重组酶法定量分析吡咯喹啉醌

用ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｃｅｌ和ＣＭ－ｃｅｌｕｌｏｓｅ柱层析的方法从Ｃｏｍａｍｏｎａｓｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉ菌体中纯化得到一定纯度的脱辅基的乙醇脱氢酶。在含３ｍＭＣａＣｌ２的Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ缓冲液（２０ｍＭ，ｐＨ７．０）中，该酶能与ＰＱＱ重组成有活性的全酶，测出的全酶活性大小与外加ＰＱＱ的量成正比，从而定量分析ＰＱＱ。该法专一、灵敏、可靠。

酶法生产D-对羟基苯甘氨酸通过鉴定

中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所分子微生物学开放实验室主持的国家“863”计划项目“半合成β-内酰胺类抗生素相关工业用酶的研究”课题中的“重组酶法生产D-对羟基苯甘氨酸”于近日通过鉴定。

吡咯喹啉醌高通量检测方法的建立与优化

吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline quinone,PQQ)是一种新型辅酶,具有广阔的应用前景。传统PQQ检测方法在检测发酵液中PQQ浓度时都存在一定的缺陷,且检测效率偏低。本研究在大肠杆菌(Escherichia coli BL21(DE3))中表达E.coli K-12来源的葡萄糖脱氢酶(PQQGDH),并通过亲和层析分离纯化PQQGDH,得到了高浓度、高纯度的PQQGDH。通过酶液和PQQ样品用量的双因素正交实验对传统重组酶法的反应体系加以改进,得到适用于96孔板高通量检测的反应体系。结果表明30μL纯化后酶液、2μL PQQ样品配合1.2 m L的显色剂组成的显色体系检测效果最佳。该方法线性范围大且具有较高的精确度和重现性。本研究中利用高浓度、高纯度的PQQGDH配合96孔板和酶标仪,所建立的PQQ高通量检测方法,不仅降低了实验误差,而且大幅提高了PQQ发酵液样品的检测效率。

中科院开发出生产D-对羟基苹甘氨酸新法

由中科院上海生命科学研究院植物生理生态研究所“分子微生物学开放实验室”主持的国家“863”计划项目“半合成β-内酰胺类抗生素相关工业用酶研究”课题中的“重组酶法生产D-对羟基苯甘氨酸”部分，于近日通过了成果鉴定。