利用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体

目的:采用一种简单易行的纯化方法获得高纯度α-半乳糖苷酶单克隆抗体。方法:使用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶捕获和纯化小鼠腹水中的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结果:获得了高纯度、高效价的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结论:应用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体是一种简单、有效的方法。

结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白抗原诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究

目的 :结核分枝杆菌重组Ag85A抗原诱发豚鼠迟发型超敏 (DTH)反应。Ag85A剂量、观察时间对DTH的影响。方法 :常规皮肤实验法 :灭活H37Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5IUPPD标准品为阳性对照 ,0 .1、0 .2、0 .4、0 .6、0 .8及 1.0 μg重组抗原分别于背部皮内注射 ,注射后 2 4、4 8及 72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5IUPPD及 0 .4、0 .6、0 .8、1.0 μgAg85A抗原 ,以轮圈法注射于同一只豚鼠背部一侧 ,每批 6只 ,共 3批。于注射后 2 4、4 8、72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。结果 :常规皮肤试验 0 .1、0 .2 μg重组Ag85A抗原诱发DTH的平均直径与PPD相比有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,而 0 .4、0 .6、0 .8、1.0重组Ag85A抗原诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比 ,无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,2 4h平均直径显著高于 4 8h平均直径 (P <0 .0 5 ) ,2 4h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后结果与常规皮肤试验结果一致。结论

重组猪卵透明带抗原pZP3α在毕赤酵母中的分泌表达

为制备rpZP3a蛋白供发展避孕疫苗研究，将编码天然提取pZP3a上的DNA序列（446—1423）插入至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZaA上，重组质粒pPICZaA—pZP3a线性化后通过电穿孔转入毕赤酵母GS115，经抗生素Zeoein筛选获得工程菌。在2L发酵罐中，用甲醇诱导工程菌进行高密度发酵生产rpZP3a。分离浓缩发酵上清液，通过螯合铜离子的亲和柱纯化rpZP3a，用SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定，以Quantity One软件对rpZP3a进行定量分析并计算纯度和回收率。用rpZP3a免疫家兔，以ELISA法和间接免疫荧光法检测抗血清对rpZP3a和猪卵透明带的抗体反应。获得了分泌表达rpZP3a的工程菌，其高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pZP3抗体反应的46kD成分，命名为rpZP3a，平均产量为8mg／L，纯度达92％。回收率为63％。用其免疫家兔获得抗rpZP3a抗血清，ELISA测定显示能与rpZP3a和天然提取pZP3反应。间接免疫荧光法分析显示抗rpZP3a抗血清能与猪卵透明带反应，产生亮绿荧光。用酵母表达系统成功表达了rpZP3a，该蛋白保留有天然pZP3的免疫活性。

人重组WNT5a联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca-8113 细胞活性的 影响及其机制

目的观察人重组WNT5a蛋白(rWNT5a)联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞活性的影响并初步探寻其分子机制。方法 MTT检测rWNT5a+顺铂对Tca-8113细胞增殖的影响,TUNEL法检测rWNT5a+顺铂对Tca-8113细胞凋亡的影响,Western blot检测WNT通路相关蛋白β-catenin、GSK3β、LEF-1及自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ的表达,免疫荧光观察WNT5a表达的变化。结果 r WNT5a+顺铂组与顺铂或r WNT5a单独处理组相比,明显抑制舌癌细胞增殖并促进其凋亡(P<0.05)。舌鳞状细胞癌中顺铂组与空白对照组相比,激活了自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ(P<0.05),而r WNT5a+顺铂组与顺铂组相比,明显抑制了自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ的表达(P<0.05)。顺铂组与空白对照组相比,明显上调WNT通路相关蛋白β-catenin、GSK3β、LEF-1的表达(P<0.05)。rWNT5a+顺铂组或rWNT5a组与顺铂组相比,明显抑制了WNT通路相关蛋白β-catenin、GSK3β、LEF-1(P<0.05)。结论舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞中应用rWNT5a+顺铂比单独应用顺铂明显抑制舌癌细胞增殖并促进其凋亡,其内在机制可能与r WNT5a调控WNT通路和抑制自噬有关。

基因工程产物A蛋白的纯化及作为亲和配基的初步应用

A 蛋白原是一种由金黄色葡萄球菌分泌的蛋白质,作为 IgG 的 Fc 受体已被广泛用于免疫学等领域的研究,并可作为亲和配基来分离免疫球蛋白。为了克服天然 A蛋白的某些缺陷,本实验室克隆了 A 蛋白基因并在大肠杆菌中得到表达。本文采用离子交换、疏水色谱等手段,从工程菌中提取到高纯度的 A 蛋白结构域的活性片段,它与天然 A 蛋白具有相同的 IgG 结合特性,并可作为亲和配基用于单抗和多抗的纯化。