青睐，其种植量也不断增加。下面将近年来的种植经验总结如下。

重组蛋白对工程菌的保护作用

为考察重组蛋白对强氧化剂环境中工程菌的保护作用,分别在含百草枯及维生素K3(VitK3)的强氧化剂和不含强氧化剂的培养基中培养重组蛹虫草超氧化物歧化酶菌株和对照菌株并诱导表达,测定菌体密度(A600)及菌体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的酶活变化。结果表明:重组菌株对百草枯和VitK3引起的生长抑制作用具有抗性,百草枯和VitK3对重组蛋白的表达没有影响,重组菌株的A600、SOD酶活力明显高于对照菌株,CAT酶活力略高于对照菌株。说明外源基因在E.coli中的高效表达提高了菌体抵抗自由基引起的损伤的能力。