表达绿色荧光蛋白的重组1型禽腺病毒的构建

目的构建表达绿色荧光蛋白的重组禽腺病毒。方法通过带有禽腺病毒基因组复制非必需区（nt40065～nt43684）侧翼序列和增强型绿色荧光蛋白基因的转移质粒与亲本禽腺病毒在鸡肝癌细胞内同源重组，缺失掉了两侧翼序列之间的复制非必需区而替换为增强型绿色荧光蛋白基因的完整表达盒。为提高同源重组率，对质粒转染细胞的条件进行了摸索，确定了最佳转染条件为细胞以3×10^5／ml密度接种到6孔板上，36h后用8μl lipofectamine 2000试剂和3她pUC—LR—eGFP质粒转染，蚀斑方法筛选重组病毒。结果获得了表达EGFP的重组病毒单一克隆株rFAV—I-eGFP。结论研究结果为开展禽类活载体疫苗研制及相关基础研究提供了有利参考。