重组鸡白细胞介素-6-2融合蛋白对鸡T淋巴细胞和B淋巴细胞免疫活性的影响

为研究重组鸡白细胞介素-6-2融合蛋白（rChIL-6-Linker-ChIL-2）对鸡体免疫功能的影响,采用MTS法检测重组融合蛋白在28日龄SPF鸡体内接种后不同时间对外周血淋巴细胞（PBLC）中T淋巴细胞和脾B淋巴细胞增殖活性的影响,采用流式细胞术检测它对鸡PBLC中CD3＋CD4＋T淋巴细胞、CD3＋CD8＋T淋巴细胞百分含量及CD4＋/CD8＋比值的影响。结果显示,接种后第7~35天,重组融合蛋白可显著提高鸡体PBLC中T淋巴细胞和脾中B淋巴细胞的增殖活性,两者活性分别高于单一rChIL-2蛋白或单一rChIL-6蛋白对照、低于或接近于rChIL-6蛋白＋rChIL-2蛋白混合物。接种后第7~21天,重组融合蛋白可显著提高CD3＋CD4＋T淋巴细胞百分含量、降低CD3＋CD8＋T淋巴细胞百分含量,显著提高CD4＋/CD8＋比值,其活性显著高于单一rChIL-6蛋白或单一rChIL-2蛋白对照,但与rChIL-6蛋白＋rChIL-2蛋白混合组差异不显著。结果表明,重组融合蛋白在鸡体内可显著促进T、B淋巴细胞增殖,提高CD3＋CD4＋T淋巴细胞百分含量和CD4＋/CD8＋比值,从而增强鸡体的体液免疫和细胞免疫功能;重组融合蛋白在体内发挥了ChIL-6和ChIL-2的协同作用活性。

重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性评价方法研究

为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性。结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照。本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进一步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础。

重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白对鸡外周血T淋巴细胞亚群的影响研究

为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白）对SPF鸡外周血T淋巴细胞亚群含量影响,本研究采用流式细胞术对重组融合蛋白（第2组）和rChIFN-α蛋白（第3组）注射14日龄SPF鸡后不同时间对各试验组鸡外周血T淋巴细胞（PBLC）中CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分含量以及CD4^＋/CD8^＋比值进行检测。结果表明,与对照组相比,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白在鸡体内接种后3～14d均可明显提高鸡外周血T淋巴细胞中CD3^＋CD4^＋细胞百分含量,降低CD3^＋CD8^＋细胞的百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值;接种后3～7d期间,第2组鸡的CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋细胞含量及CD4^＋/CD8^＋比值与PBS对照组（第1组）相比差异均极显著（P〈0.01）,第3组与第1组相比差异均显著（P〈0.05）。以上结果表明,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白接种鸡体后均可显著影响鸡PBLC中淋巴细胞亚群百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值,增强机体的细胞免疫功能;重组融合蛋白对鸡淋巴细胞亚群百分含量、CD4^＋/CD8^＋比值影响程度和细胞免疫功能的增强作用优于rChIFN-α蛋白;重组融合蛋白在体内发挥了鸡α干扰素和白细胞介素-2对细胞免疫功能的协同增强作用。

重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的纯化及复性

目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具有生物学活性的融合蛋白纯度达到95%,复性回收率为80%。结论此包涵体分离纯化技术简便、实用,可为中试研究和规模化生产提供基础。

重组人白细胞介素-6融合蛋白的大肠杆菌发酵工艺

研究了重组大肠杆菌表达人白细胞介素-6(rhIL-6)融合蛋白的发酵工艺。摇瓶实验对比了不同培养基对重组菌密度和rhIL-6表达量的影响,确定了以含0.1%葡萄糖的2×YT培养基为最适培养基。同时,还对诱导剂异丙基疏基半乳糖苷(IPTG)加入量进行优化,按每升发酵液加入0.02mmol,就能有效诱导rhIL-6的表达。在10 L发酵罐间歇实验中,以含0.1%葡萄糖的2×YT为培养基,比较了溶氧、pH、诱导前培养时间、诱导后培养时间对rhIL-6的表达量和菌密度的影响,得到最优培养条件为pH为6.8～7.0,接种量4%,温度37℃,诱导前溶氧量30%,在O.D._(600)为1.2～1.8时加入IPTG诱导,控制诱导后溶氧为5%～10%,再培养5 h,最终rhIL-6表达量为38%,菌体密度为5.8 g/L。

抗HBsAg单链抗体与白细胞介素-2融合蛋白的构建与序列测定

目的:构建以人抗乙肝表面抗原（HBsAg）单链抗体（ScFv）为导向作用,白细胞介素-2（IL-2）为治疗作用的融合蛋白原核表达载体pQE 40/ScFv-IL-2。方法:应用PCR技术将抗HBsAg单链抗体与白细胞介素-2在分子水平上进行基因重组,构建中间载体pGEM7Zf（+）/ScFv-IL-2,经酶切鉴定及序列测定正确后,将目的基因片段克隆到pQE 40表达载体中,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达。结果:SDS-PAGE结果显示在相对分子质量约4.3×104Da处,可见蛋白表达带。以鼠抗人IL-2单克隆抗体经免疫印迹验证,该表达蛋白为所设计的融合蛋白。结论:融合蛋白ScFv-IL-2的成功构建及表达,为融合蛋白的纯化和研究开发新型的乙肝导向治疗的基因工程药物打下良好的基础。

重组抗体-白细胞介素2融合蛋白对重症免疫缺陷鼠人神经纤维瘤肝转移灶生长的抑制作用

临床试验表明，在神经纤维瘤患者中单独应用rh IL-2或鼠抗GD2与人的嵌台变异体ch14.18能通过激活LAK细胞或通过外周血单核细胞介导的ADCC作用杀死瘤细胞，通过基因工程将二者融合成为ch14．18-IL-2融台蛋白能特异地将rh IL-2导向肿瘤位点，抑制瘤细胞播散与生长的能力要比单独使用rh IL-2更有效。本研究选用人神经纤维瘤系SKN—AS细胞5×10^5／100μl PBS注入CB—17scid小鼠脾包膜下构建肝转移模型。

猪白细胞介素-6基因的原核表达及其活性研究

用DNA重组技术 ,将已克隆的猪IL - 6cDNA片段插入pGEX 1λT质粒 ,转化大肠杆菌 ,以BamHI和PstI酶切鉴定重组子 ,以IPTG诱导融合蛋白表达 ,并作RT PCR及SDS PAGE分析表达情况 ,从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白 ,用MTT法测定重组蛋白刺激小鼠脾淋巴母细胞增殖反应的活性 ,并免疫家兔制备高免血清 ,得到高效表达猪IL 6的质粒pGPIL 6 ,RT PCR确证 pGPIL 6在大肠杆菌中能正确转录 ,经SDS PAGE分析表达蛋白分子量为 4 9kD ,融合蛋白具有较高的促小鼠淋巴细胞增殖反应活性 ,以此免疫家兔 ,可制备滴度为 1∶12 80 0

重组白细胞介素2对固始鸡空肠黏膜免疫增强作用的研究

本试验旨在研究重组白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对固始鸡空肠黏膜免疫的作用。以父母代固始鸡为试验动物,用添加不同剂量的重组IL-2佐剂的鸡新城疫疫苗对试验鸡进行分组免疫,应用免疫组织化学技术,通过Qwin图像处理系统对鸡空肠内分泌型免疫球蛋白A(sIgA)阳性细胞及其分泌物分布和阳性面积量进行系统分析。结果表明,sIgA阳性细胞及其分泌物主要分布于肠绒毛的固有层和肠腺腔中。在新城疫疫苗组中添加重组IL-2能够提高sIgA细胞的分泌,从而提高动物体的免疫能力。重组IL-2对增强免疫性有一定的作用,且IL-2的添加剂量在50μg时对增加新城疫疫苗的免疫性效果最佳。

基于JAK/STAT信号通路探究重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果及机制

目的 基于Janus激酶(JAK)/信号转导与转录活性因子(STAT)信号通路探究重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果及机制。方法 选取2020年3月—2022年2月收治的毛细支气管炎患儿156例,依据治疗方案不同分为观察组和对照组2组各78例。观察组予重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗,对照组予乙酰半胱氨酸治疗。比较2组治疗7 d后临床效果及症状和体征消失时间、住院时间,治疗前及治疗7 d后JAK/STAT信号通路关键蛋白[干扰素调节因子9(IRF9)、信号转导与转录活性因子1(STAT1)和信号转导与转录活性因子2(STAT2)]表达及相关细胞因子[白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织型金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)]、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)水平,以及治疗期间不良反应发生率、治疗后6个月喘息复发率。结果 治疗7 d后,观察组总有效率、IRF9、STAT1、STAT2表达和Treg水平高于对照组;IL-6、MMP-9、TIMP-1和Th17水平低于对照组(P<0.01)。观察组咳嗽、喘憋、喘息、湿啰音消失时间及住院时间均短于对照组(P<0.01)。治疗期间,2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后6个月,观察组喘息复发率低于对照组(P<0.01)。结论 重组人干扰素α-2b联合乙酰半胱氨酸治疗毛细支气管炎患儿喘息反复发作效果显著,可促进症状、体征消失,加速康复进程,降低喘息反复发作风险;机制可能为其抑制IL-6释放,激活JAK/STAT信号通路,促使Th17向Treg转化,增强机体免疫应答,且调控MMP-9、TIMP-1表达,减轻支气管及肺损伤。

生物制剂对类风湿关节炎患者血清白细胞介素-2与肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-13表达的影响

目的探讨生物制剂对类风湿关节炎(RA)患者血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-13(IL-13)表达的影响。方法选择2018年1—12月医院收治的RA患者86例,按随机数字表法分为对照组和试验组,每组43例。对照组接受甲氨蝶呤治疗,试验组在对照组基础上加用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)治疗,比较两组的临床疗效和IL-2、TNF-α、IL-13水平及不良反应发生情况。结果试验组治疗有效率为93.0%,高于对照组的74.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,试验组IL-2(312.54±84.43)pg/ml、TNF-α(6.82±2.07)pg/ml、IL-13(4.86±1.52)pg/ml,均低于对照组的(429.84±97.51)pg/ml、(12.72±3.74)pg/ml、(6.13±1.87)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间仅对照组出现恶心/呕吐1例,未经对症处理自行恢复。结论RA患者接受rhTNFR:Fc治疗有助于下调血清IL-2、TNF-α及IL-13水平,抑制炎症反应,提升RA治疗效果,且药物不良反应较少。

重组人干扰素α-2b联合炎琥宁治疗手足口病患儿效果及对血清炎性因子、血浆免疫球蛋白水平影响

目的观察重组人干扰素α-2b联合炎琥宁治疗手足口病患儿效果及对血清炎性因子、血浆免疫球蛋白水平的影响。方法选取手足口病患儿110例作为研究对象,按照入院单双顺序号交替将其分为观察组和对照组两组各55例。观察组在常规治疗基础上给予重组人干扰素α-2b联合炎琥宁治疗,对照组在常规治疗基础上给予重组人干扰素α-2b治疗。两组均持续治疗1周。比较两组治疗后临床效果,治疗前后血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)及血浆免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)水平,以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后,观察组总有效率为87.27%显著高于对照组总有效率65.45%,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗前,两组血清炎性因子及血浆免疫球蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组血清IL-1β、IL-6及IL-10水平均较治疗前下降,血浆IgM、IgG、IgA水平均较治疗前升高,除对照组血浆IgM及IgG水平与治疗前比较差异无统计学意义外,余差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。治疗后,观察组血清IL-1β、IL-6及IL-10水平均低于对照组,血浆IgM、IgG及IgA水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗期间,两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人干扰素α-2b联合炎琥宁治疗手足口病患儿效果显著,可降低患儿血清炎性因子水平,提高其免疫力,且安全性较好。

IL－2和IL－6融合蛋白的分子生物学特性的研究

本文应用酶联免疫吸附技术对ＩＬ－６／２融合蛋白（ＦＰＩＬ－６／２）进行了定性、定量分析，测定其等电点，并对该蛋白的表位、柔性和抗原性进行了计算机模拟。ＥＬＩＳＡ测试结果表明：融合蛋白ＩＬ－６／２含有ＩＬ－２和ＩＬ－６两个结构域，可分别与ＩＬ－２和ＩＬ－６单克隆抗体结合，且两个结合无明显空间排阻效应，这与计算机的表位、柔性和抗原性分析结果一致。从计算机模拟也可以看出ＦＰＩＬ－６／２的抗原性与ＩＬ－２和ＩＬ－６的一致性，而且接头区抗原性较低，这为该蛋白的实际临床应用提供了一定的保证。

鸡白细胞介素-6-2嵌合基因的融合表达及其表达产物活性的研究

为研制具有鸡白细胞介素-6、2(ChIL-6,ChIL-2)协同免疫增强作用的鸡基因工程复合免疫增强剂,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法将ChIL-6和ChIL-2基因构建成ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因;对嵌合基因进行原核表达,采用自行创新的专利纯化方法对表达的rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白(重组融合蛋白)进行纯化。采用间接ELISA方法检测重组融合蛋白分别与抗ChIL-6、抗ChIL-2单克隆抗体的特异性免疫反应活性,采用MTS法检测重组融合蛋白体外促鸡外周血T淋巴细胞和脾淋巴细胞的增殖活性。结果显示,成功构建了ChIL-6-linker-ChIL-2嵌合基因及其重组表达质粒rpQE-30-ChIL-6-linker-ChIL-2,表达的重组融合蛋白的分子质量约为40ku,纯化后的纯度在96%以上。该重组融合蛋白可分别与抗ChIL-6、抗ChIL-2单克隆抗体发生特异性免疫反应,并具有显著的促鸡外周血T淋巴细胞和脾淋巴细胞增殖活性,其活性优于任一重组蛋白对照。本研究结果初步证明了rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白在对鸡免疫细胞的增殖作用方面与rChIL-6和rChIL-2蛋白的作用相似,为进一步研究rChIL-6-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内的活性奠定了基础。

重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)对传染性法氏囊灭活疫苗的免疫增强机理研究

为了评价重组鸡白细胞介素-6（rChIL-6）蛋白在鸡体内的免疫增强作用机理,本研究将40只7日龄健康SPF鸡随机平均分为4组以进行rChIL-6蛋白对鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）灭活疫苗免疫增强作用试验,于14日龄时进行免疫接种和rChIL-6蛋白注射。分别检测4组鸡免疫前和免疫后不同时间血清中IBDV抗体水平、不同细胞因子表达水平、脾淋巴细胞增殖活性和外周血T淋巴细胞增殖活性等指标以揭示rChIL-6蛋白在机体内对疫苗的免疫增强机理。结果表明：免疫后7~49d,rChIL-6蛋白与IBDV灭活疫苗共免疫组（第4组）鸡血清中IBDV抗体水平极显著高于IBDV灭活疫苗对照组（P〈0.01）;免疫后7~35d,第4组鸡血清中的白细胞介素-4、6、2（ChIL-4、ChIL-6、ChIL-2）和γ干扰素（ChIFN-γ）等4种细胞因子的表达水平极显著高于其他3组对照组（P〈0.01）,α干扰素（ChIFN-α）的表达水平于免疫后14~35d期间极显著高于其他3组对照鸡（P〈0.01）;rChIL-6蛋白单独应用后可显著提高机体的ChIL-4、ChIL-6和ChIL-2的表达水平,但对ChIFN-γ、ChIFN-α的表达水平无明显影响。免疫后7~14d,第4组鸡的脾淋巴细胞增殖活性显著高于其他3组对照鸡（P〈0.01）;免疫后7~21d,第4组鸡的外周血T淋巴细胞的增殖活性稍高于其他3组对照组（P〉0.05）。结果表明,rChIL-6在体液免疫和细胞免疫水平对鸡传染性法氏囊灭活疫苗免疫后均具有免疫增强作用;对机体体液免疫应答的增强能力高于细胞免疫应答。

共表达中国株HIV-1gp120与hIL-6的重组鸡痘病毒研究

目的 构建共表达中国株HIV 1gp12 0与人白细胞介素 6 (IL 6 )的重组鸡痘病毒。方法分别将HIV 1gp12 0基因和hIL 6基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTAL复合启动子ATI P7.5和P7.5串联启动子下游 ,构建重组鸡痘病毒表达质粒pUTA GP IL6。利用脂质体法将重组质粒和鸡痘病毒2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞。经BUdR加压筛选 3次后 ,重组病毒分别用PCR、间接免疫荧光试验和Westernblot进行鉴定 ,并进行小鼠免疫研究。结果 重组病毒基因组中可扩增出 1.4kb大小片段 ,重组病毒感染细胞表面有绿色荧光物质 ,表达产物的Westernblot分析表明重组病毒可表达gp12 0和hIL 6蛋白。重组病毒可刺激小鼠产生特异性体液免疫应答。结论 成功构建了共表达中国株HIV 1gp12 0与hIL 6的重组鸡痘病毒 ,为研制HIV 1基因工程活载体疫苗提供有益的资料。

THE ROLE OF RECOMBINANT HUMAN FUSION PROTEIN IL－6／IL－2（CH925） IN HEPADNA VIRUS INFECTION TREATMENT

ＴＨＥＲＯＬＥＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＨＵＭＡＮＦＵＳＩＯＮＰＲＯＴＥＩＮＩＬ－６／ＩＬ－２（ＣＨ９２５）ＩＮＨＥＰＡＤＮＡＶＩＲＵＳＩＮＦＥＣＴＩＯＮＴＲＥＡＴＭＥＮＴＭｉＺｈｉｂａｏ（米志宝），ＺｈａｏＣｈｕｎｈｕａ（赵春华），ＺｈａｎｇＸｉｔ...

冻干重组人脑利钠肽联合芪苈强心胶囊序贯治疗对急性失代偿性心力衰竭患者疗效及心功能的影响

目的 探讨冻干重组人脑利钠肽联合芪苈强心胶囊序贯治疗对急性失代偿性心力衰竭患者临床疗效、心功能及血清嗜铬粒蛋白A(CgA)降解片段vasostatin-2(VS-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法 选取2017年1月至2019年1月在河北医科大学第二医院确诊并接受治疗的120例急性失代偿性心力衰竭患者为研究对象,随机分为两组,对照组和观察组各60例。对照组在常规对症治疗的基础上给予冻干重组人脑利钠肽治疗,观察组在对照组基础上联合芪苈强心胶囊序贯治疗。比较两组临床疗效,评估患者治疗前后心功能指标左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)及血清指标VS-2、VEGF、TNF-α、IL-6水平的变化情况。结果 观察组治疗后总有效率高于对照组,两组间比较差异具有统计学意义(χ^(2)=5.926,P <0.05)。治疗后,两组患者LVEDD均比治疗前减小,LVEF均比治疗前升高(P <0.05);且治疗后观察组LVEDD远小于对照组,LVEF远高于对照组(t=5.557、8.095,P <0.05)。与治疗前相比,治疗后两组患者血清VS-2水平均升高,血清VEGF、TNF-α、IL-6水平均降低(P <0.05);且治疗后观察组血清VS-2水平明显高于对照组,血清VEGF、TNF-α、IL-6水平明显低于对照组(t=6.617、10.035、25.053、5.495,P <0.05)。结论冻干重组人脑利钠肽序贯芪苈强心胶囊治疗急性失代偿性心力衰竭疗效好,能够明显改善患者心功能,降低炎症因子水平。

Hyper－白细胞介素－6与肝脏疾病

利用基因工程技术，将具有相互作用的两种细胞因子重组为一种独特的融合细胞因子，这种分子往往可发挥超越单因子的生物学活性和（或）具有其它特殊生物学功能。Hyper-IL-6是Fischer等依据已知的关于膜结合和可溶性白细胞介素6受体（SIL-6R）的结构信息设计的一种“设计细胞因子”（designer cytokines），即将人类白细胞介素6（IL-6）基因与截短形式的SIL-6R基因通过基因操作共价连接，并在真核细胞进行表达得到的一种具有超高效活性的融合蛋白，近年研究发现其在肝脏疾病中发挥重要作用。