TGF-β_1及其Ⅱ型受体在原发性肝癌中表达的研究

目的 探讨原发性肝癌中转化生长因子β1 (TGF β1 )与其Ⅱ型受体的表达及其价值。方法 采用免疫组化技术对50例原发性肝癌、50例癌旁组织、20 例正常肝组织TGF β1 及其Ⅱ型受体表达进行检测,结合临床资料进行分析。结果 TGF β1 在癌旁组织的表达要高于癌组织,TGF β1RⅡ在肝癌组织的表达明显低于正常组织;TGF β1 在有转移的肝癌组织中的表达明显增高(P<0.01),而TGF β1RⅡ的表达在分化高、肿瘤小、转移少、复发间隔时间长的肝癌组织均较高(P<0.05)。结论 TGF β1 在原发性肝癌中表达异常增高,其高表达有利于肿瘤细胞的浸润转移;TGF β1RⅡ在肝癌组织表达降低,导致肝癌细胞负性调控障碍,这可能是肝细胞癌变的重要因素之一;TGF β1RⅡ的表达与肝癌的恶性进展成负相关,有潜在的治疗肝癌意义。

猪TGF-βⅡ型受体胞外域的表达及生物活性验证

转化生长因子β1Ⅱ型受体(TGFⅡR)是TGF-β家族的主要受体。现有研究发现,TGF-β1在家畜繁殖活动中起着负调控作用,因此我们提出通过重组TGFⅡR胞外域蛋白质竞争性结合体内TGF-β1以改善家畜繁殖性能的新思路。首先,对猪TGFⅡR胞外域蛋白质编码序列进行密码子优化并进行人工合成,将合成的基因片段插入原核表达载体pET-32a(+)中。然后,将重组表达载体转入BL21(DE3)表达菌株中,并筛选合适的乳糖诱导浓度、诱导时间,以获得最高表达效率。再然后,对重组蛋白质进行纯化、复性及质谱鉴定。最后,通过体外细胞试验对重组蛋白质的生物活性进行测定。结果表明,在培养温度为37℃、培养时间为8 h、乳糖诱导质量浓度为2.0 g/L的条件下,可以诱导重组蛋白质的高表达,用8 mol/L尿素对包涵体蛋白质进行溶解,再以生理盐水为透析液透析24 h后,可以获得纯度达80%以上的重组猪TGFⅡR胞外域蛋白,用该重组蛋白质处理猪颗粒细胞后,可显著抑制TGF-β1诱导的信号分子Smad3的磷酸化水平。可以看出,本研究中表达的重组猪TGFⅡR胞外域蛋白质具有较好的生物活性。研究结果可为进一步研究和开发有利于提高猪繁殖效率的产品奠定工作基础。

胆管癌组织Smad4和转化生长因子β_1及Ⅱ型受体的表达及意义

目的探讨Smad4和转化生长因子β1(TGFβ1)及Ⅱ型受体(TGFβRⅡ)在胆管癌组织中的表达及与胆管癌生物学行为及预后的关系。方法应用免疫组织化学SP及SABC法检测47例胆管癌及癌旁正常胆管组织中的Smad4和TGFβ1、TβRⅡ的表达,并分析比较与胆管癌患者的临床分期、病理分级等的关系。结果47例胆管癌组织中TGFβ1阳性表达36例(76.6%),较癌旁正常胆管组织高,而Smad4和TGFβRⅡ表达减低,分别为14(29.8%)、28(59.6%)例(P<0.05)。TGFβ1表达与胆管癌临床分期及淋巴结转移和肝转移相关(均P<0.05),与组织学分级无关(P>0.05);TGFβRⅡ表达与胆管癌临床分期相关(P<0.05),与组织学分级及淋巴结转移和肝转移无关(均P>0.05);Smad4表达与胆管癌组织学分级、临床分期及是否淋巴结和肝转移相关(均P<0.05)。结论Smad4、TGFβRⅡ和TGFβ1的表达与胆管癌组织学分级、临床分期及是否淋巴结转移、肝转移有一定的相关性。联合检测三者有助于判断胆管癌的恶性程度和预后。

转化生长因子β_1Ⅱ型受体CA重复序列基因在人正常皮肤和瘢痕疙瘩中的表达

瘢痕疙瘩的生物学特性类似于肿瘤。最近研究表明，转化生长因子β1Ⅱ型受体（transforming growth factor—β1 receptor Ⅱ，TβRⅡ）是一种新的抑癌基因，而肿瘤细胞中最常见的是该基因表达异常。本研究主要是通过改变TβRⅡ基因突变的热点CA重复序列，以检测瘢痕疙瘩成纤维细胞是否存在与肿瘤细胞同样的基因突变。

干扰素-γ、重组TGF-β1 RII蛋白对小鼠日本血吸虫病肝纤维化的影响

目的 探讨IFN-γ、重组TGF-β1 RⅡ 蛋白对小鼠日本血吸虫病肝纤维化的影响.方法 昆明小鼠(6~8 周龄,体重18~25g,雌雄各半),随机分成6 组(6 只/组),正常对照组除外,其余30 只通过腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴18依2 条/鼠,六周后成功建立小鼠血吸虫性肝纤维化模型,具体治疗分组:①正常对照组;②模型对照组;③吡喹酮(PQT)治疗组;④PQZ +IFN-γ治疗组;⑤PQT+rTGF-β1RⅡ 蛋白治疗组;⑥PQT+IFN-γ+ rTGF-β1 RⅡ 蛋白治疗组.第九周末处死小鼠,HE 染色法对肝组织进行病理学检查;TBA 法测肝匀浆MDA 含量.结果 IFN-γ、rTGF-β1RⅡ 蛋白治疗显著降低肝纤维化指数,抑制日本血吸虫诱导的肝MDA 水平的升高.结论 日本血吸虫病化学药物治疗中,以PQT 为基础配合rTGF-β1R域蛋白、IFN-γ的联合疗法策略优于PQT 单独用药策略;rTGF-β1R域蛋白、IFN-γ的抗纤维化效应可能与其抗氧化功能有关.

转化生长因子β1及其Ⅰ型受体基因在大鼠自体移植静脉中的表达

目的研究转化生长因子β1(TGF β1)及其Ⅰ型受体(TGF βRⅠ)在大鼠自体移植静脉中的动态表达以及与移植静脉内膜增生的关系。方法48只Wistar大鼠,建立自体静脉移植模型,分别于术后3、7、14、28d收获静脉。组织形态学观察并测量不同时间点的内膜和血管壁厚度。联合应用免疫组化和Westernblot检测TGF β1及TGF βRⅠ的蛋白表达, RT PCR检测两者mRNA的表达。结果术后第7天内膜明显增厚,与对照组相比差异有统计学意义(P<0 05),第14天内膜增厚达到高峰。TGF β1蛋白表达在第3天开始增加,第7天达到高峰。TGF βRⅠ蛋白表达于术后第7天显著升高,第14天达到高峰。两者的mRNA的变化趋势与Westernblot结果相似。结论TGF β1及其Ⅰ型受体过度表达与移植静脉内膜增生关系密切,TGF β1可能成为防治移植血管内膜增生的有效靶点。

骨髓TPO与TGF-β1、TGF-βRⅢ的改变及其相关性在儿童ITP发病中的意义

目的 探讨骨髓内环境中的血小板生成素 (TPO)、转化生长因子 β1 (TGF -β1 )及巨核细胞中转化生长因子 β1 的Ⅲ型受体 (TGF -βRⅢ )在儿童特发性血小板减少性紫癜 (ITP)发病中的意义。方法 收集 2 8例急性ITP(AITP)患儿、16例慢性ITP(CITP)患儿和 2 0例相对正常儿童的骨髓 ;用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离骨髓巨核细胞 ;采用双抗体夹心ABC -ELISA法检测TPO、TGF -β1 水平 ;采用原位杂交法检测TGF -βRⅢ的表达情况。结果 ①AITP组与CITP组骨髓TPO的水平均高于对照组 ,且CITP组明显高于AITP组 (P <0 .0 5 ) ,但三组之间无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;②AITP组与CITP组骨髓TGF -β1 的水平及巨核细胞TGF -βRⅢ的表达均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且CITP组明显高于AITP组 (P <0 .0 5 ) ,三组之间有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;③除CITP组骨髓TPO与TGF -β1 的水平呈正相关关系外 (r =0 .65 3 ,P <0 0 5 ) ,其余两组均无明显相关性 (P >0 .0 5 )。结论 检测ITP患儿骨髓TPO、TGF -β1的水平及巨核细胞TGF -βRⅢ的表达情况对于研究ITP的发病机制以及早期分型和判断预后有重要参考价值。

复方中药水提物对腹水综合征肉鸡肝脏TGF-β1/Smad通路的影响

【目的】研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad通路在肉鸡腹水综合征肝纤维化中的作用及复方中药水提物的防治机理。【方法】选取健康Ross肉鸡258只,常规饲养至7日龄后,随机分为5组:空白组(C);模型组(M),低温、高脂和高蛋白饲料、高钠饮水的多因素法造模;复方中药水提物高、中、低剂量组(T1、T2、T3),在模型组基础上,每天饮水中分别添加2.0、1.0、0.5 g/kg复方中药水提物。观察临床症状和剖检变化,通过HE染色和Masson染色分别观察肉鸡肝脏组织结构变化与胶原纤维沉积,计算15、25、35、45日龄体重变化。利用实时荧光定量PCR检测各日龄肝脏中TGF-β1、转化生长因子β受体Ⅰ(transforming growth factorβreceptorⅠ,TβRⅠ)、Smad2、Smad3和Smad7基因相对表达量;利用ELISA法检测各日龄肝脏中TGF-β1、TβRⅠ蛋白含量。【结果】与空白组相比,模型组肉鸡腹部膨大、触压有波动感;腹腔内有大量淡黄色液体,肝脏充血肿胀、质脆,表面有瘀血点;肝脏组织结构紊乱,炎性细胞浸润,胶原纤维大量沉积,肝脏发生纤维化;体重极显著降低(P<0.01);除15日龄TβRⅠ蛋白外,肝脏中TGF-β1、TβRⅠ基因mRNA相对表达量与蛋白含量均极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),Smad2、Smad3基因mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01),Smad7基因mRNA相对表达量极显著降低(P<0.01)。与模型组相比,复方中药水提物组的肉鸡上述结果均有不同程度改善,且高剂量组作用效果最显著。【结论】肝纤维化参与了肉鸡腹水综合征的发生发展,机制与TGF-β1/Smad通路相关;由黄芪、当归、丹参、茯苓等制成的复方中药水提物可以调控TGF-β1/Smad通路,抑制肝纤维化的发生,可有效防治肉鸡腹水综合征。

胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织中TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达

目的探讨转化生长因子(TGF)β/Smad信号传导通路中Smad相关蛋白、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌组织中表达的意义。方法用免疫组化EnVision法和SP法检测266灶不同级别PanINs和121例胰腺癌组织中Smad相关蛋白、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达,并联系临床病理学指标进行相关分析。结果高级别PanIN病灶Smad4表达率(60.6%,20/33)低于低级别PanINSmad4表达率(79.8%,186/233)(P<0.05);而高级别PanIN中Smad7,TGFβ1,TGFβRⅡ表达率明显高于低级别PanIN(P<0.05)。胰腺癌组织中,Smad4蛋白表达率在淋巴结转移组和神经受累组低于各自对照组(P<0.05);Smad7、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的表达率在淋巴结转移组和神经受累组则分别高于各自对照组(P<0.05)。PanIN和胰腺癌组织中Smad2、4、7蛋白,TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率的差异具有显著性(P<0.01)。结论从低级别PanINs到高级别PanINs再到胰腺癌中,Smad4蛋白表达率逐渐降低,而Smad7、TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体表达率逐渐升高,支持胰腺癌形成的分子模型。