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日本血吸虫重组GST抗原对水牛的保护性研究 被引量:4
1
作者 罗新松 刘述先 +6 位作者 何永康 喻鑫玲 林金莲 宋光承 徐裕连 李毅 李岳生 《实用预防医学》 CAS 1996年第4期214-215,共2页
在日本血吸虫病非流行区,选无疫水接触史,8个月龄左右的水牛,用日本血吸虫重组GST抗原进行免疫观察对水牛的保护性。结果显示,攻击感染血吸虫尾蚴后,实验组比对照组平均虫荷减少22.3%,粪卵EPG差异有显著意义,毛蚴孵... 在日本血吸虫病非流行区,选无疫水接触史,8个月龄左右的水牛,用日本血吸虫重组GST抗原进行免疫观察对水牛的保护性。结果显示,攻击感染血吸虫尾蚴后,实验组比对照组平均虫荷减少22.3%,粪卵EPG差异有显著意义,毛蚴孵出率降低近40%,肝、肠组织血吸虫卵沉积量减少47.94%~56.83%。 展开更多
关键词 重组gst 保护性免疫 水牛 日本血吸虫
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重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病效果的研究 被引量:1
2
作者 何永康 刘述先 +7 位作者 罗新松 张新跃 宋光承 徐裕信 喻鑫玲 杨瑞青 林金莲 陈焱 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期87-90,共4页
目的 研究重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病的效果。方法 在洲垸亚型血吸虫病流行区 ,选择两个村居民役用水牛 ,试验组 96头水牛免疫重组GST抗原 ,对照组 90头水牛不免疫作对照 ;观察两组水牛血吸虫感染率、湖洲感染性钉螺... 目的 研究重组GST抗原对水牛的保护性及其防制血吸虫病的效果。方法 在洲垸亚型血吸虫病流行区 ,选择两个村居民役用水牛 ,试验组 96头水牛免疫重组GST抗原 ,对照组 90头水牛不免疫作对照 ;观察两组水牛血吸虫感染率、湖洲感染性钉螺密度等的变化。结果 试验组免疫 2 0个月后检测水牛 5 6头 ,感染率为 5 36 % ,比免疫前 (13 5 4 % )下降了6 0 4 1% ,比对照组同期 (16 6 7% )低 6 7 85 % ,试验组外洲易感地带感染性钉螺密度较免疫前降低了 71.4 3%。居民血吸虫感染率基本无变化。结论 水牛免疫重组GST抗原能产生一定的保护力 ,对降低水牛血吸虫病情有明显作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 重组gst 水牛 免疫保护
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抗重组GST单克隆抗体的制备及其在融合蛋白纯化中的应用 被引量:9
3
作者 严馨蕊 鲍永利 +1 位作者 董学斌 柳忠辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期365-367,共3页
目的制备抗重组GST的单克隆抗体(mAb), 并用来纯化重组GST融合蛋白。方法用含重组GST融合蛋白基因的pGEX4T -1质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导GST融合蛋白表达,亲和层析和凝胶过滤法分离表达的重组GST融合蛋白。以此蛋白作为抗原,免疫B... 目的制备抗重组GST的单克隆抗体(mAb), 并用来纯化重组GST融合蛋白。方法用含重组GST融合蛋白基因的pGEX4T -1质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导GST融合蛋白表达,亲和层析和凝胶过滤法分离表达的重组GST融合蛋白。以此蛋白作为抗原,免疫Balb/c小鼠,按传统的杂交瘤技术制备mAb。将抗GST mAb经Protein A纯化后,与Sepharose 4B偶联。结果经3次亚克隆后,获得两株分泌抗GST载体特异性mAb的杂交瘤。采用该mAb对两种不同的GST融合蛋白进行亲和层析纯化后,经SDS-PAGE鉴定达到了商品化Glutathione-Resin的亲和层析纯化效果。结论用抗GST蛋白特异性mAb亲和层析纯化融合蛋白是一种经济、实用的方法,且可用于Glutathione-Resin亲和层析纯化后的二次纯化。 展开更多
关键词 重组gst单克隆抗体 制备 融合蛋白纯化
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重组日本血吸虫26 kDa GST抗原免疫水牛后抗体动态及免疫保护性效果 被引量:5
4
作者 何永康 宋光承 +5 位作者 刘述先 罗新松 张新跃 徐裕信 喻鑫玲 杨瑞青 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期265-267,共3页
目的 观察重组日本血吸虫 2 6kDaGST抗原 (reSjc2 6GST)免疫役用放养水牛 (简称水牛 )后抗体动态及免疫保护性的效果。 方法 试验组 96头水牛 ,用reSjc2 6GST免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,3次剂量分别为 0 2、 0 2和 0 1mg。对照组 9... 目的 观察重组日本血吸虫 2 6kDaGST抗原 (reSjc2 6GST)免疫役用放养水牛 (简称水牛 )后抗体动态及免疫保护性的效果。 方法 试验组 96头水牛 ,用reSjc2 6GST免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,3次剂量分别为 0 2、 0 2和 0 1mg。对照组 90头水牛不作免疫 ;观察 2组水牛免疫前及免疫后 2、 5、 9、 12、 15和 2 0个月的抗体水平及血吸虫感染率的变化。 结果 试验组机体产生特异性抗reSjc2 6GST抗体 ,其抗体水平呈明显的梯形升高趋势。试验组免疫后 2 0个月血吸虫感染率比免疫前下降了 62 2 % ,比同期对照组低 67 7%。 结论 用reSjc2 6GST免疫水牛能产生特异性抗体 ,在免疫后 2 0个月内维持较高水平 ,有一定的抗血吸虫自然感染的保护力。 展开更多
关键词 血吸虫 重组gst抗原 保护性 抗体水平 日本血吸虫
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血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠血清NO浓度的影响 被引量:15
5
作者 李文桂 石佑恩 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期272-274,共3页
目的研究血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠血清 NO浓度的影响。方法第 1次实验用 10 6 和 10 8CFU疫苗分别皮下注射免疫 BAL B/C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴攻击 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组 ;第 2次实验用 10 6 ... 目的研究血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠血清 NO浓度的影响。方法第 1次实验用 10 6 和 10 8CFU疫苗分别皮下注射免疫 BAL B/C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴攻击 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组 ;第 2次实验用 10 6 CFU疫苗皮下和静脉分别注射免疫鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,分离血清 ,用 NO试剂盒检测小鼠血清 NO浓度。结果发现疫苗免疫 ,尾蚴攻击后血清 NO浓度降低 ;疫苗皮下和静脉注射免疫后 4~ 16周血清 NO浓度升高 ,分别于免疫后 10周或 16周达最高水平。结论血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗能降低感染鼠血清 NO浓度 ,提高宿主抗血吸虫感染的保护力。 展开更多
关键词 血吸虫病 血吸虫重组BCG-Sj26gst疫苗 一氯化氮
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日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG抗体反应的动态观察 被引量:3
6
作者 李文桂 石佑恩 韩家俊 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2001年第1期4-6,共3页
目的:检测日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠不同时间后的IgG抗体。方法:将106CFU疫苗采用皮下和静脉注射分别免疫BABL/C鼠,分别于免疫后0、4、8、10、14和16周各剖杀4只,收集血清,常规ELISA法检测IgG抗体,同时设PBS皮下注... 目的:检测日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠不同时间后的IgG抗体。方法:将106CFU疫苗采用皮下和静脉注射分别免疫BABL/C鼠,分别于免疫后0、4、8、10、14和16周各剖杀4只,收集血清,常规ELISA法检测IgG抗体,同时设PBS皮下注射对照组。结果:皮下注射组和静脉注射组IgG抗体水平都于免疫后4周显著增加,免疫后10周达最高水平,并持续在较高水平至免疫后16周。疫苗免疫后10周静脉注射组的抗体水平显著高于皮下注射组。结论:日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗静脉注射免疫效果优于皮下注射。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组BCG-Sjff26gst疫苗 IGG抗体 小鼠
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日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠血清IgG及其亚类免疫应答的研究 被引量:6
7
作者 李文桂 石佑恩 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2000年第6期340-342,共3页
目的 研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗接种小鼠 ,尾蚴攻击后诱导的血清 Ig G及其亚类变化。方法 采用 10 6 CFU和 10 8CFU疫苗皮下接种 BAL B/ C鼠 ,接种后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周扑杀小鼠 ,收集血清 ,... 目的 研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗接种小鼠 ,尾蚴攻击后诱导的血清 Ig G及其亚类变化。方法 采用 10 6 CFU和 10 8CFU疫苗皮下接种 BAL B/ C鼠 ,接种后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周扑杀小鼠 ,收集血清 ,用常规 EL ISA法检测 Ig G及其亚类。结果 疫苗免疫后 8周血清 Ig G水平明显升高 ;疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 6周血清 Ig G2 a显著增加 ,但 Ig G1 和Ig G2 b无明显变化。结论 日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗可能诱导宿主产生高水平的 Ig G和Ig G2 a。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组Si26gst疫苗 IGG IGG亚类
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血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠保护性免疫力的影响因素 被引量:4
8
作者 李文桂 石佑恩 宁长修 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期177-179,共3页
目的 探讨血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠保护性免疫力的影响因素。方法 将实验动物随机分为 8组 ,以免疫后不同攻击感染时间 ,不同免疫途径和不同免疫次数为主要参数。结果 各实验组减虫率为 2 9.6 9%~ 39.74% ,减卵率为 37.... 目的 探讨血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠保护性免疫力的影响因素。方法 将实验动物随机分为 8组 ,以免疫后不同攻击感染时间 ,不同免疫途径和不同免疫次数为主要参数。结果 各实验组减虫率为 2 9.6 9%~ 39.74% ,减卵率为 37.0 2 %~ 6 2 .86 % ,各实验组减虫率和减卵率与对照组相比 ,差异均有显著意义(P <0 .0 5 )或极显著意义 (P <0 .0 1)。结论  8周 。 展开更多
关键词 血吸虫重组BCG-Sj26gst疫苗 保护力 日本血吸虫
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日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态观察及免疫保护力的研究 被引量:2
9
作者 白丽娟 王瑜 +4 位作者 吴亮 李文桂 韩家俊 宁长修 石佑恩 《同济医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期4-6,共3页
为检测血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗免疫小鼠血清 Ig G动态变化和免疫保护力 ,采用 10 6 CFU疫苗皮下 1次和 3次接种小鼠 ,接种后 8周用日本血吸虫尾蚴攻击感染。感染后 6周剖杀小鼠 ,计算减虫率和减卵率 ,同时设有 BCG对照组。结果发... 为检测血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗免疫小鼠血清 Ig G动态变化和免疫保护力 ,采用 10 6 CFU疫苗皮下 1次和 3次接种小鼠 ,接种后 8周用日本血吸虫尾蚴攻击感染。感染后 6周剖杀小鼠 ,计算减虫率和减卵率 ,同时设有 BCG对照组。结果发现 :实验组免疫后血清 Ig G抗体迅速升高并持续于高水平 ;减虫率分别为 39.74%和 39.74% ,减卵率分别为 6 2 .86 %和 5 5 .6 2 % ,与对照组相比均有非常显著的差异 (P<0 .0 1)。而免疫 3次和免疫 1次小鼠血清 Ig G抗体水平及减虫率、减卵率均无显著差异。血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗皮下注射 1次即能诱导小鼠较高水平的 Ig G抗体和免疫保护力 ,是一种比较理想的新型疫苗 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组BCG-Si26gst疫苗 保护力 IGG抗体
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重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠sIL-2R和IFN-γ的变化 被引量:5
10
作者 李文桂 石佑恩 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期9-12,共4页
目的研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞 s IL- 2 R和 IFN- γ的影响。方法第 1次实验采用 1× 10 6 和 1× 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/ C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,... 目的研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞 s IL- 2 R和 IFN- γ的影响。方法第 1次实验采用 1× 10 6 和 1× 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/ C鼠 ,免疫后 8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6周剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组。第 2次实验用 1× 10 6 CFU疫苗皮下和静脉注射分别免疫小鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,分离脾脏 ,用 Sj2 6或 Con A刺激脾细胞 ,用 EL ISA法检测脾细胞上清液中 s IL 2 - R和 IFN -γ含量。结果疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 ,s IL- 2 R和 IFN- γ水平显著升高 ;动态观察发现 s IL- 2 R和 IFN- γ分别于免疫后 8~ 10周和 4~ 8周达最高水平。结论日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗可加强宿主 Th1反应 ,促进 Th1细胞分泌 IL- 2和 IFN- γ,它们与免疫细胞相互作用 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组BCG-Sj26gst疫苗 SIL-2R IFN-Γ
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日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠保护力的观察 被引量:4
11
作者 李文桂 石佑恩 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期300-303,共4页
目的探讨日本血吸虫重组BCG鄄Sj26GST疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护作用。方法采用106和108CFU疫苗皮下接种免疫BALB/C鼠,免疫后8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后6周剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,观察肝脏病理变化,测量虫卵... 目的探讨日本血吸虫重组BCG鄄Sj26GST疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护作用。方法采用106和108CFU疫苗皮下接种免疫BALB/C鼠,免疫后8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后6周剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,观察肝脏病理变化,测量虫卵肉芽肿周长和面积,测定血清中CAg、IgG及其亚类水平,同时设有PBS和BCG对照。结果疫苗接种组的减虫率为16.64%~46.20%,减卵率为55.75%~60.50%,肝组织病变明显减轻,虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积显著减少,血清IgG和IgG2a水平明显升高,108CFU组CAg升高。结论日本血吸虫重组BCG鄄Sj26GST疫苗是一种新型比较理想的疫苗,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组BCG-Sj26gst疫苗 免疫接种 小鼠 保护力
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日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠脾细胞TNF-α和IL-1变化的研究 被引量:3
12
作者 李文桂 石佑恩 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期172-174,共3页
目的 研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞产生 TNF-α和 IL - 1的影响。方法 实验 1分别采用 10 6 CFU和 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/C鼠 ,免疫后 8w用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6 w剖杀小鼠 ,同时设有 PB... 目的 研究日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗对小鼠脾细胞产生 TNF-α和 IL - 1的影响。方法 实验 1分别采用 10 6 CFU和 10 8CFU疫苗皮下免疫 BAL B/C鼠 ,免疫后 8w用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6 w剖杀小鼠 ,同时设有 PBS对照组。实验 2用 10 6 CFU疫苗皮下和静脉注射分别免疫小鼠 ,于免疫后 0、4、8、10、14和 16 w各剖杀 4只 ,分离脾脏 ,用 Sj2 6或丝裂原刺激脾细胞 ,用 EL ISA法检测脾细胞上清液中 TNF-α水平 ,用成纤维细胞增殖法检测 IL - 1的生物活性。结果 疫苗免疫 ,尾蚴攻击后 ,TNF-α和 IL - 1水平显著升高。动态观察发现皮下注射组 TNF-α和 IL - 1于免疫后 4~ 8w达最高水平 ;静脉注射组 TNF-α和 IL - 1分别于免疫后 16 w和 4~ 8w达较高水平。结论 日本血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗促进小鼠脾细胞较早分泌 TNF-α和IL - 1。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组BCG-Sj26gst疫苗 NF-Α IL-1
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血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗接种BALB/c鼠后肝脏病理学变化 被引量:4
13
作者 李文桂 石佑恩 +1 位作者 陈焰 陈林 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2000年第2期139-141,共3页
血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗是一种新型疫苗。本文用 10 6克隆形成单位 ( Colony- froming unit,CFU)和10 8CFU疫苗皮下接种 BAL B/ c鼠 ,接种后 8wk用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6 wk剖杀小鼠 ,分离肝脏 ,观察其病理学变... 血吸虫重组 BCG- Sj2 6 GST疫苗是一种新型疫苗。本文用 10 6克隆形成单位 ( Colony- froming unit,CFU)和10 8CFU疫苗皮下接种 BAL B/ c鼠 ,接种后 8wk用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染 ,感染后 6 wk剖杀小鼠 ,分离肝脏 ,观察其病理学变化 ,同时设 PBS对照组。光镜下观察发现肝脏病变明显减轻 ,肉芽肿数目少 ,体积小 ;电镜观察发现肝组织病变轻微 ,大部分肝细胞变性 ,肝纤维组织增生 ,有嗜酸粒细胞和淋巴细胞浸润。这些结果为阐明血吸虫重组 BCG- Sj2 6 展开更多
关键词 血吸虫重组BCG-Sj26gst 病理学 血吸虫病
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重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠体液免疫应答的动态观察 被引量:3
14
作者 李文桂 石佑恩 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期24-26,36,共4页
目的 检测日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和循环抗原 (circulat ingantigen ,CAg)反应。方法  1× 10 6克隆形成单位 (colony formingunit,CFU)疫苗皮下和静脉注射免疫BALB/c鼠 ,分别于免疫... 目的 检测日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和循环抗原 (circulat ingantigen ,CAg)反应。方法  1× 10 6克隆形成单位 (colony formingunit,CFU)疫苗皮下和静脉注射免疫BALB/c鼠 ,分别于免疫后 0、4、8、10、14和 16周各剖杀 4只 ,收集血清 ,常规ELISA法检测IgG及其亚类和CAg ,同时设PBS皮下注射对照组。结果皮下注射组IgG在免疫后 10周 ,IgG1在免疫后 14~ 16周 ,IgG2a在免疫后 4周和IgG2b在免疫后 16周达最高水平 ,未能测到CAg ;静脉注射组IgG在免疫后 10周 ,IgG1和IgG2a在免疫后 8周以及IgG2b在免疫后 16周达最高水平 ,CAg在免疫后 14周升高。结论 日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗能诱导宿主产生高水平的IgG、IgG2a和IgG2b 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组BCG-Sj26gst疫苗 IGG IGG亚类 CAG 免疫应答 小鼠
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日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和CAg的动态观察 被引量:2
15
作者 李文桂 石佑恩 +2 位作者 田音 周小林 汪娟 《重庆医学》 CAS CSCD 2001年第6期481-483,共3页
目的 检测日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和CAg反应。 方法 10 6CFU疫苗皮下和静脉注射免疫BALB/C鼠 ,分别于免疫后 0、4、8、10、14、16周各剖杀 4只 ,收集血清 ,常规ELISA法检测IgG及其亚类和... 目的 检测日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和CAg反应。 方法 10 6CFU疫苗皮下和静脉注射免疫BALB/C鼠 ,分别于免疫后 0、4、8、10、14、16周各剖杀 4只 ,收集血清 ,常规ELISA法检测IgG及其亚类和CAg。结果 皮下注射组IgG在免疫后 14周 ,IgG1在免疫后 14~ 16周 ,IgG2a在免疫后 4周和IgG2b在免疫后 16周达最高水平 ,未能测到CAg ;静脉注射组IgG在免疫后 10周 ,IgG1和IgG2a在免疫后 8周以及IgG 2b在免疫后 16周达最高水平 ,CAg在免疫后 10周升高。结论 日本血吸虫重组BCG Sj2 6GST疫苗能诱导宿主产生高水平的IgG、IgG2a和IgG2b,静脉注射的免疫效果优于皮下注射。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组BCG-Sj26gst疫苗 IgGIgGg亚类 CAG
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日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠脾细胞动态观察 被引量:2
16
作者 张丽 李文桂 谭建蓉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1028-1032,1038,共6页
目的观察日本血吸虫重组Bb(pGEX—Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射(SC组)和鼻腔粘膜接种(IN组)免疫BALB/c鼠,在免疫后O~22周每2周每组随机剖杀4只小鼠,无菌取脾,... 目的观察日本血吸虫重组Bb(pGEX—Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射(SC组)和鼻腔粘膜接种(IN组)免疫BALB/c鼠,在免疫后O~22周每2周每组随机剖杀4只小鼠,无菌取脾,制成单个悬浮脾细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测脾细胞增殖水平、用流式细胞仪(FACsort)检测T细胞亚群和脾细胞凋亡状况。结果未刺激及sjAWA刺激时SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后4~20周明显升高,ConA刺激时于4~18周显著升高,均于免疫后8周达最高水平;IN组脾细胞增殖水平原液组、SjAwA组和ConA组分别于2~18周、2~10周及14~18周、2~8周和12~18周显著升高,均于免疫后4周达最大值(P〈0.01或P〈0.05)。SC组和IN组CD+T细胞分别于免疫后2~14周、2周及6~16周升高,并于8周达峰值(P〈0.01或P〈0.05);两组CD+T细胞均于2~20周轻微升高,分别于8周和6周达较高值(P〉0.05)。未刺激和ConA刺激时SC组脾细胞凋亡水平分别于免疫后2~4周、2~6周升高显著,均于免疫后2周达最大值(P〈O.01或P〈O.05);IN组均于4周显著升高并达峰值(P〈O.01)。结论日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗可诱导脾细胞的增殖,增加cD+T细胞的数目,抑制脾细胞的凋亡而发挥保护性免疫应答。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组Bb(pGEX—Sj26gst)疫苗 脾细胞增殖 T细胞亚群 脾细胞凋亡
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重组GP5AB蛋白间接ELISA检测PRRSV抗体方法的研究 被引量:6
17
作者 顾小雪 姜平 +1 位作者 韩研妍 李玉峰 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第2期1-5,共5页
利用GST-GP5AB重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法。抗原最适包被浓度为2μg/mL,最佳封闭液为0.15%BSA,37℃封闭2 h后,再4℃封闭24 h,血清最适稀释度为1∶200,其... 利用GST-GP5AB重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法。抗原最适包被浓度为2μg/mL,最佳封闭液为0.15%BSA,37℃封闭2 h后,再4℃封闭24 h,血清最适稀释度为1∶200,其作用时间为60m in,酶标抗体最适稀释度为1∶20 000,最适作用时间为90 m in,37℃显色10 m in,S/P≥0.284为阳性,S/P≤0.26为阴性,介于二者之间为可疑的判定标准。该抗原与猪其他4种临床症状类似的疾病的阳性血清反应呈阴性。批内和批间重复性试验结果,变异系数均小于7%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用本方法初步检测了一些疫苗免疫仔猪血清样品,并与重组N蛋白和PRRSV抗原同时进行比较,结果显示3种抗原检测的结果基本一致。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 间接ELISA 重组gst—GPSAB蛋白
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日本血吸虫重组Bb疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠不同时间诱导的免疫应答作用 被引量:2
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作者 张丽 李文桂 谭建蓉 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期69-76,共8页
目的:探讨日本血吸虫重组两歧双歧杆菌(rBb)疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠后不同时间诱导的免疫应答作用,阐明该疫苗的免疫应答机制。方法:将88只BALB/c小鼠随机分为2组,每组44只,分别经皮下注射(皮下注射组,SC组)和鼻腔黏膜(鼻腔... 目的:探讨日本血吸虫重组两歧双歧杆菌(rBb)疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠后不同时间诱导的免疫应答作用,阐明该疫苗的免疫应答机制。方法:将88只BALB/c小鼠随机分为2组,每组44只,分别经皮下注射(皮下注射组,SC组)和鼻腔黏膜(鼻腔黏膜接种组,IN组)接种免疫小鼠,在免疫后0-20周每2周每组随机取4只小鼠,无菌取脾,制备悬浮脾细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测脾细胞增殖活性,流式细胞仪(FACsort)检测T细胞亚群和脾细胞凋亡率,双抗体夹心ELISA法检测脾细胞上清液中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素17(IL-17)的动态变化。结果:与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞增殖活性于免疫后8周达到峰值(P〈0.05),IN组小鼠于免疫后4周达到峰值(P〈0.05)。与免疫0周时比较,SC组和IN组小鼠CD4+T细胞均于免疫后8周达到峰值(P〈0.05);CD8+T细胞分别于8周和6周达到峰值,但差异无统计学意义(P〉0.05)。与免疫0周时比较,2组小鼠脾细胞上清液中IFN-γ水平均于免疫后2周达到峰值(P〈0.05),SC组和IN组IL-17水平分别于免疫后14和12周达到峰值(P〈0.05)。与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞凋亡率于免疫后2周达到峰值(P〈0.05),IN组于4周达到峰值(P〈0.05)。IN组与SC组小鼠各检测指标比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论:经皮下注射和鼻腔黏膜途径接种的日本血吸虫重组Bb疫苗早期即可诱导小鼠产生有效的免疫应答,以Th1型免疫应答为主,2种免疫途径所诱导的免疫应答无明显差异。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组两歧双歧杆菌(pGEX-Sj26gst)疫苗 脾细胞 细胞增殖 细胞凋亡 T细胞亚群 细胞因子
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日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达 被引量:1
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作者 李文桂 肖邦忠 +2 位作者 罗兴建 陈雅棠 吴成果 《热带医学杂志》 CAS 2010年第2期147-152,共6页
目的构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达情况。方法超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Sj26GST和S... 目的构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达情况。方法超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Sj26GST和Sj32,得到Sj26GST-Sj32融合基因,克隆至原核表达载体pET32α(+),构建重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定。结果基因拼接法扩增出约1991bp的Sj26GST-Sj32融合基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST-Sj32融合基因成功插入pET32α(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子质量约82000Mr的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的22%;Western-blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建了日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组质粒pET32α—Sj26gst—Sj32 大肠埃希菌 表达
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日本血吸虫重组质粒pET28α-Sj26GST的构建及其表达
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作者 李文桂 肖邦忠 +2 位作者 罗兴建 陈雅棠 吴成果 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期760-763,770,共5页
目的构建日本血吸虫重组质粒pET28α-Sj26GST,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎日本血吸虫成虫,提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST抗原编码基因,克隆至原核表达载体pET28α,构建重组质粒pET28α-Sj26GST,转化... 目的构建日本血吸虫重组质粒pET28α-Sj26GST,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎日本血吸虫成虫,提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST抗原编码基因,克隆至原核表达载体pET28α,构建重组质粒pET28α-Sj26GST,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果 RT-PCR扩增出676 bp的Sj26GST基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST基因成功插入pET28α中,SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约为36×103的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的26%;Western blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建了日本血吸虫重组质粒pET28α-Sj26GST,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组质粒pET28α-Sj26gst 大肠埃希菌 表达
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