铜绿假单胞菌oprI基因DNA疫苗及其重组亚单位疫苗免疫效果的评估

为评估铜绿假单胞菌opr I基因DNA疫苗和重组亚单位疫苗对小鼠的免疫效果,本实验将铜绿假单胞菌外膜蛋白编码基因opr I克隆至真核表达载体p CAGGS-HA中构建重组质粒p CAGGS-opr I,经酶切鉴定正确后获得DNA疫苗。同时将opr I基因克隆至原核表达载体p ET32a中构建重组质粒p ET32a-oprI,经酶切鉴定正确后转入大肠杆菌,经IPTG诱导重组Opr I蛋白(rOprI)的表达,采用亲和层析法纯化后以SDS-PAGE检测,结果显示正确表达了r Opr I,且获得了其纯化蛋白,利用其制备重组亚单位疫苗。分别以DNA疫苗和重组亚单位疫苗免疫BALB/c小鼠,并以铜绿假单胞菌的灭活疫苗和外膜蛋白疫苗为对照,采用间接ELISA法检测免疫后不同时间小鼠血清中的抗体水平和血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的含量;初免42 d后以铜绿假单胞菌(1.25×109 cfu/mL,100μL/只)对各组小鼠进行攻毒试验,通过测定各疫苗对小鼠的保护率,评估疫苗的保护效果。结果显示,各疫苗诱导的免疫小鼠血清抗体水平和细胞因子含量均显著高于阴性对照组(P<0.05),且重组亚单位疫苗诱导小鼠的抗体水平和IL-4含量均显著高于DNA疫苗(P<0.05),而IFN-γ和IL-2含量则与DNA疫苗无显著差异(P>0.05)。小鼠攻毒试验结果显示,DNA疫苗组、重组亚单位疫苗组、外膜蛋白疫苗组和灭活疫苗组小鼠获得的免疫保护率分别为45%、55%、70%和95%。上述结果首次表明以铜绿假单胞菌opr I基因制备的DNA疫苗和r Opr I重组亚单位疫苗均可诱导小鼠产生体液和细胞免疫应答,并可为小鼠提供对铜绿假单胞菌攻毒的免疫保护效果,但二者的免疫效果还需进一步提高。本研究为铜绿假单胞菌疫苗的研究提供了参考依据。

佐剂重组带状疱疹疫苗用于50岁以上人群的快速卫生技术评估

目的 评价佐剂重组带状疱疹疫苗(RZV)用于50岁以上人群的有效性、安全性、经济性,为临床药物选择和决策提供循证证据。方法 采用快速卫生技术评估(HTA)方法,计算机检索PubMed、Cochrane Library、Embase、CNKI、万方和维普等数据库及相关HTA网站,检索时间均为数据库建库至2023年5月。由两名研究者根据纳入标准、排除标准进行文献筛选、数据提取和质量评价,对研究结果进行综合性定性分析与比较。结果 共纳入13篇研究,包括4项meta分析/系统评价和9篇药物经济学研究。在有效性方面,RZV具有更高的有效性、疫苗效力、预防带状疱疹神经痛的效力和预防带状疱疹眼的效力,优于带状疱疹减毒活疫苗和安慰剂;在安全性方面,RZV的注射部位不良反应发生率增加(包括注射部位发红、肿胀、疼痛;全身不良事件;严重不良事件和死亡),差异不具有统计学意义;在经济学研究方面,RZV更具有经济学优势。结论 基于当前有限的证据,RZV用于50岁以上人群预防带状疱疹和并发症发生的有效性、安全性、经济性均较好,但使用时需格外注意免疫力低下的人群,该研究仍需进一步研究和临床实践予以证实。

接种重组乙型肝炎疫苗疑似预防接种异常反应1例的调查

2024年5月,某乡镇卫生院预防接种门诊报告疑似预防接种异常反应(AEFI)1例,受种者在接种重组乙型肝炎疫苗后发生病毒感染致脑病、惊厥、肺炎等事件,家属怀疑与接种疫苗有关。为明确受种者发病与接种疫苗是否存在因果关系,县、乡镇两级专业人员根据AEFI监测方案对该病例开展个案调查。7月3日,市级预防接种异常反应调查诊断专家组成员共5人,通过调查资料、阅读疫苗生产企业的自查报告后讨论、分析,最后形成调查诊断:该病例发病原因符合感染引起的疾病,该病例接种的疫苗为灭活疫苗,不会引起感染,与疫苗接种无关。这提示,新生儿为健康安全弱势人员,在以后的预防接种工作中要借鉴既往非免疫规划疫苗的经验,基层接种单位要严格把关预检质量,牢记疫苗禁忌证等,做好宣传。

基于毕赤酵母制备的SARS-CoV2RBD-重组蛋白疫苗的免疫方案优化及不同佐剂对中和抗体滴度的影响

目的对基于毕赤酵母制备的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD重组蛋白疫苗的免疫方案进行优化并考察不同佐剂对中和抗体(NAb)滴度的影响,为SARS-CoV-2疫苗的持续优化研究提供参考。方法将RBD基因片段亚克隆至pPICZαA质粒,质粒经线性化转化后整合到毕赤酵母基因组中进行重组表达,将获得的重组蛋白疫苗联合不同的佐剂对小鼠进行免疫以评估其免疫原性。结果目标蛋白wtRBD和Delta RBD均能通过毕赤酵母系统获得满意过表达;与42 d间隔时间相比,28 d间隔时间的IgG抗体滴度增加了1.8倍(44923 vs.80507);间隔28 d的3剂免疫后,针对Delta变体的NAb几何平均滴度比间隔42 d高2.5倍(2191 vs.891);Delta RBD重组蛋白疫苗联合铝佐剂免疫后,针对Delta变体的NAb几何平均滴度达到了32255(2167~88084);在采用5μg或30μg Delta RBD免疫情况下,铝佐剂+CpG佐剂组的NAb滴度均为单独采用铝佐剂组的10倍左右;第3次免疫后,5μg抗原组与30μg抗原组中Delta RBD特异性IgG滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于毕赤酵母制备的wtRBD或Delta RBD都可以用作有效的抗原,间隔28 d的3剂疫苗给药最有效,Delta RBD重组蛋白与铝佐剂+CpG佐剂的联合免疫能够获得更高滴度的NAb以对SARS-CoV-2及其变体发挥免疫作用,可为SARS-CoV-2疫苗的持续优化研究提供一定参考。

猪附红细胞体eno基因重组腺病毒疫苗对仔猪免疫效果的研究

为了评价猪附红细胞体eno基因重组腺病毒疫苗(Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗)对仔猪的免疫效果,试验将12头仔猪随机分为3组,分别为Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组、重组空载体腺病毒组和PBS对照组,分别于3组仔猪的颈部肌肉注射Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗(浓度为1×10^(10)pfu/mL)、空载体重组腺病毒(浓度为1×10^(10)pfu/mL)和PBS各2.5 mL,于试验第0,21天分两次免疫。第2次免疫后第14天,麻醉后手术切除仔猪脾脏,采用密度梯度离心法提取猪脾脏淋巴细胞,利用流式细胞仪检测仔猪CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞含量。于第1次免疫前(第0天)及免疫后第7,14,21,28,35,42,49天无菌采集各组试验猪的颈静脉血,分离血清,检测每组仔猪抗猪附红细胞体特异性抗体IgG效价及IgG_(1)、IgG_(2a)和细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)水平,评价Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗对仔猪的细胞与体液免疫应答效果。结果表明:Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组的CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞含量极显著高于重组空载体腺病毒组和PBS对照组(P<0.01),Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组的CD4^(+)/CD8^(+)显著高于重组空载体腺病毒组和PBS对照组(P<0.05),重组空载体腺病毒组和PBS对照组之间的CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞含量及CD4^(+)/CD8^(+)差异不显著(P>0.05)。免疫后第28,35,42,49天,Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组的抗猪附红细胞体特异性IgG抗体效价及IgG_(1)、IgG_(2a)和细胞因子IL-4和IFN-γ水平极显著高于重组空载体腺病毒组与PBS对照组(P<0.01),重组空载体腺病毒组与PBS对照组之间差异不显著(P>0.05)。说明猪附红细胞体eno基因重组腺病毒疫苗可以诱导仔猪产生强烈的细胞免疫和体液免疫应答。

接种重组带状疱疹疫苗(CHO细胞)偶合带状疱疹性神经痛1例

采用流行病学方法提取受种者、疫苗生产企业和接种方相关资料,对接种重组带状疱疹(HZ)疫苗(CHO细胞)后出现的1例HZ性神经痛(PHN)病例开展调查,评估PHN与疫苗接种的因果关系,并为防止类似事件提供科学依据。根据疫苗接种与临床表现的时间和因果关联等确定所患PHN与疫苗无因果关系,不属于预防接种异常反应,属偶合症。重组HZ疫苗是目前预防HZ安全、有效的手段。

重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗免疫黄鸡抗体水平分析

H5或H7亚型高致病性禽流感是一种高度致死性传染病,它不仅给养禽业造成了巨大的危害和损失,还威胁着人类的生命健康安全。为了分析重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+H5N1 Re-12株和H7N9 H7-Re3株)免疫抗体水平,本研究对如皋市内14个养殖场近2万只黄鸡进行重组禽流感病毒三价灭活疫苗肌肉注射,免疫三周后,随机采集420份血液样品进行HI抗体效价检测。结果表明,免疫后的鸡群均无明显不良反应,可以诱导黄鸡产生良好的抗体,检测时具有较高的抗体效价,H5亚型Re-11株平均抗体效价为7.8log2,Re-12株平均抗体效价为8.2log2,H7亚型Re-3株的平均抗体效价为6.8log2,并且免疫抗体合格率均达到70%以上,对黄鸡具有良好的安全性和免疫保护效果,研究结果为有效地控制高致病性禽流感提供参考依据。

基于重组蛋白新冠疫苗生产现场的检查要点分析

新冠疫情使人们普遍认识到疫苗对于公共卫生的重要性,重组蛋白疫苗作为重要的疫苗类型,因其保护效力和安全性的优势受到广泛关注。重组蛋白疫苗的生产一般包括种子库的建立和检定、原液生产、制剂生产、质量检验等过程。现场检查中需要重点关注蛋白生物活性的工艺控制,随着重组蛋白疫苗关注度的提升,生产现场检查规范的建立与完善成为一个重要课题。

成人乙肝疫苗接种中不同剂量国产重组酵母乙肝疫苗作用差异

目的研究成人乙肝疫苗接种中不同剂量国产重组酵母乙肝疫苗作用差异。方法选取2019年3月—2022年12月烟台市莱山区疾病预防控制中心接收的182例需接受国产重组酵母乙肝疫苗接种者作为研究对象,利用Excel函数法分对照组和试验组,每组91例。对照组接种剂量为5μg,试验组接种剂量为10μg,以表面抗体平均几何滴度、表面抗体转阳率比较不同剂量所发挥免疫效果。结果试验组不良反应发生率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),且整体不良反应发生率均明显较低。试验组表面抗体平均几何滴度、表面抗体平均几何滴度>10 mIU/mL人数占比、表面抗体转阳率均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在进行国产重组酵母乙肝疫苗接种过程中,接种剂量为10μg的效果显著优于接种5μg。因此,在进行成人国产重组乙肝免疫疫苗接种过程中可适量增加剂量,并将剂量调整至10μg,进而提升接种质量,有效降低乙肝发生率。

鸡新城疫病毒F基因和鸡IL-2重组DNA疫苗的构建

利用已克隆到的新城疫D2 6株F基因和鸡IL_2基因 ,经过载体改建 ,将他们共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上 ,经酶切分析、PCR鉴定证实成功构建了共表达鸡新城疫病毒F基因和鸡IL_2的重组质粒 。

国产乙型肝炎酵母重组疫苗接种小学生的免疫效果观察

采取０、１和２月免疫程序，对４８０名６～１２岁健康小学生接种３批国产乙肝酵母重组疫苗和１批对照Ｍｅｒｃｋ乙肝酵母重组疫苗。接种的小学生中未发生严重副反应者。完成２针免疫后，两种疫苗的抗体阳转率均在９２％以上；３针免疫后各组抗体阳转率均达到９８％；但３组国产酵母疫苗的抗体滴度均显著低于Ｍｅｒｃｋ疫苗。首免后１年时各组抗体ＧＭＴ缓慢下降。结果表明，国产酵母重组疫苗安全性好，采取０、１和２月免疫程序，可诱导较早及较高的抗体应答。

禽流感重组禽痘病毒rFPV-HA-NA活载体疫苗的研究

目的 确定重组禽痘病毒rFPV HA NA疫苗株的最佳免疫剂量、免疫日龄、免疫产生时间及免疫持续期。方法 用重组禽痘病毒rFPV HA NA疫苗免疫SPF鸡 ,免疫后用HPAIVH5N1和H7N1AIV进行致死性攻击 ,观察疫苗免疫后的保护效果。结果 大约含 10 0个PFU的重组病毒即能使机体获得对强毒攻击的 10 0 %保护 ;对 1日龄SPF鸡进行免疫接种 ,4周后能 10 0 %抵抗HPAIV的致死性攻击 ;2周和 3周龄的免疫鸡对免疫周 1后的强毒攻击具有 10 0 %的保护力 ;重组病毒在免疫后10个月时 ,其诱导产生的血凝抑制 (Haemagglutinininhibition ,HI)抗体仍保持在 2～ 3log2水平 ,并可以提供 10 0 %抵抗病毒的致死性感染。结论 重组禽痘病毒rFPV HA NA疫苗是一种安全、高效的基因工程疫苗 。

不同种类乙型肝炎基因重组疫苗接种小学生2年抗体反应效果观察

应用４批国产ＣＨＯ乙肝疫苗和２批进口酵母乙肝疫苗（Ｍｅｒｃｋ，Ａｍｇｅｎ），对３７０名小学生进行了２年（Ｔ２４）免疫效果观察。完成首针免疫后３月、（Ｔ３）７月、（Ｔ７）和１２月（Ｔ１２）时，各疫苗组的抗体阳转率均达９０％以上，其后开始下降。Ｔ７时国产ＣＨＯ疫苗抗体滴度与进口酵母疫苗无明显差异。Ｔ１２时Ａｍｇｅｎ疫苗组抗体ＧＭＴ显著高于其他各疫苗组。Ｔ２４时Ｍｅｒｃｋ苗组和一批ＣＨＯ苗组抗体滴度显著低于其他各疫苗组。结果表明国产ＣＨＯ疫苗抗体反应达到进口酵母疫苗水平。

乙型肝炎病毒HBsAg重组疫苗与表面抗原DNA疫苗诱导H-2~b小鼠免疫应答的实验研究

目的:观察重组乙肝疫苗及乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原DNA疫苗接种后,C57BL/6(H-2b)小鼠的免疫应答.方法:构建质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S.转染COS7细胞系进行表达.将C57BL/6小鼠分为5组,分别接种质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S,pVR1012100μg及重组乙肝疫苗1μg.ELISA法检测小鼠血清抗-HBs.结果:DNA疫苗在转染细胞中可表达HBsAg.血清抗-HBs在第一次接种重组乙肝疫苗后即可检出,而在DNA疫苗组则未检出.此后重组疫苗组诱导的抗-HBs的滴度与DNA疫苗组相似.结论:HBV表面抗原DNA疫苗在H-2b小鼠试验中有体液免疫原性.

犬细小病毒核酸疫苗、重组活载体疫苗与弱毒疫苗免疫犬实验研究

分别用犬细小病毒(CPV)核酸疫苗(pVCPV-VP2)、CPV重组活载体疫苗(CAV2/CPV)与CPV弱毒疫苗对犬进行了免疫试验,以检测不同CPV疫苗的免疫原性。采用CPV ELISA、CPV HI与CPV微量中和试验检测免疫犬的体液免疫水平,采用淋巴细胞转化试验检测犬的细胞免疫水平。结果,pVCPV-VP2和CAV2/CPV均能诱导机体产生抗CPV ELISA抗体与抗CPV中和抗体,但是pVCPV-VP2不能诱导机体产生可检测的抗CPV HI抗体,而CAV2/CPV能够诱导机体产生抗CPV HI抗体。淋巴细胞转化试验结果,pVCPV-VP2和CAV2/CPV免疫犬的外周血淋巴细胞对ConA与CPV的刺激均出现明显的增殖反应。结果表明,pVCPV-VP2和CAV2/CPV免疫犬均能诱导机体产生抗CPV的特异性体液免疫反应和细胞免疫反应,两者所表达的VP2蛋白均具有较好的免疫原性。CAV2/CPV以及pVCPV-VP2和CAV2/CPV联合免疫犬的抗CPV体液免疫水平和细胞免疫水平均比用pVCPV-VP2单独免疫犬的体液免疫水平和细胞免疫水平高。但CAV2/CPV诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应仍然比CPV弱毒疫苗诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应弱。另外,CAV2/CPV还能诱导机体产生抗CAV-2的特异性免疫反应。

两种重组乙型肝炎疫苗免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性

目的比较5μg/剂重组乙型肝炎疫苗(酵母)和10μg/剂重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性。方法1151和996名6￣12岁儿童分别按0,1,6月免疫程序接种14批酵母疫苗和5批CHO疫苗,于第1针免后3(T3)、7(T7)、12(T12)、24(T24)、36(T36)、60(T60)月检测抗-HBs应答,分别对接种10批酵母、5批CHO,4批酵母、4批CHO,2批酵母和2批CHO疫苗的儿童进行首针免疫后T24、T36和T60的随访,采用放免法(RIA)检测抗-HBs水平。结果首针免疫后12个月内,接种两种疫苗的儿童抗体阳转率和抗体滴度差异均无显著意义;T24、T36时,接种CHO疫苗的儿童抗体阳转率显著高于酵母疫苗。结论应提高酵母疫苗免疫儿童现用剂量。

干扰素用于重组乙肝疫苗的佐剂作用

目的 为了提高乙肝疫苗的免疫原性。方法 在重组乙肝疫苗中加入不同单位的干扰素构成复合佐剂 ,通过小鼠腹腔和肌肉两种免疫途径 ,对疫苗的体液免疫和细胞免疫进行了检测。结果 干扰素作为复合铝佐剂 ,无论是对体液免疫还是细胞免疫 ,效果均较对照明显提高。结论 不同亚型的IFN作为乙肝疫苗佐剂 ,均可提高疫苗的免疫原性。

同尾酶技术在构建疟疾多价重组DNA疫苗中的应用

同尾酶是一类识别不同核苷酸序列但能酶切产生相同粘性末端的限制性内切酶，依靠同尾酶的这种特性，可以根据需要将不同的ＤＮＡ 片段进行灵活组合，获得各种排列顺序的多价表位重组疫苗．将这种方法用于疟疾多价重组ＤＮＡ 疫苗的研制；ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠免疫实验对所得重组疫苗ＰＵ２８６的免疫原性进行了测定．

乙型肝炎病毒基因重组疫苗免疫儿童成人效果及阻断母婴传播的研究

以中试连续生产的6批乙肝基因重组疫苗(R—Hepavac—B)免疫儿童和成人,每剂10μg,3批苗按0、1、6月,另3批苗按0、1、2月方案接种。每批分别接种8～10岁儿童51～66人,6批共363人,18～20岁成人46～52人,6批共287人。同时用两批血源苗作对照,分别接种儿童共85人,成人84人。又用其中89—10批HBsHg含量为20μg/ml的疫苗,按20μg×3,0、1、6月方案接种HBsAg和HBeAg双阳性母亲所生婴儿36名,HBsAg阳性母亲的婴儿19名。结果显示,10μg重组疫苗3针后,无论儿童和成人其抗HBs抗体阳转率均为100％,而对照,儿童成人各有1例未阳转。儿童按0、1、6方案接种者,其抗体GMT为363.8～470.5mIU,按0、1、2方案接种者,为150.8～195.5mIU。前者高于血源苗对照,而后者持平。成人0、1、6方案GMT为189.4～247.2mIU,0、1、2方案为87.9～96.3mIU,均略低于血源苗对照.经复测,此批血源苗含量为15μg/ml,高于基因苗含量,可能是造成以上结果的原因。母婴阻断结果显示,双阳性母亲子女36人,3针免后86.1％(32/36)的婴儿获得保护。单阳性母亲子女19人全部获得保护。

多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb/c小鼠引起的免疫应答

目的 观察多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法 在成功构建多房棘球绦虫elp基因原核表达载体 (pQ ELP)的基础上 ,以亲和层析法纯化重组蛋白 ,SDS PAGE鉴定 ,Bradford法进行定量。用ELP重组蛋白 (A组 )及ELP重组蛋白加弗氏佐剂 (B组 )免疫Balb c小鼠 (10只 组 ) ,以生理盐水 (NS组 )作对照。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1,IgG2a和IgG2b水平。双抗体夹心ELISA试剂盒检测免疫鼠脾脏单个核细胞 (PMNC)在受到特异抗原刺激后 ,产生IL 4、IL 12和IFN γ的能力 ,3H TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增殖能力。结果 本研究成功获得高纯度重组蛋白ELP。首次免疫后 2周 ,A、B组小鼠均产生了大量的特异IgG1抗体 ,B组还产生了少量的特异IgG2b抗体。除B组小鼠脾PMNC产生了微量IFN γ外 ,A组、NS组IFN γ及各组IL 4和IL 12均未检出。A、B组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高 ,其淋巴细胞CPM值分别为NS组的 2 .8和 10 .8倍 ,受到多房棘球绦虫抗原或刀豆素刺激时 ,A、B组淋巴细胞增殖更明显。结论 多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗可引起很强的体液免疫应答和微弱的细胞免疫应答 。