DNA损伤的同源重组修复机制

自然界生物体的基因组保持其完整性是机体细胞发挥正常功能和维持基本生存的必要条件。基因组在染色体自我复制的过程中由于受到各种内源性因素或者外源性因素的影响,存在多种形式的损伤。DNA的双链断裂(DSB)是DNA最为严重的损伤形式,是诱发细胞学的反应最为复杂的、生物学的后果最为严重的、与恶性肿瘤等等健康相关问题的关系最为密切的损伤类型,如不能得到及时而准确地修复,可能会导致基因的突变、基因组的不稳定、细胞染色体的丢失和重组或者导致细胞的凋亡甚至癌变。现已发现同源重组修复途径(HR)是真核生物中DSB的主要修复途径和方式,本文就HR的组成和修复机制进行综述。

适应性突变的遗传学特征

基于大肠杆菌FC40菌株的研究结果表明 ,适应性突变依赖RecBCD重组途径的酶 ,要求SOS反应的部分基因功能 ,lac+ 回复突变序列都是在单核苷酸短重复序列处的一个碱基缺失。有证据表明有的适应性突变来自一个或多个暂时性的超突变的细胞亚群 ,它们的基因组发生大量的突变 ,转座子高频丢失。产生这种暂时性的超突变的增变子可能是因为细胞的MMR活性暂时不足 ,或是因错误翻译产生丧失了校读活性的DNA聚合酶III。其他一些研究系统虽然得到了一些同FC40菌株不一致的结论 ,但所有实验证据都表明 ,在饥饿等环境胁迫因子作用下 ,非生长或缓慢生长的细胞可以产生突变 。

Advances in Trehalose Biosynthesis Pathways and Application of Molecular Biology Technique

This paper aims to provide better guidance for construction of trehalose-producing recombinant strains to further improve the yield of trehalose. The research progress on trehalose biosynthesis pathways and the application of molecular biology technique in trehalose study in recent 30 years, especially the last 10 years are reviewed. Results show that there are 5 pathways of trehalose synthesis. Although enzymes and genes of trehalose synthesis have been isolated and genetic engineering strains have increased gradually, the improvement of trehalose yield is still inadequate because most recombinant strains are limited to study the physicochemical properties of single enzyme. With the development of modern biological technology, especially the rapid development of DNA recombinant technology, metagenomics and synthetic biology, high expression of heterologous trehalose in recombinant strains would become a hot research topic in the future.

利用联合生物工艺生产燃料乙醇的研究进展

随着生物技术越来越多的介入到燃料乙醇的生产中,联合生物工艺(consolidated biopricessing)—CBP,因其可将纤维酶生产、纤维素水解和酒精发酵融合于一步工艺中完成,更是成为其中的亮点。为使联合生物工艺成为可能,以两种途径对所需微生物进行改造:一种是天然纤维降解微生物改造途径,将天然存在的可降解纤维素的微生物,尤其是厌氧微生物进行改造,以使其适应CBP生产的要求;另一种是重组途径,通过基因重组的方式将不能降解纤维的微生物获得降解纤维素的能力,并且生产的产品性质符合CBP的要求。两种途径的对微生物的改造,无论从经济性和社会效益,都将为高能耗时代的今天,提供一种低成本的燃料乙醇生产方式。

PI3K/mTOR通路抑制剂NVP-BEZ235增加直肠癌细胞SW1463的放射敏感性

背景与目的直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,提高直肠癌细胞的放射敏感性、降低术后局部复发率是临床工作中亟待解决的难题。本文旨在探讨PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235调节直肠癌细胞SW1463辐射敏感性的作用及机制。方法将完全培养基中对数生长期的SW1463细胞分为3组,分别进行无照射(对照组)、2 Gy高能X射线照射(辐射组)和100 nmol/L NVP-BEZ235处理1 h后给予2 Gy高能X射线照射(辐射+NVP-BEZ235组)处理,通过CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖能力和活力,通过Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞迁移能力,通过γH2AX免疫荧光染色检测DNA损伤反应,通过免疫印迹检测PI3K/mTOR通路和HR途径相关蛋白表达情况。采用单因素方差分析和Dunnett’s multiple comparisons test进行统计学分析。结果辐射引起了SW1463细胞增殖能力、细胞活力、迁移能力的降低,而NVP-BEZ235进一步降低了辐射引起的SW1463细胞活性的降低;辐射增加了SW1463细胞的DNA损伤,而NVP-BEZ235则进一步增加了辐射引起的SW1463细胞的DNA损伤。辐射引起了SW1463细胞PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-S6、p-BRCA1和D51蛋白水平的升高,而NVP-BEZ235则抑制了辐射引起的蛋白水平下调(均P<0.05)。结论辐射引起SW1463细胞活力、增殖和迁移能力的降低,增加SW1463细胞的DNA损伤;NVP-BEZ235可加强辐射对细胞的影响,两者可能发挥协同作用。

季铵化壳聚糖-重组组织因子途径抑制物复合物对大鼠碾压撕脱皮瓣的影响

目的探讨季铵化壳聚糖-重组组织因子途径抑制物(rTFPI)复合物对大鼠碾压撕脱皮瓣的影响。方法采用实验研究方法。采用离子交联法制备季铵化壳聚糖-rTFPI复合物溶液,用扫描电子显微镜观察复合物形态并测量其直径,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定并计算复合物中rTFPI的包封率和复合物载药率(样本数为3),采用ELISA法测定放置0、10、30、45、60、90、120、240 min时溶液中rTFPI浓度(观察rTFPI释放情况)并计算其半衰期(样本数为3)。取24只6周龄雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、单纯季铵化壳聚糖组、单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组(每组6只),大鼠背部均制备蒂部位于双侧髂棘连线上、从肌膜表面掀起的碾压撕脱皮瓣,原位缝合后即刻及术后1、2、3 d分别注射1次相应试剂治疗。术后1、3、7 d观察皮瓣大体变化;术后7 d,测量皮瓣成活面积并计算皮瓣成活率;将皮瓣平均分为蒂部、近段、中段、远段,用激光散斑血流成像仪检测皮瓣近段、中段、远段组织血流灌注情况;切取皮瓣中段组织行苏木精-伊红染色,观察组织结构变化和炎症细胞浸润情况,计数每100倍视野中栓塞血管和新生血管。对数据行单因素方差分析和LSD检验。结果季铵化壳聚糖-rTFPI复合物呈不规则球形结构,直径为150~200 nm;复合物中rTFPI的包封率为(88.7±2.1)%,复合物的载药率为(2.83±0.09)%。季铵化壳聚糖-rTFPI复合物溶液中rTFPI浓度随放置时间延长而逐渐增加,90 min时释放基本稳定,半衰期为(651±36)min。术后1 d,单纯季铵化壳聚糖组大鼠皮瓣远段变黑比较明显;术后3 d,单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣远段结痂、坏死较另外2组轻;术后7 d,各组大鼠皮瓣坏死界限清晰。术后7 d,单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣成活率分别为(63±7)%、(73±5)%,较PBS组的(41±3)%和单纯季铵化壳聚糖组的(52±7)%显著升高(P<0.05);季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣成活率较单纯rTFPI组明显升高(P<0.05)。术后7 d,各组大鼠皮瓣均有血流灌注;单纯季铵化壳聚糖组大鼠皮瓣近段组织血流灌注值以及单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣近段、中段、远段组织血流灌注值明显高于PBS组(P<0.05或P<0.01),单纯rTFPI组大鼠皮瓣远段组织血流灌注值以及季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣中段和远段组织血流灌注值明显高于单纯季铵化壳聚糖组(P<0.05或P<0.01),季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣中段组织血流灌注值明显高于单纯rTFPI组(P<0.01)。术后7 d,PBS组和单纯季铵化壳聚糖组大鼠皮瓣中段组织中炎症细胞浸润较多,细胞水肿明显;与前面2组相比,单纯rTFPI组和季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣中段组织炎症程度显著降低,栓塞血管数明显减少(P<0.05或P<0.01),新生血管数明显增多(P<0.05或P<0.01);与单纯rTFPI组比较,季铵化壳聚糖-rTFPI组大鼠皮瓣中段组织中新生血管数显著增多(P<0.05)。结论通过季铵化壳聚糖装载rTFPI能够起到缓释rTFPI的效果;季铵化壳聚糖-rTFPI复合物较单纯rTFPI能够进一步改善大鼠碾压撕脱皮瓣的血流灌注,提高皮瓣成活率。

加快兼并重组培育具有核心竞争力大企业集团的思考

发展具有核心竞争力的大企业集团,是天津市经济结构调整和企业改革创新的必然要求。天津的经济结构战略性调整实质是社会资源的一次重新整合,是以市场为导向进行的资源重组和优化配置过程。本文在分析天津市培育具有核心竞争力企业集团迫切性的基础上,找出天津市大企业与企业集团在核心竞争力上的差距,指出了培育天津市具有核心竞争力大企业集团的重组途径和政府应采取的对策建议。

银行债权治理与资产专用性“敲竹杠”:基于债务重组视角

本文以2008—2017年A股财务困境公司为样本研究资产专用性对债务重组的影响。研究发现:资产专用性越高,发生债务重组的概率越大,二者的显著正相关关系只发生在民营样本;银行参与治理的意愿越强,越能够促进资产专用性与债务重组的正相关关系。研究进一步发现,民营样本中研发投入存在中介效应,国有样本中政府补贴存在遮掩效应。资产专用性能够促进与金融类债权人进行法定债务重组。私下债务重组解决财务困境的市场预期更好,资产专用性高的样本通过私下债务重组更有利于解决财务困境,资产专用性低的样本通过法定债务重组更有利于解决财务困境。

rTFPI在大鼠预防碾压撕脱皮瓣坏死中的应用

目的 探讨重组组织因子途径抑制物（rTFPI）在治疗大鼠碾压撕脱皮瓣中的应用效果。方法2013年5月至2015年6月，30只sD大鼠被随机数字分为3组：对照组、碾压撕脱组和rTFPI治疗组，每组10只。在所有sD大鼠背部设计一个8．0cm×2．5cm的随机皮瓣．碾压撕脱组和治疗组的皮瓣被一个特殊装置造成碾压撕脱伤，原位缝合后各组连续治疗3d。对照组、碾压撕脱组注射磷酸缓冲液，治疗组注射rTFPI。在术后第3天观察皮瓣的微循环变化，第7天测量皮瓣的成活面积。应用SPSS19．0进行统计分析。结果与对照组、碾乐撕脱组和rTFPI治疗组皮瓣的成活率分别为（62．5±6．5）％、（32．7±5．2）％和（51．6±8．2）％，各组之间比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。激光多普勒和红外线热成像系统检查显示，在rTFPI组血流灌注能够达到皮瓣的中段，而碾压撕脱组仅能达到近段。结论rTFPI可以有效增加碾压撕脱皮瓣的成活面积，临床上可能对预防碾压撕脱皮瓣坏死有作用。

脓毒症相关性凝血病治疗药物的研究进展

脓毒症作为一种由感染导致的一系列病理生理异常和自身组织损伤而出现的一种威胁生命的状况,是重症监护病房(ICU)的常见疾病之一。在脓毒症病程发展过程中,病原相关分子模式(PAMP)、炎性介质、中性粒细胞胞外诱捕网(NET)等多种因素在诱导炎症反应的同时,激活患者机体的凝血功能。凝血系统的过度激活可能对宿主机体造成伤害,致脓毒症相关性凝血病和弥散性血管内凝血(DIC)的发生,进而发展为危及生命的多器官功能障碍(MODS),大大增加了患者的死亡风险。如何及时纠正脓毒症相关性凝血病与凝血功能障碍,有效改善患者预后,也成为了脓毒症治疗领域的研究热点之一。主要对重组人活化蛋白C(rhAPC)、重组人可溶性血栓调节蛋白(rhsTM)、抗凝血酶Ⅲ(AT Ⅲ)、重组组织因子途径抑制剂(rTFPI)、肝素和血必净注射液等脓毒症相关性凝血病治疗药物的研究进展进行综述。