重组C因子法检测4种生物制剂中细菌内毒素的方法学研究

目的:考察重组C因子法对生物制剂适用性,建立该方法检测细菌内毒素的质量标准。方法:选取2种代表性的生物重组制剂和2种单克隆抗体制剂,进行重组C因子干扰试验,并用原标准规定的细菌内毒素检查法进行对比实验。按照《中国药典》2020年版四部附录1143细菌内毒素检查法干扰试验的规定,与原检测法的结果进行对比。结果:4种生物制剂回收率均在《中国药典》规定的50%~200%范围内,符合药典规定,并与原实验结果一致。结论:本研究为重组C因子检测生物制剂中的细菌内毒素的方法学和标准的建立提供了实验依据。

重组C因子检测银杏叶提取物注射液细菌内毒素的方法学研究

目的:建立银杏叶提取物注射液的重组C因子细菌内毒素检测方法。方法:使用重组C因子法进行细菌内毒素方法学研究,并用鲎试剂动态显色法、家兔法对银杏叶提取物注射液进行对比研究。结果:金纳多注射液稀释至400倍及以下浓度进行试验,回收率均在《中国药典》规定的50%~200%范围内,符合药典规定,并与动态显色法和热原法结果一致。结论:本研究为重组C因子检测中药注射液细菌内毒素的方法学和标准的建立提供了实验依据。

重组C因子法用于维生素B_(6)注射液细菌内毒素检测的研究

目的:探讨重组C因子法用于维生素B_(6)注射液中细菌内毒素检测的可行性。方法:分别使用凝胶法和重组C因子法对维生素B_(6)注射液中细菌内毒素的检测进行方法学研究。结果:凝胶法干扰试验结果显示,不同厂家生产的维生素B_(6)注射液,以及使用不同厂家的鲎试剂,干扰试验结果差异较大。重组C因子法用于维生素B_(6)注射液细菌内毒素检测的结果显示,样品稀释50~400倍时,回收率均符合规定。结论:使用凝胶法对维生素B_(6)注射液中的细菌内毒素进行检测可能存在较大干扰;经过方法学研究,重组C因子法可以用于维生素B_(6)注射液中细菌内毒素的检测。

重组C因子法检测细菌内毒素的方法适用性研究

目的考察重组C因子法的品种适用性,以加快该方法的推广。方法选取有代表性的6个典型品种,每个品种3个批次,进行重组C因子法干扰试验,并经过国内4个实验室进行复核验证。以回收率为评价指标,以2015年版《中国药典》为评价标准,总结4个实验室应用该方法产生的问题和解决策略。结果 6个品种18个批次在验证实验室和3个复核实验室的回收率结果均在《中国药典》要求的50%～200%范围内,符合干扰试验要求;该方法应用中的常见问题和解决策略共有7项21条。结论重组C因子法在国内4个实验室对6个典型品种具有较好的品种适用性。

重组C因子细菌内毒素检测法应用于医疗器械的建议

细菌内毒素是药品、生物制品和医疗器械等产品重要控制指标之一,文章分析了经典方法(鲎试剂法)检测细菌内毒素面临的困难,并对新方法(重组C因子检测法)的必要性以及国内外对此方法的研究进展进行了综述,进一步结合医疗器械产品内毒素的控制指标,提出重组C因子法应用于医疗器械内毒素检测的建议。

重组C因子法检测猪源纤维蛋白贴DBT细菌内毒素

目的采用重组C因子法建立用于定量检测猪源纤维蛋白贴DBT的检测细菌内毒素方法。方法分别采用凝胶法和重组C因子法对猪源纤维蛋白贴DBT进行细菌内毒素检查。结果猪源纤维蛋白贴DBT稀释8倍后,使用Lonza和Hyglos的细菌内毒素重组C因子检测试剂盒进行干扰试验,回收率均在50%~200%之间,符合中国药典2020年版9251的规定,其限值为<3 EU·mg^(-1)。采用细菌内毒素重组C因子试剂盒按上述标准对10批猪源纤维蛋白贴DBT进行细菌内毒素检查,结果与细菌内毒素凝胶法检测结果相一致。重组C因子更有利于排除干扰,且更方便进行细菌内毒素的定量测定。结论重组C因子法能有效检测猪源纤维蛋白贴DBT的细菌内毒素,有望成为凝胶法检测的替代方法。

细菌内毒素重组C因子检测方法的验证

目的验证细菌内毒素重组C因子检测法。方法根据《中国药典》四部(2015版)9101药品质量分析方法验证指导原则的规定,对细菌内毒素重组C因子检测法(Lonza和Hyglos两种试剂盒)的线性范围、准确度、精密性、专属性、检测限及耐用性进行验证,并与动态显色法进行比较。结果2种方法在内毒素标准品为0.005~5 EU/mL范围内与logδRFU均呈良好的线性关系,r均>0.980;高、中、低浓度内毒素标准品2种方法检测回收率的平均值差异均无统计学意义(P>0.05);精密度各有优劣,总体相当;重组C因子不与β-葡聚糖发生反应,动态显色法检测β-葡聚糖浓度为0.55 EU/mL;检测限均为0.005 EU/mL;斜率和实测值不受增益值改变的影响,截距和增益值呈正相关。结论重组C因子法具有良好的准确度、精密性、专属性及耐用性,可应用于生物制品的细菌内毒素检查。

重组C因子法检测福沙匹坦二葡甲胺中细菌内毒素的方法学研究

目的建立福沙匹坦二葡甲胺的细菌内毒素检测方法。方法使用凝胶法、动态显色法、重组C因子法对福沙匹坦二葡甲胺进行方法学研究。结果凝胶法在检测浓度范围内结果均为阳性结果,不符合凝胶法进行干扰实验的前提。动态显色法中,出现了不同稀释倍数回收率符合药典规定的情况下,内毒素检测结果差异极大(结果差异>200倍),使用了抗增液仍存在该问题。重组C因子法中,当样品浓度<0.0625mg·mL^(-1)即不存在干扰作用并且不存在上述问题,结果符合规定。结论福沙匹坦二葡甲胺无法使用经典的凝胶法和动态显色法进行内毒素检测。重组C因子法经过方法学研究,可以用于福沙匹坦二葡甲胺的内毒素质量控制。

重组C因子法检测氢氧化铝佐剂细菌内毒素的适用性

目的建立氢氧化铝佐剂细菌内毒素的重组C因子检测方法。方法参照中国药典2020年版四部载录的重组C因子法,通过灵敏度试验、标准曲线可靠性验证、稀释法排除干扰、重复试验,建立氢氧化铝佐剂的内毒素定量检测方法。结果通过灵敏度试验,筛选出合适的96孔反应微板。标准曲线可靠性验证试验检测3批试剂,决定系数均大于0.980。干扰试验中通过稀释法排除氢氧化铝对检测的干扰。对Alhydrogel®2%、国药中生生物技术研究院生产的氢氧化铝佐剂进行3次重复试验,未检测到内毒素。检测这两个生产厂家的氢氧化铝佐剂共13批,回收率均在50%~200%范围内,结果符合中国药典规定。结论重组C因子法检测氢氧化铝佐剂具有良好的灵敏度、可靠性、重复性及抗干扰能力,可应用于氢氧化铝佐剂的细菌内毒素检测。

双特异性抗体药物细菌内毒素检查法的建立

内毒素大量存在于药物中会对人体造成严重的危害,对此,文章建立了双特异性抗体药物细菌内毒素的检测方法,并使用重组C因子法进行内毒素检测的方法学研究。结果显示,内毒素含量在0.1~2.5 EU/mL范围内时与荧光信号强度呈现出良好的线性关系;3种浓度下内毒素检测回收率范围在88%~120%以内;该方法的精密度和耐用性良好;重组C因子不与β-葡聚糖发生反应。该方法适用于双特异性抗体药物细菌内毒素的质量控制,打破了凝胶法检测的局限。

细菌内毒素检查法研究进展

细菌内毒素广泛存在于人们的生活中,可引起人体发热、白细胞减少、微循环障碍、内毒素休克、弥散性血管内凝血等症状,在药品生产过程中不可避免地会引入细菌内毒素,所以药品质量控制中对内毒素的检测尤为重要。目前,细菌内毒素的检测方法有家兔热原试验法、鲎试剂法、微量凝胶法、重组C因子法、酶联免疫法等检测方法。文章对这几种检测方法进行综述,比较各自的优缺点,以期为内毒素的检测提供更合理有效的方法。

热原检测的新时代

热原是能引起机体发热的生物源性物质。研究最深入的热原是革兰阴性菌细胞壁上的脂多糖 (L PS,亦称内毒素 ) ,内毒素是普遍存在的致病分子 ,对制药业和医学界是一种热原。基于鲎变形细胞裂解物 (L AL)的内毒素检测方法已在注射制剂和医疗器械质控中应用达 2 5年之久 ,但鉴于该方法本身的缺点及鲎来源有限 ,亟需一种替代热原检测方法。重组 C因子 (r FC)开创了热原检测的新时代 ,其机理是内毒素激活 r FC酶原 ,活化的 r FC水解合成的底物 ,生成可检测的产物(产物的量与内毒素成正相关 ) 。

细菌内毒素检查新方法进展

细菌内毒素检查法(鲎试验法)作为检验药品、植入医疗器械中细菌内毒素污染的一种经典方法,广泛应用于药品检验、科研工作。本文综述了该方法的最新方法重组C因子法的相关进展,并且与经典的细菌内毒素检查法、热原检查法和体外热原检查法进行了优缺点比较,并对这种方法的发展做了展望。

中国药典2020年版细菌内毒素检查法补充方法应用研究

目的为了促进中国药典使用者对新增的内毒素检查方法的理解,保障中国药典2020年版顺利执行,介绍重组C因子法和微量凝胶法起草背景、增订和应用的相关内容。方法结合9251细菌内毒素检查法应用指导原则和重组C因子与微量凝胶法的研究,梳理2种方法相关内容。结果结合内毒素检查法与鲎资源现状以及补充方法分类,讨论重组C因子法和微量凝胶法简介、应用现状及使用,详细介绍2种补充方法。结论按照中国药典的要求使用重组C因子法和微量凝胶法,可缓解鲎资源短缺带来的问题,保障注射剂的质量安全。