表达禽流感HA基因的重组马立克氏病病毒的构建

本试验首先用RT-PCR方法扩增出H9N2亚型禽流感病的HA基因,大小约1 700 bp,将其克隆到真核表达载体pcDNA中,并将该真核表达载体上的CMV启动子控制的含LacZ和HA基因表达盒克隆入马立克氏病病毒US2基因中,成功的构建了马立克氏病病毒的转移载体。然后,通过脂质体方法转染已感染马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,通过蓝斑筛选获得重组病毒。该重组病毒通过PCR方法鉴定证实其基因组中含有完整的HA基因。免疫酶反应和Western-blot证实重组病毒表达了禽流感HA蛋白,表达的HA蛋白具有血凝活性。

表达传染性法氏囊vp2基因的重组马立克病疫苗对SPF鸡和商品鸡的免疫保护试验

国内外很多学者都在进行着传染性法氏囊(Infectious bursal disease,IBD)各种基因工程疫苗的研制,IBDV-vp2基因在多种载体中得到表达并取得了较好的保护效力。本实验室已构建了表达IBDV-vp2基因的重组马立克氏病病毒。本研究对该重组马立克氏病病毒疫苗的遗传稳定性以及对SPF鸡和含有母源抗体的商品鸡的免疫保护作用进行了评价。结果表明,103 PFU和104 PFU剂量的重组病毒免疫后对SPF鸡抗传染性法氏囊标准强毒的保护率分别为53%和73%。104 PFU剂量的重组病毒免疫后对含有母源抗体的商品鸡抗传染性法氏囊标准强毒的保护率为87%,结果显示重组疫苗具有一定的应用前景。

双报告基因重组技术在马立克氏病病毒传播研究中的应用

马立克氏病是威胁家禽业的重要疫病,尽管已开发出多种疫苗来防控该病,但其病原仍然在免疫鸡群中长期流行,而且逐渐出现毒力增强的毒株。基于详细解析该病毒的生物学特征以及宿主-病毒互作关系,法国国家农业科学院Harmache Abdallah博士构建了一株具有毒力的双报告基因重组马立克氏病病毒,进一步发现了该病毒传播的新途径,该成果刊发于《Journal of Virology》。