IEF纯化重组A型肉毒毒素保护性抗原

在大肠杆菌中高效表达的重组A型肉毒毒素保护性抗原 (rBoNTaH46 8) ,是以包涵体形式存在 .将表达菌株发酵后 ,裂解菌体 ,制备包涵体 ,溶解后的包涵体溶液经样品处理 ,通过等电聚焦制备型电泳纯化 .纯化的重组A型肉毒毒素保护性抗原 (rBoNTaH46 8)纯度高于 90 %,产量及回收率高 .纯化的重组表达产物酶联检测具有结合活性 ,这为下一步A型肉毒毒素抗毒素的研制打下基础 .

一种检测A型肉毒毒素的高灵敏度酶联免疫吸附法

目的:建立检测A型肉毒毒素的酶联免疫吸附法。方法:利用重组A型肉毒毒素重链羧基端片段作为免疫原和B淋巴细胞杂交瘤技术,获得了56株高亲和力的抗A型肉毒毒素单克隆抗体(mAb),建立了检测A型肉毒毒素的双mAb夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。结果:该方法理论检测下限达到了8.34 pg/mL,检测天然A型肉毒毒素制剂时其实际检测下限可达0.78 LD50/mL,与其他型别的肉毒毒素均未见交叉反应。通过测定基质中的回收率,发现基质中的相关的蛋白对检测具有较大的影响。结论:该方法具有灵敏度高,特异性好,使用方便等优点,具有较高的的实用价值。