柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)BJ株SO7重组抗原的免疫试验

将柔嫩艾美耳球虫 ( Eimeria tenella) BJ株 SO7基因插入 p Thio His B载体中 ,构建了 1个表达载体 ,命名为 p Thio His SO7。将此表达载体转入大肠杆菌 DH5α,经 IPTG诱导表达后 ,用 SDS-PAGE检测表达产物。结果表明 ,含 p Thio His SO7质粒的工程菌具有明显的表达产物 ,表达效率为 1 7.1 %。用超声波粉碎仪裂解含重组抗原的工程菌 ,加入钾明矾作佐剂 ,用 2个剂量 ( 1 0、1 0 0μg)分别于 4日龄、1 1日龄、1 8日龄 3次免疫雏鸡 ,同时设置 SO7+弱毒株组、SO7+强毒株组、弱毒株组、强毒株组、未免疫未攻毒组和未免疫攻毒组作对照 ,于 2 5日龄用 3× 1 0 4个 E.tenella强毒卵囊进行攻毒。结果表明 ,用大剂量 SO7重组抗原免疫 ( 3次 ) ,鸡可获得部分保护力 ,其病变计分比未免疫攻毒组下降 3 1 %。

柔嫩艾美球虫扬州株SO7抗原基因表达条件的研究

通过RT—PCR扩增柔嫩艾美球虫YZ株折光体SO7抗原基因，并进行克隆和测序。将不舍信号肽编码区片段的S07基因克隆入表达载体pGEX6p-1谷胱甘肽-S-转移酶基因的下游，构建表达质粒pGEX6p-1-SO7，转化宿主菌BL21，获得重组菌。通过建立生长曲线，对诱导条件的摸索，根据SDS—PAGE确定融合蛋白的最佳表达条件。通过融合蛋白切胶免疫小鼠制备超免疫血清，经间接EL-ISA检测其与E。tenella子孢子抗原反应的特异性。结果显示，诱导时机和诱导时间是影响表达的主要因素，诱导温度、1PTG浓度次之；诱导时机以3h为最佳，诱导时间以4．5h为最佳；诱导温度以37℃最佳，0．008～1．000mmol／L的IPTG对表达量的影响不大。在优化的表达条件下，表达产物主要以包涵体存在，表达量占菌体总蛋白的37．5％。间接ELISA结果表明融合蛋白具有一定的免疫原性，保留了天然蛋白的部分抗原性。