重组鸡半胱氨酸蛋白酶抑制剂类淀粉样沉淀分析

目的利用具有天然N-末端的重组鸡半胱氨酸蛋白酶抑制剂(chicken cystatin,cC)在毕赤酵母中高效分泌表达,研究淀粉样沉淀倾向。方法通过在巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株X-33中甲醇诱导表达cC能与刚果红特异性结合特性和硫磺素T荧光分析聚积方法研究聚集的特性。结果重组cC形成的类淀粉样蛋白的聚集量有明显增加,30 d时,紫外分光光度检测,重组cC为1.21μmol/L,重组cC荧光强度由1.08增至18.05,即聚集程度增加。结论野生型cystatin C也有形成淀粉样沉淀倾向。

重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对急性肝损伤小鼠的保护作用及机制

目的 探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用及机制。方法 将72只雄性C57BL/6J小鼠(6~8周龄)随机分为正常对照组、LPS/D-GaIN模型组、LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组和rSj-Cys对照组(n=18)。LPS/D-GaIN组和LPS/D-GaIN+rSj-Cys组小鼠均腹腔注射LPS(10μg/kg)和D-GaIN(700 mg/kg)造模;造模后30 min,LPS/D-GaIN+rSj-Cys组及rSj-Cys对照组小鼠均腹腔注射rSj-Cys(1.25 mg/kg),正常对照组小鼠注射等体积PBS。造模6 h后,每组随机挑选8只小鼠处死,收集小鼠血清及肝组织,进行后续检测,每组剩余10只分别在3、6、12、24 h观察其生存情况,并计算生存率。检测血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肝脏组织病理形态,采用ELISA检测小鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)表达,采用免疫组化法检测肝组织巨噬细胞表面标记物CD68表达水平,采用免疫组化和免疫印迹法检测肝组织Bax、Bcl-2蛋白水平,采用TUNEL检测肝细胞凋亡情况,采用免疫印迹法检测肝组织内质网应激相关蛋白表达水平。结果 模型组小鼠12 h生存率为30%,rSj-Cys治疗组小鼠12 h生存率为80%。模型组小鼠24 h生存率为10%,rSj-Cys治疗组小鼠24 h生存率为60%;与正常对照组相比,LPS/D-GaIN模型组小鼠血清中AST、ALT、IL-6、TNF-α含量均显著上升(P<0.01),病理结构损伤严重,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显增强(P<0.01),促凋亡蛋白Bax表达显著增加(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.01),肝细胞凋亡水平显著增加,肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01);而LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组小鼠转氨酶AST、ALT和炎症因子IL-6、TNF-α水平显著下降(P<0.01),肝脏病理损伤程度减轻,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显降低(P<0.01),Bax表达显著降低(P<0.01),Bcl-2表达显著增强(P<0.01),肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平下调(P<0.05或P<0.01);rSj-Cys对照组与正常对照组相比,各指标无统计学差异(P>0.05)。结论 rSj-Cys通过抑制内质网应激,减轻炎症和肝细胞凋亡缓解LPS/D-GalN引起的小鼠急性肝损伤。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂4在胰腺癌临床诊断及预后评估中的价值

目的:分析血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂4(CST4)表达水平在胰腺癌临床诊断及预后评估中的价值。方法:收集2020年10月—2023年1月就诊于河北医科大学第四医院的71例胰腺癌初诊患者,分别收集患者血常规、凝血功能、血生化及血清肿瘤标记物等指标检测结果及病例信息。分析胰腺癌患者与胰腺良性肿瘤患者血清CST4表达水平及其他临床实验室检测结果的差异,并制作受试者工作特征(ROC)曲线评价CST4在胰腺癌诊断及临床进展评估中的意义。绘制Kaplan-Meier生存曲线并采用多因素Cox回归分析比较CST4与传统肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)和糖类抗原199(CA19-9)在胰腺癌临床预后评估中的价值。结果:与胰腺良性肿瘤对照相比,胰腺癌患者血清CST4、CEA及CA19-9含量异常的比例及中位值均明显升高(P<0.01)。ROC分析显示,CST4在胰腺癌诊断中的曲线下面积(AUC)为0.782,其与CEA和CA19-9联合检测AUC(AUC=0.930)较单项检测明显升高(P<0.05);而CST4在预测胰腺癌临床进展中显示出更高的价值(AUC=0.794),敏感度为80.90%,特异性为70.80%,阳性似然比为2.77,最佳截断值为84.41 U/mL;预后分析显示,CST4高表达组和CST4低表达组患者中位生存时间分别为6.2月和25.6月,差异有统计学意义(P<0.01);血清CST4表达水平升高是胰腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:血清CST4表达水平可作为胰腺癌患者临床辅助诊断指标,是胰腺癌患者预后的独立危险因素。

血清肌酐/半胱氨酸蛋白酶抑制剂C比值对胰腺癌患者的早期诊断与预后价值

目的探讨血清肌酐/半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(sCr/CysC)比值对胰腺癌早期诊断和预后评估的价值。方法回顾性分析苏州大学附属第一医院2020年1月至2021年12月收治的60例初诊胰腺癌患者、30例胰腺良性肿瘤患者和30例健康对照者的临床资料。比较三组间sCr/CysC比值、C反应蛋白(CRP)、L3骨骼肌指数(L3-SMI)、Alb和CA199水平的差异。采用ROC曲线分析sCr/CysC比值对胰腺癌的诊断效能。根据sCr/CysC比值中位数将胰腺癌患者分为高比值组和低比值组,应用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型分析sCr/CysC比值对胰腺癌预后的预测价值。结果与胰腺良性肿瘤组和健康对照组相比,胰腺癌组的sCr/CysC比值和Alb水平显著降低,而CRP水平明显升高(均P<0.05)。与低sCr/CysC比值组相比,高比值组患者的性别构成、年龄和L3 SMI水平差异有统计学意义(均P<0.05)。sCr/CysC比值对胰腺癌的诊断ROC曲线下面积为0.640(95%CI:0.524~0.756,P<0.05),在cut-off值为0.69时敏感性为46.7%,特异性为83.3%。相关分析显示,sCr/CysC比值与L3-SMI呈正相关(r=0.425,P<0.01)。生存分析表明,高sCr/CysC比值组患者的中位生存期显著长于低比值组(379 d vs 210 d,P<0.01)。Cox回归分析确认sCr/CysC比值是胰腺癌预后的独立危险因素(HR=0.151,95%CI:0.028~0.826,P<0.05)。结论sCr/CysC比值可能是胰腺癌早期诊断和预后评估的有效指标,有望为胰腺癌的临床诊疗提供参考。

血清碱性磷酸酶、同型半胱氨酸及半胱氨酸蛋白酶抑制剂C与糖尿病足下肢动脉粥样硬化的关系

目的分析糖尿病足患者血清碱性磷酸酶(ALP)、同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys-C)水平与糖尿病足及下肢动脉粥样硬化(AS)的关系。方法收集2021年1月至2021年12月于山东中医药大学附属医院住院治疗的80例糖尿病足患者和36例同期健康体检者的临床资料,分别设为观察组和对照组。根据彩色多普勒超声测定的下肢股动脉内-中膜厚度(FAIMT)测定结果将观察组患者分为FAIMT增厚组(n=39)和斑块组(n=41)。比较各组患者的临床特征、血液指标[ALP、Hcy、Cys-C、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及空腹血糖(FBG)],采用多因素Logistic回归模型分析糖尿病足发生的危险因素,通过受试者操作特征(ROC)曲线确定ALP、Hcy、Cys-C对糖尿病足的诊断价值。结果观察组的年龄大于对照组,ALP、Hcy、Cys-C、FBG水平均高于对照组,TC、HDL-C水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。斑块组患者的Hcy水平高于FAIMT增厚组患者,差异有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,年龄、FBG、ALP、Hcy、Cys-C均是糖尿病足发生的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线分析结果显示,ALP、Hcy、Cys-C诊断糖尿病足的AUC分别为0.724、0.640、0.895,对糖尿病足均具有较好的诊断价值。结论ALP、Hcy、Cys-C与糖尿病足的发生密切相关,且与下肢AS程度有关,对糖尿病足患者病情的诊断具有重要临床意义。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C与糖尿病肾病的相关性

目的探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)与糖尿病肾病(DKD)的相关性。方法收集2019年1月至12月陕西省人民医院内分泌科住院的122例2型糖尿病(T2DM)患者的临床资料,按尿白蛋白与肌酐比值(UACR)分为单纯糖尿病(DM)组(UACR<30 mg/g,89例)、DKD组(UACR≥30 mg/g,33例)。比较两组临床资料,采用logistic回归分析T2DM患者发生DKD的危险因素,绘制受试者操作特征(ROC)曲线评价Cys C对DKD的预测价值。结果DKD组收缩压、碱性磷酸酶、总蛋白、球蛋白、血清肌酐、尿微量白蛋白、尿α_(1)微球蛋白、UACR、Cys C均高于单纯DM组,病程长于单纯DM组(P<0.05)。logistic回归分析显示,Cys C是DKD的危险因素(OR=28.369,95%CI:1.208~666.129,P=0.038)。ROC曲线分析显示,Cys C预测DKD的曲线下面积为0.757(P<0.05)。结论Cys C与T2DM合并DKD密切相关,检测Cys C可用于评估DKD病情进展。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂1对人食管鳞状细胞癌斑马鱼移植瘤模型的作用

目的通过构建人食管鳞状细胞癌(ESCC)的斑马鱼移植瘤模型,研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂1(CST1)表达对ESCC肿瘤转移及血管生成的影响。方法通过慢病毒转染技术构建CST1过表达/敲低ESCC细胞,并经Transwell小室法检测细胞侵袭/迁移能力的变化,再通过显微注射技术分别将CST1过表达/敲低ESCC细胞注射至斑马鱼胚胎卵黄囊,建立人ESCC斑马鱼移植瘤模型,观察两株细胞在斑马鱼体内的定植迁移、分布及对斑马鱼肠下静脉丛(SIVs)的影响。结果体外实验表明,CST1过表达ESCC细胞的侵袭/迁移能力明显增强,而CST1敲低ESCC细胞的侵袭/迁移能力明显减弱。斑马鱼移植瘤模型实验表明,当接种细胞数为300~500个/只时,ESCC斑马鱼移植瘤建模的存活率大于0.8;与对照组相比,CST1过表达细胞在斑马鱼体内具有明显的迁移特性,且SIVs区域血管呈明显增生状态,而CST1敲低细胞迁移能力减弱,SIVs区域血管生成明显受到抑制。结论通过显微注射技术成功构建人ESCC的斑马鱼异种移植瘤模型,并应用于肿瘤的在体功能学研究。CST1过表达具有促进ESCC肿瘤转移及血管生成的作用,提示CST1在ESCC发生发展进程中发挥潜在的致癌作用。

血清尿酸、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C及碱性磷酸酶水平与脑卒中后抑郁的相关性

目的分析血清尿酸、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)及碱性磷酸酶水平与脑卒中后抑郁(PSD)的相关性。方法收集郑州大学第一附属医院诊治的202例脑卒中患者的临床资料,经神经内科治疗后病情稳定,根据汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分,分为抑郁组(105例)与对照组(共97例)。收集两组患者的一般临床基线资料和实验室指标,应用logistic回归分析急性脑卒中患者PSD发生的危险因素,根据受试者工作特征(ROC)曲线分析血清尿酸、Cys C水平预测PSD发生的临床价值。结果两组性别、高血压、糖尿病、吸烟、饮酒、冠心病、房颤史、发病类型、发病至入院时间及碱性磷酸酶水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者高龄、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、血清尿酸和Cys C水平差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归分析结果提示,血清尿酸水平和Cys C水平是急性脑卒中患者发生PSD的影响因素。血清尿酸浓度预测PSD的最临界值为317.251μmol·L^(-1)。血清Cys C浓度预测PSD的最佳临界值为2.155 mg·L^(-1)。结论血清碱性磷酸酶水平与PSD的发生无关;血清尿酸和Cys C水平是影响急性脑卒中患者发生PSD的独立影响因素,二者对急性脑卒中患者发生PSD具有较高的诊断价值,可以作为预测PSD发生的血清学指标。

重组荞麦胰蛋白酶抑制剂对人肝癌细胞的凋亡及半胱氨酸天冬酶活性的影响

先前的研究表明,基因重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)具有诱导不同肿瘤细胞凋亡的作用.为了揭示其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机理,从基因水平上探讨与凋亡有关的分子事件,本研究用不同浓度的rBTI体外作用于人肝癌细胞HepG2后,采用MTT比色法检测抑制剂对HepG2细胞的抑制率,用DNA凝胶电泳和细胞核的形态学观察检测HepG2细胞的凋亡.结果表明,rBTI在体外能够明显抑制HepG2细胞的增长,并诱导细胞凋亡.另外,细胞凋亡与Bcl-2/Bax mRNA水平有关.通过RT-PCR检测发现,细胞经过rBTI处理后,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA水平下调,促凋亡基因Bax mRNA有所上调,而对照GAPDH无变化.对HepG2细胞中Fas/Fas配体及半胱氨酸天冬酶(caspase)的研究证明,细胞经过rBTI处理后,对死亡受体Fas mRNA没有影响;rBTI可明显激活caspase-3和caspase-9酶活性,对caspase-8活性几乎无影响.上述结果表明,rBTI对HepG2细胞具有明显的诱导凋亡作用,其诱导细胞凋亡的机制与caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关,未涉及Fas/Fas配体途径.

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组蛋白对小鼠黑色素瘤血管生成拟态的影响及其机制

目的探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)重组蛋白对小鼠黑色素瘤血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成的影响及相关机制。方法建立Matrigel胶肿瘤细胞类血管生成模型,分析sv-cystatin重组蛋白(10、25、50、100、200mg/L)对B16F10细胞VM形成及基质金属蛋白酶-2、9[matrix metalloproteinase-2(MMP-2)、MMP-9]蛋白表达的影响;建立C57BL/6小鼠黑色素瘤实验性肺转移模型,经25、50mg/kg重组蛋白治疗后,应用CD34和过碘酸雪夫(periodic acid-schiff stain,PAS)双重染色法检测肺转移瘤VM形成,免疫组织化学法检测转移瘤MMP-2、MMP-9表达。结果与对照组相比,sv-cystatin重组蛋白作用后B16F10细胞体外VM形成及MMP-2、MMP-9蛋白表达明显减少,并呈剂量依赖性(P<0.05);两治疗组小鼠肺转移瘤VM形成及MMP-2、MMP-9表达明显下降(P<0.05)。结论 sv-cystatin重组蛋白能够抑制VM形成;下调MMP-2、MMP-9表达是其中的机制之一。

血液可溶性生长刺激表达基因2蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、白介素6对A型主动脉夹层患者心脏手术相关急性肾损伤的预测价值

目的探讨血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)和白介素6(IL-6)对A型主动脉夹层(ATAAD)患者术后心脏手术相关性急性肾损伤(CSA-AKI)的预测价值。方法纳入2022年4月至2024年3月在厦门大学附属心血管病医院确诊的112例ATAAD患者,根据术后是否发生CSA-AKI分为CSA-AKI组和非CSA-AKI组。另选取50例健康体检者作为对照组。分别检测各组术前及术后24h、72h血清sST2、CysC和IL-6水平,比较组间差异,并采用Lo-gistic回归和ROC曲线分析评估3种标志物对ATAAD术后CSA-AKI的预测效能。结果CSA-AKI组术前和术后sST2水平均显著高于非CSA-AKI组(P<0.05),非CSA-AKI组术前sST2水平高于健康对照组(P<0.05)。两组ATAAD患者术前IL-6水平均高于对照组(P<0.05)。CSA-AKI组术后24h、72hCysC水平明显高于非CSA-AKI组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,术后24h、72hsST2和CysC水平与CSA-AKI发生风险显著相关(P<0.05)。ROC曲线证实,sST2和CysC对CSA-AKI有良好预测价值(P<0.05)。结论血清sST2和CysC是潜在的新型标志物,对ATAAD术后CSA-AKI具有早期预测和风险评估价值。

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α表达的影响

目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法采用ELISA方法检测不同浓度sv-cystatin重组蛋白对人肝癌MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α分泌的影响;实时定量PCR和Western blot法分别分析不同浓度sv-cystatin重组蛋白体外处理人肝癌MHCC97H细胞后TGF-β2、TNF-α的mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,5种浓度的sv-cystatin重组蛋白对MHCC97H细胞TGF-β2、TNF-α的分泌具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);25、50、100、200 mg·L-14种浓度的重组蛋白能够抑制TGF-β2的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);而50、100、200 mg·L-13种浓度的重组蛋白能够抑制TNF-α的mRNA及蛋白表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 sv-cystatin重组蛋白可能通过抑制TGF-β2和TNF-α的表达来发挥多方面的抗肿瘤作用。

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组腺病毒对人肝癌细胞 MHCC97H 侵袭转移的影响

目的构建携带蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因的重组腺病毒载体(Ad/sv-cystatin),研究其对人肝癌细胞MHCC97H在体内、外侵袭转移的影响。方法构建携带sv-cystatin的重组腺病毒,体外感染MHCC97H细胞,采用CCK-8法检测细胞生长,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,通过裸鼠皮下肝癌细胞肺转移模型观察Ad/sv-cystatin瘤内注射对裸鼠的治疗作用。结果体外实验证实Ad/sv-cystatin能够感染MHCC97H细胞。与对照组及空载体组相比,Ad/sv-cystatin对MHCC97H细胞体外生长、侵袭和迁移均具有明显的抑制作用,瘤内注射Ad/sv-cystatin可以显著降低MHCC97H细胞的肺转移。结论重组腺病毒Ad/sv-cystatin具有抑制人肝癌细胞MHCC97H体内外侵袭转移的作用,在肝癌基因治疗方面具有开发应用潜能。

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、糖类抗原125与非ST段抬高型急性冠脉综合征患者病情严重程度的相关性研究

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)、糖类抗原125(CA125)与非ST段抬高型急性冠脉综合征(NSTE-ACS)患者病情严重程度的相关性,为临床诊断该疾病及其病情严重程度提供依据。方法回顾性分析2020年6月至2023年6月梧州市人民医院收治的105例NSTE-ACS患者的临床资料,根据冠状动脉造影(CAG)评估患者冠状动脉病变支数,将其分为单支冠状动脉病变组(34例)、双支冠状动脉病变组(50例)及三支冠状动脉病变组(21例);根据Gensini评分系统评估患者冠状动脉狭窄程度,将其分为轻度狭窄冠状动脉病变组(31例)、中度狭窄冠状动脉病变组(55例)及重度狭窄冠状动脉病变组(19例)。所有患者入院后均进行血清CysC、CA125水平检测,采用Pearson相关性分析法分析血清CysC、CA125水平与冠状动脉病变支数的相关性,以及其与Gensini评分的相关性。结果三支冠状动脉病变组患者血清CysC、CA125水平均高于双支、单支冠状动脉病变组患者,且双支冠状动脉病变组患者均高于单支冠状动脉病变组患者;Pearson相关性分析法分析结果显示,冠状动脉病变支数与血清CysC、CA125水平均呈正相关;重度狭窄患者血清CysC、CA125水平均高于中度狭窄组和轻度狭窄组患者,且中度狭窄组患者均高于轻度狭窄组患者;Pearson相关性分析法分析结果显示,Gensini评分与血清CysC、CA125水平均呈正相关(均P<0.05)。结论血清CysC、CA125与冠状动脉病变支数、狭窄程度密切相关,可作为临床评估NSTE-ACS患者病情严重程度的参考指标。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂对大鼠脑缺血模型DNA损伤的实验研究

目的研究caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CMK及calpain抑制剂ALLN干预治疗对大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型的神经保护作用。方法经左侧侧脑室注射DEVD或/和ALLN及溶剂二甲基亚砜(DMSO)后,制作大鼠左侧MCA缺血再灌注模型;缺血2h再灌注24h进行TTC染色观察梗死灶的形成情况;并分别于缺血2h再灌注24h或48h检测鼠脑中单、双链DNA断裂情况。结果溶剂DMSO预处理组的各项指标与MCAO模型组无明显差异;DEVD或ALLN治疗后缺血侧脑中Klenow及TUNEL阳性细胞数均明显减少,二者合用作用最强。结论Caspase-3与calpain均在缺血性脑损伤中起重要作用,对此进行治疗干预具有潜在的临床应用价值。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在心脏术后急性肾损伤早期诊断的前瞻性研究

目的探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cystatin C）在预测和诊断心脏术后急性肾损伤（AKI）中的价值。方法前瞻性收集我院132例接受心肺旁路手术的病人，每位病人术前及术后每天采集血标本。同时应用酶法测血清肌酐（Scr），用颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA）检测血清Cystatin C，用MDRD公式估算肾小球滤过率（eGFR）。AKI运用ADQI的RIFLE标准进行诊断（R：Scr升高≥50％基础值，I：Scr升高≥100％基础值，F：Scr升高≥200％基础值，L：肾功能丧失；E：终末期肾脏病）；同时AKI也按Cystatin C≥50％、≥100％和≥200％的标准进行诊断。结果29（21．9％）例病人发生不同程度AKI，其中10例经历R标准，12例经历I标准，7例经历F标准。其余103例没有发生AKI的病人作为对照组。AKI病人的Cystatin C较非AKI病人显著升高（P〈0．001），AKI病人的Cystatin C与Scr（r=0．732．P〈0．001）、[Cystatin C]^-1与eGFR（r=0．803，P〈0．001）成明显线性相关。分别按照Cystatin C和Scr两种方法诊断AKI，不同程度AKI诊断的中位时间是：R标准的10例病人分别为2d（1--4d）和3d（2～5d）（P=0．014），I标准12例病人分别为3．5d（1--6d）和5d（2～8d）（P=0．008），F标准7例病人分别为5d（3～7d）和6．5d（4--9d）（P=0．02）。ROC分析证实Cystatin C在AKI诊断中的准确性高（曲线下面积为0．992）。当以Cystatin C升高≥50％作为AKI的诊断截点时，Cystatin C在AKI诊断中的敏感性和特异性分别为92％和95％。结论Cystatin C可作为心肺旁路手术后AKI的诊断指标：Cystatin C在AKI的诊断时间上较Scr早，它可能作为AKI的早期预测指标之一。

中华鲟半胱氨酸蛋白酶抑制剂在毕赤酵母中的表达和活性分析

为研究鱼类半胱氨酸蛋白酶抑制剂 (Cystatin)的功能并探索其在水产加工和病害防治中的应用潜力 ,将PCR改造后的编码成熟肽中华鲟 (Acipensersinensis)cystatin基因亚克隆到毕赤酵母整合型表达载体pPICZαA ,氯化锂法转化毕赤酵母菌株GS115 ,构建表达cystatin的酵母基因工程菌。经甲醇诱导、SDS PAGE检测培养基上清液 ,表明中华鲟cystatin在毕赤酵母中实现了高效表达 ,重组cystatin表达量约为 2 15mg·L- 1 。纯化后重组蛋白纯度达94 .2 %。生物活性检测结果表明 ,1μg重组中华鲟cystatin约能抑制 15

缺血性卒中急性期患者血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C水平的变化

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(简称胱抑素C)与缺血性卒中的相关性及临床意义。方法收集急性缺血性卒中患者147例,按病灶体积分为小、中、大3个亚组,根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)分为高危组(NIHSS>8分)和低危组(NIHSS≤8分),选择60例非卒中患者为对照组。采用颗粒增强免疫比浊法测定血清胱抑素C水平,探讨胱抑素C与缺血性卒中的关系,并分析胱抑素C与缺血性卒中的相关性。结果①缺血性卒中组患者血清胱抑素C水平为(1.20±0.40)mg/L,高于对照组的(0.86±0.23)mg/L,差异有统计学意义,P<0.05。随着病灶体积的增加,血清胱抑素C水平也升高,差异有统计学意义,F=10.447,P<0.05。②卒中复发组患者的血清胱抑素C水平为(1.33±0.52)mg/L,高于卒中初发组的(1.12±0.28)mg/L,差异有统计学意义,P<0.01。③血清胱抑素C水平与NIHSS评分无相关性,但高危组患者的胱抑素C水平[(1.37±0.68)mg/L]高于低危组的胱抑素C水平[(1.15±0.27)mg/L],差异有统计学意义,P<0.01。④血清胱抑素C水平与同型半胱氨酸(Hcy,r=0.189,P=0.022)和极低密度脂蛋白(r=0.255,P=0.002)呈正相关,与高密度脂蛋白(r=-0.173,p=0.036)呈负相关;⑤多因素Logistic回归分析显示,血清胱抑素C为缺血性卒中的危险因素(OR=2.646,95%CI.621～4.317,p<0.01)。结论血清胱抑素C水平升高是缺血性卒中的独立危险因素,与缺血性卒中病灶大小及严重程度有关,血清胱抑素C水平可作为缺血性卒中发生、发展及病情监测的参考指标。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C参考范围的设立及在糖尿病肾功能评价中的作用

目的确立本实验室半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)的参考范围和界定肾功能不全分期的Cys C水平。方法检测120名健康体检者Cys C水平,确立本实验室Cys C参考范围。选取200例血肌酐(Cr)为45～1 001μmol/L的样本,进行血清Cr、尿素(Urea)、尿酸(UA)和Cys C检测,了解Cys C与Cr的相关性;测定100例糖尿病患者的Cys C,了解其Cys C水平。结果本实验室健康人群Cys C参考范围为≤1.02 mg/L,Cys C与Cr的相关系数(r)为0.734 6,Cys C水平在2.18～3.15 mg/L和≥3.16 mg/L可分别作为界定肾功能不全氮质血症期和尿毒症期的衡量标准,糖尿病患者的Cys C水平明显高于一般人群。结论Cys C是衡量糖尿病患者肾功能状况的理想指标。