鸭疫里默氏杆菌重组蛋白P25间接ELISA检测方法的建立

以鸭疫里默氏杆菌血清1型(RA 1)基因组文库中筛选获得的一种"保守假定蛋白P25"基因的重组表达产物为包被抗原,建立了检测RA血清抗体的间接ELISA。诱导表达的重组P25蛋白纯化后进行包被,十字交叉滴定试验确定,此ELISA的最适抗原包被浓度为0.6μg/mL,血清最佳稀释度为1∶64,与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌感染鸭血清无交叉反应。以RA 1的P25为包被抗原对RA 2、5、8、10血清型的标准分型血清和经临床剖检诊断的病鸭血清进行检测,其结果均为阳性。以RA 1型的P25基因设计的特异性引物分别扩增出了RA 2、5、8、10的P25基因。所扩增的P25基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列和抗原表位在这些不同血清型间高度保守,提示此P25蛋白是各种血清型RA间的共同抗原,所建立的ELISA可以用于检测不同血清型RA的感染。