抗梅毒螺旋体重组蛋白Tp0453单克隆抗体的制备及应用研究

目的利用基因重组抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0453的单克隆抗体(mAb),评价其在早期梅毒Tp抗原诊断中的应用。方法以重组蛋白Tp0453免疫BALB/c小鼠,将免疫后的小鼠脾脏与SP2/0细胞融合,用间接ELISA和Western Blot检测杂交瘤细胞分泌的抗体,并对阳性细胞经亚克隆建株;体内诱生腹水法制备抗体,用硫酸铵沉淀法对mAb进行纯化并测定其亚类和效价;以自制的mAb建立间接免疫荧光法(IIF)检测梅毒患者分泌物标本,并与镀银染色的检测结果进行比较。结果获得4株稳定分泌抗重组蛋白Tp0453的杂交瘤细胞株,分别命名为15B2、8B9、9C6和2F8,其mAb效价分别为1∶25000、1∶8000、1∶50000、1∶10000;2F8杂交瘤细胞分泌的mAb为IgG2b,其他3株交瘤细胞分泌的mAb均为IgG1;4株mAb腹水经SDS-PAGE均显示出一条分子量约为50kDa的重链条带和一条分子量为26kDa的轻链条带;4株杂交瘤细胞染色体数在90～108范围内变化。IIF显示自制的mAb能与天然的Tp抗原结合,检测86例分泌物标本,IIF与镀银染色的符合率为95.3%。结论本实验成功获得了抗Tp0453重组蛋白的mAb,该mAb能识别天然的Tp0453抗原,有望应用于早期梅毒感染的抗原检测。

胶体金法检测梅毒特异性抗体

目的 : 探讨梅毒螺旋体特异性抗体胶体金法 (TPAb)对梅毒诊断的实用性和优越性。方法 : 用TPAb法对梅毒患者、非梅毒患者血清进行检测 ,同时与快速血浆反应素试验 (RPR)和梅毒螺旋体血凝试验 (TPHA)相比较。结果 : TPAb法检测一期梅毒 2 1例敏感性为 71.4 3% ,高于RPR法 (5 7.14 % )及TPHA法 (6 6 .6 7% ) ;二期梅毒 6 4例 ,TPAb法及TPHA法检测敏感性均为 10 0 % ,高于RPR法 (92 .19% )。同时对 12 5例非梅毒患者血清进行了检测 ,结果全部阴性 ,特异性为 10 0 %。结论 : TPAb法具有较高敏感性和特异性而且简单、方便、快速 。

梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达

随着基因工程技术的迅速发展和梅毒螺旋体（TP）全基因序列的解析，通过重组技术已制备多种重组Tp抗原，并被广泛应用于梅毒血清学检测的研究和试剂盒的开发，但对于哪一种Tp蛋白抗原亿临床各期梅毒的血清学诊断中具有更高的特异性和敏感性尚无一致观点。我们应用软件筛选分析，选取抗原性较啦的Tp外膜蛋白Gpd进行克隆表达。并以重组蛋白为包被抗原，建立间接ELISA法，评价其在悔毒血清学诊断中的应用价值。