重组基因酵母检测环境类雌激素污染物

介绍了利用重组基因酵母细胞检测环境类雌激素污染物的生物测定方法,并利用这种方法测定污泥、土壤、底泥、飘尘和家庭炉灶燃烧过程中排放的污染物中的雌激素活性,研究了样品不同的纯化方法对雌激素活性的影响.结果表明,重组受体基因/报道基因的酵母检测技术是一种筛选和定量分析环境样品中雌激素类污染物的快速、有效方法.酵母检测应结合分离纯化步骤,除去样品中的非活性和对酵母细胞有毒性的干扰物质.

基因重组酵母细胞检测养殖场污水中环境雌激素

用细胞生物学分析方法,对某养殖场污水处理厂水样中的类雌激素活性进行了分析,其中处理前水样6份,处理后水样9份。水样中的雌激素类化合物分别用大孔树脂富集,依次用丙酮、甲醇、乙醚洗脱,洗脱液经水浴蒸发挥干并用二甲亚砜定容。用重组人雌激素受体酵母细胞测其类雌激素活性,报告基因为编码β-半乳糖苷酶的LacZ基因。结果发现,处理前水样雌激素活性较高,而处理后水样对β-半乳糖苷酶的诱导水平较低。经17β雌二醇(E2)标准曲线换算成雌二醇当量,发现处理前水样雌激素活性在0.0001至0.15nmol·L-1E2当量,而处理后水样雌激素活性明显下降,有17个水样雌激素活性低于检出限,这说明畜牧厂污水中的雌激素类化合物通过污水处理厂处理后可下降。

重组雌激素受体基因酵母细胞检测牛尿液中β-雌二醇残留的方法

为探索畜禽产品中雌激素残留的检验方法,加强对畜禽生产过程中激素添加的监控,本研究选择了在我国几种常见影响比较大的合成雌激素-β-雌二醇(E2)为研究对象,建立用于测定动物尿液中雌激素的重组基因酵母检测法。结果表明本方法简单、有效,能够作为雌激素残留检测体系的有益补充。

不同工艺出水中有机物的致突变性及类雌激素效应

取南方某市水源水和经5种不同饮用水处理工艺处理后的出水,采用XAD-2大孔树脂分别提取水样中的非挥发性有机物,对其进行Ames试验和重组酵母菌雌激素效应检测,比较了水源水及不同工艺出水中非挥发性有机物(NOCs)的致突变性和类雌激素效应。结果表明,各工艺对水源水中具有致突变性和类雌激素效应的有机物均有一定程度的去除作用,其中经预臭氧氧化—混凝、沉淀—砂滤—GAC过滤—次氯酸钠消毒工艺处理的出水,其NOCs的致突变性和类雌激素效应均较低。

北方某水厂的类雌激素物质变化规律

对北方某水厂春季和夏季源水和各处理单元出水中类雌激素物质的变化规律进行了研究.将水样用固相萃取方法富集后,按不同极性洗脱,得到从非极性到极性的3个组分,分别对总提取物和各分级富集组分进行重组雌激素受体基因的酵母检测.结果表明:源水和各处理单元出水中能够检测到极低水平的类雌激素物质,其中源水中的类雌激素效应仅相当于5.4～11.0pg/L雌二醇当量,主要由非极性与弱极性的类雌激素物质引起;春季和夏季源水中的类雌激素效应相差不大;水厂传统的处理工艺对类雌激素物质的去除效果不明显;重组基因酵母检测技术结合水样的固相萃取、三步纯化分级前处理方法可以快速、有效地筛选和定量分析水样中未知类雌激素物质,并对水处理效果进行评价.

自来水及水源水有机提取物类雌激素活性研究

为了检测自来水及水源水有机提取物的类雌激素活性 ,应用环境雌激素基因重组酵母、细胞增殖和子宫增重等三项短期生物学实验进行测定。结果发现 :水样有机提取物在相当于原水量 50ml时两项体外实验均检出雌激素活性 ,原水量 2 50ml时细胞增殖效应达到最大 ,以后随原水量增大细胞增殖效应逐步减弱。原水量 12 50ml时酵母菌β -半乳糖苷酶活性最强 ,以后随原水量增大 β -半乳糖苷酶活性逐步减弱。水厂水源水有机提取物低、中剂量组受试小鼠子宫湿重增加 ,与对照组比较有统计学意义 ,高剂量组湿重减少。提示水源水有机提取物具有类雌激素活性。采用这三项实验组成的生物学检测程序具有一定的灵敏度 ,且较快速、方便。

酒酒球菌mleA基因重组表达质粒pYELmleA的构建及其在酿酒酵母中的表达

苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶.笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建,利用来自重组质粒pLmleA的mleA基因,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体,构建了重组表达质粒pYELmleA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58.酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定.SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白,斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中.获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d;取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量,采用t检验进行差异显著性分析,结果表明nleA基因进行了功能性的表达,将L-苹果酸转化成L-乳酸,L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著,L-乳酸的生成量为1002-1106mg/L,苹果酸的相对降低率为19.16-22.34%.

城镇污水二级处理和再生水三级处理过程的雌激素活性变化

环境雌激素污染与野生动物性别比例和繁殖密切相关,是人体生殖功能紊乱、发育异常、心血管疾病和癌症发生等的重要因素之一。针对污水处理厂排水造成的环境雌激素污染,采用重组酵母菌方法研究大连、沈阳、哈尔滨和天津的5个典型城市污水厂和再生水厂水处理过程中雌激素活性的变化规律,分析二级处理和再生水厂三级处理对环境雌激素的削减效率。4个采用活性污泥法和紫外消毒工艺的污水厂出水的雌激素当量(EEQ)为0.5~1.5 ng·L^-1。再生水厂三级处理工艺的出水雌激素活性低于检测限(0.02 ng·L^-1)。分级组分测试结果显示,污水雌激素活性主要由强极性组分和弱极性组分引起,紫外消毒后强极性组分雌激素活性升高。4个城市污水处理厂一级处理和活性污泥处理对环境雌激素的削减率为46%~81%,紫外消毒的削减率为5.2%~22%。某再生水厂混凝、微滤和反渗透对环境雌激素的削减率分别为63%、16%和98%。研究表明,活性污泥法二级处理排水回用仍造成一定程度环境雌激素污染,三级处理工艺可有效提高环境雌激素污染物削减率。

重组多肽建立ELISA法检测家禽H5亚型禽流感抗体

德国莱比锡大学的研究人员将H5亚型禽流感病毒血凝素（HA）的2个去尾序列（P1和rHA1）克隆后在毕赤酵母菌中表达，以其表达产物多肽制备抗原，建立以重组多肽为抗原的间接ELISA（rELISA）来检测家禽中的H5禽流感抗体。肉雏鸡免疫H5N2商品灭活苗后，

重组抗原在HSV-Ⅰ感染ELISA检测中的应用

目的 用单纯疱疹病毒(HSV)重组蛋白作为包被抗原建立一种特异性和灵敏性较高的ELISA方法。方法 将重组糖蛋白D(gD)和HSV Ⅰ分别作为包被抗原,检测5 7份临床标本,同时用国产和德国试剂盒进行检测;将德国试剂盒作为金标准,另外三者检测结果在特异性、灵敏性和符合率等方面与其进行比较。结果 与德国试剂盒相比,在特异度、敏感度、符合率方面,重组抗原分别为5 7 1%、82 0 %、78 9%。病毒抗原分别为5 7 1%、78 0 %、75 4 % ;国产试剂盒分别为10 0 0 %、4 8 0 %、5 4 4 %。重组蛋白重复性实验结果经统计学处理差异无统计学意义(P >0 0 5 )。结论 用酵母菌表达的HSV Ⅰ重组gD蛋白作为包被抗原进行ELISA检测是一种敏感、特异的方法,具有较大的应用价值。

某市动物性食品环境雌激素活性的调查与分析

目的对某市动物性食品雌激素活性进行研究,以综合评价食品中环境雌激素(EES)的污染状况。方法结合重组酵母雌激素筛检法(YES)及高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)进行分析。结果 YES结果表明,生物雌二醇(E2)当量浓度(EEQbio)为(6.11～25.45)ng/g。LC-MS/MS结果显示,所有样品均检测到17β-雌二醇(E2)和双酚A(BPA),大部分样品检测到乙炔基雌二醇(EE2),含量分别是(2.87～5.05)ng/g、(0.48～3.57)ng/g和(1.23～7.38)ng/g。样品的化学雌二醇当量(EEQchem)范围在(3.15～15.14)ng/g之间。两种方法测得的EEQ均值,有一定的相关性(R2=0.443)。结论所有样品均检测到了一定的雌激素活性,且生物实验与化学分析相结合,可以更有效的评价动物性食品环境雌激素的总体效应及污染现状。